牛病毒性腹泻病毒致病分子机制的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)常侵害牛等多种动物,引起一种极为复杂,呈多种临床症状的牛病毒性腹泻-黏膜病,严重危害全球畜牧业的健康发展.BVDV致病机理非常复杂,给该病的防控和净化带来极大的困难.文章从BVDV分子生物学、病毒感染细胞、免疫逃逸、细胞凋亡等方面进行综述,对BVDV与宿主相互作用研究进行了展望,有助于阐明BVDV致病及产生持续性感染的机制.

口蹄疫病毒致病分子机制的研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的,在世界范围内对偶蹄的家畜和野生动物都具有高度传染性.口蹄疫病毒感染后可诱导细胞凋亡、逃避先天免疫系统、产生免疫抑制,并形成持续感染.本文对口蹄疫病毒感染后的上述进程进行了综述,以更好地了解口蹄疫病毒与宿主相互作用的分子机制,为口蹄疫防控和新型疫苗的研发提供策略.

胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展

胆固醇-25-羟化酶(cholesterol-25-hydroxylase,CH25H)为干扰素刺激基因,可通过其酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)发挥广谱的抗病毒作用。本文对CH25H的结构、酶活作用、脂肪代谢通路、抗病毒功能以及在免疫中的作用进行了综述。

RNA-Seq技术在动物病毒传染病学研究中的应用

病原与宿主相互作用，是构成感染的基本因素，RNA—Seq技术的发展推动病原与宿主相互作用研究，已进入全方位系统分析整个转录组水平，能够从整体水平研究差异表达基因以及基因功能，揭示特定生物学过程以及病毒致病的分子机理。现主要介绍了RNA—Seq原理、技术特点及其在动物病毒感染研究中的应用，简略地分析了该技术的不足之处，并对其应用进行了展望。

Viroporins在病毒感染中的作用

Viroporins是一类由病毒编码的小分子疏水性跨膜蛋白,具有1个~3个跨膜结构域,通过寡聚化形成离子通道,主要通过其离子通道活性来增加膜的渗透性,进而影响细胞运输、离子通量以及细胞器之间的连接和交换等基本生物学过程。病毒编码的Viroporins不仅与病毒致病性有关,还参与调节宿主细胞的电化学平衡,并影响病毒的复制,因此它们有望成为抗病毒治疗的靶点。不同病毒的Viroporins在结构上具有不同的特点以及对病毒复制的影响、诱导的宿主细胞生物学反应,包括细胞自噬、细胞凋亡、细胞焦亡等方面具有不同的作用。随着生物技术的发展,Viroporins的结构和功能被研究的越来越透彻,为发现新的和更有效的病毒感染抑制剂提供参考。

牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证

为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。

β-连环蛋白慢病毒载体的构建及其基因沉默MDBK细胞系的建立

为了建立稳定干扰牛β-连环蛋白的牛肾细胞(MDBK)系,针对牛β-连环蛋白基因的mRNA设计3对shRNA引物序列,分别构建shRNA慢病毒干扰载体;将牛β-连环蛋白过表达载体和shRNA载体共转染293T细胞,检测shRNA的沉默效率;将筛选有效干扰β-连环蛋白的shRNA载体进行慢病毒包装,并利用包装好的重组慢病毒感染MDBK细胞,通过嘌呤霉素抗性筛选获得单细胞克隆,传代培养后检测β-连环蛋白的表达,获得有效沉默牛β-连环蛋白的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛β-连环蛋白干扰载体pYr-Lvsh-β-CAT1、pYr-Lvsh-β-CAT2、pYr-Lvsh-β-CAT3,均较好地沉默了β-连环蛋白的表达,经嘌呤霉素筛选和Western blot检测获得有效沉默β-连环蛋白的MDBK细胞系。该研究通过β-连环蛋白特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰牛β-连环蛋白的MDBK细胞系,为进一步探讨牛β-连环蛋白与病毒的相互作用及其分子机制奠定基础。