(Q)SAR技术在药物杂质遗传毒性评价中的应用

药物杂质遗传毒性评价遵循ICH M7指导原则,基于风险评估的原则,在药品注册时,可以采用计算机辅助的(定量)构效关系,即(Q)SAR评价方法研究杂质的致突变性。本文从基本要求、软件选择、结果解读和应用等方面,综述了(Q)SAR技术在药物杂质遗传毒性评价中的应用,以促进我国药物遗传毒性杂质的评价和控制的规范化。

UHPLC-MS/MS测定人血浆中的阿普斯特浓度及生物等效性研究

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,建立快速、简单、灵敏的测定人血浆中阿普斯特浓度的方法并用于阿普斯特人体生物等效性试验研究。方法采用蛋白沉淀法处理,以阿普斯特-d5作为内标,色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,流速0.45 mL·min^(-1)梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式进行MRM检测,用时3 min。结果阿普斯特在2~600 ng·mL^(-1)(r^(2)=0.9977)范围内线性关系良好,准确度和精密度均小于15%。空腹和餐后条件下阿普斯特片受试制剂AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)和C_(max)的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术用于法莫替丁有关物质的结构解析

目的对法莫替丁有关物质进行结构解析。方法采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术测定离子的准确质量,通过质谱数据,经Xcalibar软件计算元素组成,并利用Mass Frontier软件进行碎片离子匹配,推断法莫替丁强制破坏产生的有关物质结构。结果对法莫替丁3个降解杂质进行了结构解析。结论UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法能有效地鉴定法莫替丁中的有关物质,为其生产工艺优化和质量控制提供参考。

HPLC-ELSD法与薄层色谱扫描法用于测定二硬脂酰磷脂酰胆碱有关物质的对比研究

目的:建立二硬脂酰磷脂酰胆碱有关物质的检测方法。方法:对比考察HPLC-ELSD液相色谱法与薄层色谱扫描法。薄层色谱扫描法,采用硅胶G60薄层板,以三氯甲烷-甲醇-水-浓氨溶液(65∶25∶4∶0.4)为展开剂,检测波长为450 nm。液相色谱法采用C8柱,以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,蒸发光散射检测器,以浓度的对数值为横坐标,以峰面积的对数值为纵坐标,进行线性回归计算,并对建立的方法进行了方法学验证。结果:薄层色谱扫描法虽也可定量,但仅检出少量已知杂质,不能有效检出未知杂质。液相色谱法所需样品量少、杂质检出量高、操作简便,优于薄层色谱扫描法。结论:建立方法采用液相色谱法克服了原有薄层色谱法不能准确定量的弊端,检测灵敏度高,定值准确,可作为二硬脂酰磷脂酰胆碱质量控制方法。

超高效液相色谱-串联质谱法测定叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒性杂质

硫酸二甲酯被广泛用于药品的有机合成中,具有很强的毒性及腐蚀性,因此应严格控制其在药品中的残留量。现有传统检测方法在样品制备过程中不允许使用水,且存在专属性低、灵敏度差等缺陷,严重制约了检测方法的通用性和准确度。研究采用超高效液相色谱-串联质谱技术(UHPLC-MS/MS),建立了氨基比林等叔胺类药品中残留的硫酸二甲酯的测定方法。检测方法以氨基比林作为衍生剂,40℃条件下氨基比林和硫酸二甲酯在水溶液中能够快速反应生成甲基化氨基比林,通过检测甲基化氨基比林间接计算硫酸二甲酯的残留含量。采用Waters Atlantis HILIC C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,3.0μm),以10 mmol/L乙酸铵水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液(50∶50,v/v)为流动相进行等度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量1μL;在电喷雾电离、正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式下测定硫酸二甲酯的含量。硫酸二甲酯在0.9935~7.9480 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.9997,方法的检出限为0.50 ng/mL,定量限为1.15 ng/mL,加标回收率为94.9%~106.4%。建立的检测方法用于氨基比林、咖啡因、替加氟等9批样品中,均未检出硫酸二甲酯,说明各药品生产企业注重了该基因毒杂质残留量的控制。该方法专属性强,灵敏度高,操作简单,定量准确,适用于氨基比林等药品中硫酸二甲酯基因毒杂质的测定。

