弗氏柠檬酸杆菌临床株对碳青霉烯类耐药的分子机制研究

碳青霉烯类抗生素是一类抗菌谱广、抗菌活性强的β-内酰胺类抗生素,对Amp C酶和超广谱β-内酰胺酶高度稳定,是临床抗感染的最后一道防线。但近几年,碳青霉烯类耐药的革兰氏阴性菌在全球范围内逐年增多,给临床治疗带来了挑战。弗氏柠檬酸杆菌是柠檬酸杆菌属最常见的分离株,也是医院感染中常见的革兰氏阴性杆菌。

非甾体类抗炎药阿司匹林、吲哚美辛对胃癌MGC803细胞的抑制作用研究

目的探讨非甾体类抗炎药阿司匹林(ASP)、吲哚美辛(Indo)促进胃癌MGC803细胞凋亡、抑制增殖的作用和机制。方法细胞增殖检测(MTT)法检测ASP、Indo对MGC803细胞增殖的影响;流式细胞技术检测ASP、Indo对MGC803细胞凋亡的影响;细胞免疫化学方法检测ASP、Indo对MGC803细胞表达C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)的影响。结果与对照组相比,ASP、Indo对MGC803细胞具有明显的增殖抑制作用及促进MGC803细胞凋亡的作用;MGC803细胞高表达CRP、IL-6,ASP、Indo能下调MGC803细胞CRP、IL-6的表达水平。结论非甾体类抗炎药ASP、Indo对胃癌MGC803细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能下调MGC803细胞中CRP、IL-6的表达。

神经外科重症监护室患者感染碳青霉烯酶类耐药黏质沙雷菌的分子流行病学研究

目的研究神经外科重症监护室患者感染碳青霉烯类抗菌药物耐药黏质沙雷菌的耐药机制和流行病学。方法选择2014年10月-2015年3月青岛大学附属医院分离自神经外科重症监护室患者的6株黏质沙雷菌进行鉴定和药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)扩增和产物测序确认菌株携带的耐药基因;脉冲场凝胶电泳和质粒接合试验分析菌株的同源性和质粒转移特性。结果6株黏质沙雷菌药敏表型和基因型一致,对头孢曲松、氨曲南、厄他培南、亚胺培南和美罗培南耐药;每一株菌都携带blaKPC-2、blaSRT-1、aac(6’)-Ic和fosA7耐药基因;6株菌的脉冲场凝胶电泳带型完全相同,并可将携带blaKPC-2基因的质粒成功转移到大肠埃希菌J53AziR。结论携带blaKPC-2、blaSRT-1、aac(6’)-Ic和fosA7耐药基因黏质沙雷菌的克隆播散是神经外科重症监护室患者医院感染的原因。

5株携带blaNDM-5基因大肠埃希菌临床株的分子流行特征分析

目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌的耐药机制并对分离株的分子流行特征进行分析,为医院感染的防控提供依据。方法选取2015年5月-2016年10月住院患者标本分离的5株耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌,产金属碳青霉烯酶的筛选采用亚胺培南/EDTA复合E-test条,采用PCR方法检测菌株携带的碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶、ampC酶和喹诺酮类耐药相关基因,并测序确认类型及其亚型,脉冲场凝胶电泳技术检测分离株间的同源性,液相质粒接合试验分析质粒的转移特性。结果除了阿米卡星和氨曲南外,5株大肠埃希菌对目前测试的头孢菌素、碳青霉烯类和喹诺酮类抗菌药物都耐药,且金属酶表型实验结果都呈现阳性;5株大肠埃希菌携带不同的耐药基因,但都携带blaNDM-5和blaTEM-1基因;脉冲场凝胶电泳显示5株大肠埃希菌的脉冲带型不一致,没有呈现克隆聚集性;质粒接合试验没有显示5株大肠埃希菌临床株(供体菌)将携带blaNDM-5的质粒转移到大肠埃希菌J53AziR(受体菌)。结论研究结果表明本地区存在携带blaNDM-5基因的大肠埃希菌的流行,但没有呈现克隆聚集暴发性,为预防和控制医院感染的暴发,必须重视和加强对耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌的监测。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌新生儿株的分子机制

