中药多糖抗衰老作用机制研究进展

多糖是生物体内除蛋白质和核酸以外又一类重要的信息分子,为生命物质的重要组成成分之一,具有多种生物学活性。衰老是指机体出现的组织形态退行性改变,生理功能的降低及心理功能的衰退等,中药多糖在抗衰老方面已通过现代药理实验证实疗效确切。本文从中医角度将中药多糖分为补阴类、补阳类、补气类和补血类四大类,通过中国知网(CNKI)数据库检索,综述近二十年来中药多糖抗衰老的作用机制研究进展。

木犀草素与哌嗪共晶的表征及初步药动学研究

目的研究木犀草素与哌嗪共晶的制备与表征,体外溶解性以及大鼠体内药动学,并与二者同比例物理混合物进行对比。方法对共晶以及物理混合物进行粉末X射线衍射(PXRD)和差示扫描量热(DSC)分析,采用高效液相色谱法检测其体外溶解性,采用高效液相色谱-串联质谱技术测定大鼠灌胃给药的血药浓度,比较主要药动学参数的差异。结果共晶与木犀草素的PXRD、DSC等方法检测结果存在明显差异,在十二烷基硫酸钠溶液中的溶解度较物理混合物提高39%。大鼠灌胃给予共晶和物理混合物后,共晶的达峰时间和体内滞留时间明显缩短,药物浓度-时间曲线下面积增加。结论共晶改善了木犀草素溶解度和体内生物利用度,提高了木犀草素的成药性。

基于含药血清经时谱效关系的半夏白术天麻汤抑制细胞焦亡的药效物质研究

目的:运用含药血清经时谱效关系研究经典名方半夏白术天麻汤保护内皮细胞免受棕榈酸诱导细胞焦亡的药效物质。方法:建立棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡模型,以细胞活力、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD),抑制其释放炎性介质白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为半夏白术天麻汤含药血清抑制细胞焦亡的药效学评价指标,建立大鼠灌胃后吸收进入血化学成分的分析方法,采用典型相关性的谱效关系分析方法指认半夏白术天麻汤抑制细胞焦亡的有效成分。结果:柚皮苷、大豆苷元、甘草素、异甘草素和白术内酯Ⅲ与抑制细胞焦亡的正相关性较大,可明显增强细胞活力,改善MDA、NO、T-SOD、IL-6、TNF-α水平。结论:半夏白术天麻汤中橘红、甘草、白术的成分参与保护棕榈酸诱导的HUVEC细胞焦亡,含药血清经时谱效关系可用于发现半夏白术天麻汤的血管内皮细胞保护成分。

三棱、醋三棱化学模式识别

目的对三棱、醋三棱进行化学模式识别分析。方法UPLC-MS法测定对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、山柰酚、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、对香豆酸、原儿茶酸、香草醛、香草酸、芒柄花素的含量,分析采用Hypersil GOLD色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.30 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;负离子检测;多反应监测模式。再通过层次聚类分析、差异性分析、主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析寻找醋炙前后差异性成分。结果三棱、醋三棱聚为2类。差异成分为原儿茶酸、阿魏酸,醋炙后两者含量升高(P<0.01)。结论三棱、醋三棱化学成分存在差异,原儿茶酸、阿魏酸可作为三棱醋炙前后质量评价的关键性指标。

LC-MS法结合化学计量学法探讨发酵时间对六神曲中化学成分的影响

目的采用LC-MS法结合化学计量学分析法探究不同发酵时间六神曲中葫芦巴碱、没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛、隐绿原酸、苦杏仁苷、香草酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、紫云英苷、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B、木犀草素、芹菜素的含量,并筛选差异性标志物。方法该药物的分析采用Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃。采用主成分分析(PCA)对六神曲进行分类和评价,再借助正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法筛选出差异性标志物,并通过聚类热图进行区分。结果发酵过程中,葫芦巴碱、原儿茶醛、苦杏仁苷、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、紫云英苷质量分数呈下降趋势,没食子酸、原儿茶酸、香草酸、木犀草素、芹菜素质量分数呈上升趋势,隐绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B质量分数存在波动;PCA结果显示,不同发酵时间六神曲可聚类为4个发酵阶段;OPLS-DA结果表明,原儿茶酸、苦杏仁苷、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、异绿原酸B为差异性标志物;以18种已知化学成分、6个差异性标志物含量为指标,分别进行聚类热图分析,聚类结果一致。结论该方法稳定可靠,可用于区分不同发酵时间六神曲。

