青蒿琥酯抑制FOXP3基因对K562/ADR细胞增殖、凋亡及多药耐药的影响

目的探讨青蒿琥酯(Artesunate)抑制FOXP3基因表达对慢性髓系白血病(CML)耐阿霉素(ADR)细胞株K562/ADR增殖、凋亡及多药耐药的影响,并探讨其作用机制。方法实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测FOXP3 mRNA在K562和K562/ADR细胞中的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测FOXP3蛋白的表达;青蒿琥酯不同质量浓度(2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 mg/L)处理K562/ADR细胞24 h,利用CCK-8法检测不同浓度青蒿琥酯对K562/ADR细胞的细胞毒性,筛选无细胞毒性浓度的青蒿琥酯完成后续实验;RT-PCR法、Western blot法检测无细胞毒性浓度青蒿琥酯处理下FOXP3 mRNA、FOXP3蛋白表达变化;CCK-8法检测ADR对细胞毒性的变化;流式细胞术(FCM)检测ADR平均荧光强度,即蓄积浓度变化。结果 FOXP3基因在CML耐药细胞株K562/ADR中表达升高;无毒剂量浓度青蒿琥酯(2.5、5.0、7.5 mg/L)处理下K562/ADR细胞FOXP3 mRNA、蛋白表达受抑制(P<0.05);K562/ADR细胞胞内ADR毒性增强,浓度升高(P<0.05)。结论 FOXP3基因在CML K562/ADR耐药细胞株中高表达;青蒿琥酯可以通过抑制FOXP3基因表达,增加K562/ADR胞内ADR浓度,逆转多药耐药,且呈一定的剂量依赖性。

维甲酸对高氧环境下原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护机制

目的探讨维甲酸(RA)对高氧环境下原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)损伤的保护机制。方法分离、纯化孕19 d的胎鼠肺组织,得到肺泡Ⅱ型上皮细胞进行细胞培养,待细胞生长至亚汇合(约占瓶底80%以上时)将细胞分为空气组、高氧组、高氧+RA组,其中高氧+RA组加入含有10^(-6)mol/L的RA。空气组置于空气中培养;高氧组与高氧+RA组置于37℃、95%O_2-5%CO_2条件下培养24 h,用测氧仪检测培养皿中的氧浓度。采用流式细胞术(AnnexinV-PI双标记)检测AECⅡ凋亡,Western blot检测Wnt通路中β-catenin蛋白质的表达,PCR检测β-catenin基因的表达。结果高氧组暴露24 h,AnnexinV (+)PI(-)和AnnexinV(+)PI(+)标记的AECⅡ数较空气组及高氧+RA组均显著升高(P <0.01);与空气组比较,高氧组β-catenin蛋白质的表达显著降低,差异有统计学意义(P <0.01),与高氧组比较,高氧+RA组则上调高氧暴露β-catenin蛋白的表达(P <0.01)。结论高氧环境下可导致AECⅡ大量凋亡、坏死;RA通过上调β-catenin蛋白的表达,降低AECⅡ坏死、凋亡,从而对高氧肺损伤起到保护作用。