多抗技术对多种鱼类血清免疫球蛋白的研究

亲和层析纯化鳜鱼血清免疫球蛋白,制备针对鳜鱼血清免疫球蛋白的兔多克隆抗体,采集常见经济鱼类血清25种,利用优球蛋白法纯化血清,通过间接ELISA的方法筛选与兔抗鳜鱼Ig反应的鱼类血清,结合变性还原条件与非变性非还原条件下的蛋白印迹试验显示:制备的兔抗鳜鱼Ig识别鲈形目中鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲹、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非鱼、青石斑鱼、大黄鱼、黑鲷、斜带髭鲷、美国红鱼,鲽形目中的牙鲆、大菱鲆,鮋形目中的褐菖鮋血清免疫球蛋白的重链与轻链。而与鲤形目中的5种鱼,鲇形目中的4种鱼,鳗鲡目中的海鳗、欧洲鳗鲡反应条带较为复杂。嗜水气单胞菌外膜蛋白免疫刺激复合物(ISCOMs)免疫尼罗罗非鱼,间接ELISA法检测免疫组血清中的抗体,利用兔抗鳜鱼Ig多克隆抗体作为二抗,结果显示,与对照组相比,免疫组有较高的抗体水平。