三棱含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究三棱含药血清对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)损伤的影响。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组和三棱组,制备空白血清及含药血清。建立LPS诱导的HUVEC损伤模型,设置对照组、模型组、5%空白血清组和三棱含药血清(1%、3%、5%)组,采用MTT法检测三棱含药血清对细胞活力的影响;采用荧光显微镜分析各组细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用ELISA法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-17、组织因子(tissue factor,TF)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、凝血酶调节蛋白(thrombomodulin,TM)水平;采用Western blotting检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3 II(microtubuleassociated protein l light chain 3 II),LC3 II)、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表达情况;采用q RT-PCR法测定各组细胞IL-1β、IL-18和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)m RNA表达情况。结果与对照组比较,模型组细胞活力、MPP显著降低(P<0.01),细胞内ROS水平显著升高(P<0.01),上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平均显著升高(P<0.01),LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,三棱含药血清组细胞活力、MPP显著升高(P<0.01),细胞内ROS水平显著降低(P<0.05、0.01),上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、v WF、TM水平均显著降低(P<0.01),LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-18和NLRP3 m RNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论三棱含药血清具有内皮细胞保护作用,可以降低LPS诱导的细胞氧化损伤和炎症,降低凝血级联反应。

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术分析鉴定中药三棱入血成分

目的:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-QE-Orbitrap-MS)分析三棱提取物在大鼠体内的入血成分。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL。质谱分析采用电喷雾离子源,在正、负离子模式下采集数据,扫描范围m/z 100~1000。采用Compound Discoverer 3.0软件获取特征碎片离子信息,结合数据库(mzCloud,mzVault)、OTCML数据库及文献确定入血成分。结果:综合质谱检测信息,从三棱药材提取物中解析出70个化学成分,大鼠口服给药后,含药血浆中分析出40个成分,包括20种原型成分和20个代谢产物,其主要代谢途径分别为甲基化、去甲基化、还原反应、葡萄糖醛酸化等。结论:本文采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术分析鉴定了三棱主要入血成分及部分代谢产物,为阐明三棱的药效物质基础和质量控制奠定基础。

基于HS-GC-IMS技术分析六神曲炮制前后(炒、焦)挥发性物质的变化

目的 分析六神曲Massa Medicata Fermentata炮制前后(炒、焦)的挥发性有机物特征及其变化规律。方法 采用顶空-气相色谱-离子迁移质谱(headspace-gas chromatography-ion migration mass spectrometry,HS-GC-IMS)测定六神曲生品、炒品和焦品的挥发性有机物,构建HS-GC-IMS指纹图谱,采用VOCal软件对检测到的成分进行定性和定量分析,运用主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)、t检验等对样品进行差异性分析。结果 基于HS-GC-IMS技术从六神曲生品、炒品和焦品中共获得了80种挥发性有机物,定性鉴别出60种;构建了六神曲生品、炒品和焦品的HS-GC-IMS指纹图谱,通过PCA、PLS-DA、t检验等分析方法可将三者进行区分,己醛-D(hexanal-D)、乙醇(ethanol)2种物质可作为六神曲生品的特征性成分;丁醛(butanal)、2-甲基-2-丙烯(2-methyl-2-propenal)、化合物8可作为六神曲炒品的特征性成分;糠醛-D(furfural-D)、2-丁酮(2-butanone)、5-甲基糠醛(5-methylfurfural)、丙酮(acetone)、2-乙酰呋喃-D(2-acetylfuran-D)、化合物20共6种物质可作为六神曲焦品的特征性成分。结论 HS-GC-IMS指纹图谱可用于识别与评价六神曲生品、炒品和焦品挥发性有机物的种类和差异,为六神曲饮片的质量控制及临床应用提供参考。

基于UPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术分析半夏白术天麻汤的化学成分及入血成分

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap-HRMS)技术分析半夏白术天麻汤(Banxia Baizhu Tianma Decoction,BBTD)化学成分及入血成分,阐明其可能的药效物质基础。方法:色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)(2.1mm×100mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱,流速0.2mL·min^(-1)。采用电喷雾离子源ESI,正、负离子模式扫描。根据准分子离子与二级碎片离子,结合对照品及文献数据鉴定BBTD化学成分、入血成分。结果:BBTD表征出133个成分,含药大鼠血浆样品分析出48个化合物,包括39个原型成分和9个代谢产物。结论:通过UPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术对BBTD化学成分及入血成分进行表征,为其药效物质基础研究和质量控制奠定基础。