目的探讨分离自新生儿的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子机制和菌株之间的同源性。方法10株肺炎克雷伯菌(NX01~NX10)于2018年12月—2019年5月分离自新生儿患者;菌株鉴定和药敏使用梅里埃VITEK 2 Compact系统;β-内酰胺酶耐药基因的检测和确认采用聚合酶链反应扩增和测序方法;脉冲场凝胶电泳(PFGE)、S1酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PAGE)和多位点序列分型(MLST)分析菌株携带的质粒和菌株的同源性。结果除了NX03株携带blaIMP-1、blaSHV-62和blaDHA-1基因外,其余9株都携带blaNDM-5、blaCTX-M-14、blaCTX-M-15、blaTEM-1B和blaSHV-172基因,并呈现多耐药;在10株肺炎克雷伯菌中,9株菌(NX01~NX02、NX04~NX10)的PFGE带型完全相同,属于ST17,而NX03株为另外克隆,为ST502;S1-PAGE显示10菌株都携带3个质粒。结论携带blaNDM-5、blaCTX-M-14、blaCTX-M-15、blaTEM-1B和blaSHV-172基因的ST17型肺炎克雷伯菌的克隆聚集是引起新生儿医院感染暴发的原因。

新生儿重症监护室分离的碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌的分子流行病学

目的探讨引起新生儿重症监护室患儿医院感染的阴沟肠杆菌病原学特点。方法收集2013年8月-2015年6月青岛大学附属医院临床分离的8株非重复的耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌,采用Vitek-2 Compact系统进行菌株的鉴定和药敏。亚胺培南复合E条检测菌株的金属酶。PCR扩增及产物测序检测菌株携带的碳青霉烯酶及其他β-内酰胺酶基因。通过多位点序列(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)验证菌株克隆聚集性。质粒接合、基于PCR的分型和S1核酸酶切的Southern杂交检测质粒的特性。结果 8株阴沟肠杆菌(YG1~YG8)对目前常用的头孢菌素和碳青霉烯类抗菌药物均耐药,且均携带blaNDM-1基因。接合实验显示8株阴沟肠杆菌可将携带的质粒转移到大肠J53AziR受体菌,且供体菌与其接合子的金属酶试验均阳性。ST177型阴沟肠杆菌(YG5~YG7)3株PFGE条带数目及位置相同,属于克隆A;属于克隆B的YG3和YG4菌株为ST231型;属于克隆C、D和E的YG1、YG2和YG8菌株的MLST分别为ST418,ST190和ST592型。Southern杂交显示供体菌YG5携带两个质粒,大小约50 kb和400 kb,而其接合子YG5C携带大小约50 kb的质粒。结论携带blaNDM-1阴沟肠杆菌在新生儿重症监护室的患儿中存在多克隆的流行。经检索,ST177型阴沟肠杆菌引起新生儿的医院感染属于国内外首次报道。

布鲁菌病患者血清sTim-3、Galectin-9水平与炎症因子IFN-γ、IL-4水平的相关性

目的探讨布鲁菌病患者血清可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)、半乳糖凝集素-9(Galectin-9)水平与炎症因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的相关性。方法选择2016年1月至2018年12月烟台业达医院收治的布鲁菌病患者90例为研究对象纳入观察组,其中急性期49例、慢性期41例;另选择同期进行健康体检的健康受试者50例为对照组。采集布鲁菌病患者和健康受试者空腹静脉血5 ml,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测sTim-3、Galectin-9水平,流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测IFN-γ、IL-4水平;并应用Pearson相关性检验对布鲁菌病患者血清中的sTim-3、Galectin-9及sTim-3/Galectin-9水平与IFN-γ、IL-4水平进行相关性分析。结果观察组、对照组人群血清中sTim-3[(18.28±5.38)、(7.01±1.97)ng/L]、Galectin-9[(2.79±0.94)、(1.67±0.23)ng/L]、sTim-3/Galectin-9(6.55±2.96、4.20±0.67)、IFN-γ[(5.99±1.94)、(10.09±2.03)ng/L]、IL-4[(7.34±3.13)、(3.71±1.76)ng/L]水平组间比较差异有统计学意义(t=14.271、8.276、5.527、11.785、7.556,P均<0.05)。观察组中,急性期、慢性期布鲁菌病患者sTim-3[(22.09±3.13)、(14.21±3.42)ng/L]、Galectin-9[(2.98±0.67)、(2.41±0.74)ng/L]、sTim-3/Galectin-9(7.41±1.07、5.90±1.72)、IFN-γ[(3.78±1.65)、(7.02±1.73)ng/L]、IL-4[(9.17±2.04)、(5.67±1.54)ng/L]水平组间比较差异有统计学意义(t=11.402、3.833、5.084、9.075、9.037,P均<0.05)。经Pearson相关性检验,布鲁菌病患者的sTim-3、Galectin-9、sTim-3/Galectin-9水平与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.568、-0.531、-0.519,P均<0.05),与IL-4水平呈正相关(r=0.517、0.524、0.536,P均<0.05)。结论布鲁菌病患者血清中sTim-3、Galectin-9呈现高表达,且与IFN-γ、IL-4水平显著相关,提示sTim-3、Galectin-9可能与布鲁菌病的发生、发展过程有关。