巢式PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用

根据猪瘟病毒的Alfort株、Brescia株和C-株(SK-6)核苷酸序列,利用primer5.0软件设计1对用于一扩引物p1a/p1aB,扩增的片段为305bp,1对用于二扩的引物p2a/p2B,扩增的片段为172bp,建立猪瘟病毒的巢式PCR检测方法。利用该方法对山东某规模化猪场中临床上疑似猪瘟病例的扁桃体、脾、肾等组织进行检测,用引物p1a/p1aB在305bp处扩增出目的条带;引物p2a/p2B在172bp处扩增出更加明显的目的条带,确诊为猪瘟病毒感染。试验结果表明该方法快速检测病料组织中的猪瘟病毒是可行的,在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用,可用于猪瘟临床诊断。

应用DGGE技术分析扇贝养殖海区真核浮游生物种群多样性

为分析扇贝养殖海区真核浮游生物种类和丰度,本研究首先以实验室培养的9种饵料微藻总DNA为模板PCR扩增18S rDNA V1~V3区的高变区序列,筛选用于DGGE分析该扩增序列的变性剂浓度,结果表明,扩增序列长560 bp,DGGE分析可将不同藻种分离开。随后对青岛沙子口扇贝养殖海区9个月份真核浮游生物多样性进行了DGGE分析,结果从9个月份2 m深的海水中总共扩增出38条谱带,其中共有谱带3条,占总数的7.69%,不同月份的特征性谱带11个,占总谱带数的28.2%。不同月份水样中的谱带数显著不同,香农多样性指数为0.4632。相似性分析表明,2009年3和4月养殖海区真核微生物种类相似性最高,为89.7%。基于不同月份水样微生物种类多样性进行UPGMA聚类分析,结果表明,2008年5,6,8月和2009年1,2,3,4月分别聚为一支,显示取样时间相近的月份微生物种类相似度最高。

日粮粗纤维水平对莱芜猪及其杂交猪氮代谢及营养物质消化率的影响

采用全收粪尿和回肠瘘管法研究了日粮粗纤维水平和不同杂交组合猪对氮代谢和回肠末端营养物质表观消化率的影响。采用二因子二水平有重复设计,选用4月龄莱芜猪及其杂交猪,饲喂不同粗纤维含量（3%、6%、9%、12%）的日粮。日粮纤维水平对食入氮（IN）、粪氮（FN）、消化氮（DN）、沉积氮（RN）、氮表观消化率影响极显著（P〈0.01）,对尿氮（UN）影响显著（P〈0.05）;杂交组合对IN、FN、DN、RN、ABV影响极显著（P〈0.01）。日粮纤维在较低水平（3%~6%）,CP消化率随粗纤维含量增加而提高,随粗纤维含量增加（6%~12%）,营养物质消化率显著降低（P〈0.05）;杂交组合对干物质、CP、钙（Ca）、磷（P）消化率影响极显著（P〈0.01）,莱芜猪对中性洗涤纤维（NDF）的消化率为51.44%,大约克猪为43.51%,差异显著（P〈0.05）;NDF和酸性洗涤纤维（ADF）表观消化率随试验猪含莱芜猪血统比例的降低而显著降低;日粮纤维在3%~6%范围内,除赖氨酸、蛋外的必需氨基酸（EAA）随日粮纤维水平的增加显著降低;杂交组合对EAA表观消化率除赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸外均不显著（P〉0.05）。日粮纤维对猪营养物质的消化吸收具有正负两方面的效应,杂交组合对氮利用率和粗纤维的消化分解率不同。

水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。

奶牛酒精阳性乳的产生、防治及利用

乳品厂常用酒精试验作为检验牛乳品质优劣的一个指标，同时也用来作为评定牛乳酸度变化的依据。取一定量68%~72%的酒精于试管内，加入等量的牛乳混合振摇，出现白色颗粒或絮状物的为阳性，即为酒精阳性乳。市场上鲜牛奶的酸度一般要求不超过20＆#176;T，对制造炼乳的原料一般要求不超过18＆#176;T。凡属酒精阳性乳，不论其酸度高低、加热凝固与否，皆按不合格牛乳品处理的做法是不妥的。

饲料中微生物卫生安全与控制

饲料是动物的“食品”，也是动物产品的原料和食品链中的一员，动物产品中肉、蛋、奶等是人类的食品，可见，饲料安全即食品安全，关系到人类健康。而且随着加入世界贸易组织，饲料的流通与消费形态发生急剧变化，国外的产品进入我国市场的机会增加，虽然我国饲料在生产成本和价格上仍有较强的竞争力，但在产品卫生安全标准和内在质量方面还存在较多问题，出口环境改善带来许多机会，但也面临较大竞争压力。目前，限制产品出口的主要障碍是卫生检疫、技术标准、反倾销、特殊保障措施纠n，要解决这一问题的前提是必须保证饲料生产的卫生安全与国际市场接轨。

冬春季节鸡呼吸道综合征的防治

冬春季节天气寒冷,气温多变,是肉鸡呼吸道疾病多发季节。而在小规模鸡养殖业中,由于饲养管理水平低下,也会造成呼吸道疾病的大面积暴发。当鸡的呼吸道疾病发展到了难以控制程度时,

寿光良种蛋鸡科学养殖技术的分析和研究

寿光鸡已有两千多年的历史，也是我国唯一载入“全英大不列颠百科全书－品种志”的地方鸡种。寿光鸡体躯高大，雄伟健壮，黑羽无杂毛，其肉质细嫩，口味独特，是著名的肉蛋兼用品种，被列入国家级地方品种保护名录，堪称国宝资源。成年公鸡体重4kg。利用寿光鸡作亲本杂交选育的土种肉鸡保持了寿光鸡原有的体形外貌和口感风味。为扩大种群，确保这一优秀品种的发展，必须科学养殖。