注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的质量评价

目的 评价国产注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的质量现状,并提出改进建议。方法 法定标准检验结合探索性研究,对产品的杂质谱、克拉维酸聚合物及其他荧光杂质、复溶行为、成盐率、包材密封性等进行比较研究。结果 212批次样品法定标准检验均符合规定;采用建立的杂质分析方法,对主要杂质的结构与来源进行确证;证明水分和温度易促进主成分的降解;此外,应严格控制原料成盐过程中的工艺参数,控制成盐剂的残留量;并关注包材密封完整性对产品全生命周期的影响。结论 注射用阿莫西林钠克拉维酸钾总体质量较好,现行质量标准有待提高。

布洛芬颗粒在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究布洛芬颗粒剂在中国健康受试者体内的生物等效性,为一致性评价提供依据。方法采用单中心、随机、开放、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的空腹、餐后各24名健康志愿者分别随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂0.2 g,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的测定人血浆中布洛芬浓度的分析方法,用于布洛芬颗粒人体生物等效性试验研究。采用Phoenix WinNonlin 8.2软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果空腹给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(21.8±4.21)μg/ml和(23.3±4.74)μg/ml;T_(max)分别为1.00 h和0.25 h;AUC_(0-t)分别为(71.83±16.08)μg/ml和(69.02±16.34)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(72.89±16.27)μg/ml和(70.04±16.53)μg/ml。餐后给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(10.7±2.25)μg/ml和(10.6±2.57)μg/ml;T_(max)分别为4.00 h和4.00 h;AUC_(0-t)分别为(65.27±13.79)μg/ml和(65.76±16.37)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(66.45±14.13)μg/ml和(67.12±16.93)μg/ml。结论空腹和餐后受试制剂AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试制剂布洛芬颗粒剂与参比布洛芬颗粒剂具有生物等效性。

注射用阿莫西林钠克拉维酸钾包材密封完整性的研究和考察

目的考察注射用阿莫西林钠克拉维酸钾包材密封完整性,为检测产品包材密封完整性提供新的思路。方法采用真空衰减法,选用质量较好的产品作为对照品,对4家制药企业生产的共5批注射用阿莫西林钠克拉维酸钾进行包材密封完整性检测,并采用单变量显著性分析法和Mann-Whitney U检验分析法进行数据分析;为了验证结果的可靠性,对厂家A和厂家C产品进行加速试验,并采用《中国药典》2020年版(四部)通则0901第一法进行溶液颜色检查。结果厂家A、C生产的产品的压差均值均高于对照组厂家B、D的产品,且结果离散程度较大,与对照组相比存在统计学差异;厂家A和厂家C产品进行加速试验,溶液颜色显著加深,进一步说明2家企业产品的密封性较差。结论厂家A、C生产的产品的包材密封完整性明显差于对照组,且溶液颜色显著加深,说明两家企业产品的密封性存在问题;选用质量较好的产品作为对照品,采用真空衰减法进行包装密封完整性检测方法可行、结果可靠。

吡拉西坦片溶出度的测定方法研究

目的建立吡拉西坦片溶出度测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定溶出量:采用Kromasil C;色谱柱,流动相为0.1%磷酸氢二钾溶液(用磷酸调pH至6.0±0.05)-乙腈(95:5),检测波长为205 nm,流速为1.0 ml/min;并考察了不同溶出方法、转速、溶出介质和取样时间点等。结果采用桨法,以水900 ml为溶出介质,转速为50 r/min,取样时间为30 min,采用高效液相色谱法(HPLC)测定溶出量,限度为不低于标示量的85%。结论本法可用于吡拉西坦片溶出度的测定,能有效控制产品质量,可为吡拉西坦片质量标准提高提供依据。

对中国药典2020年版中三硝基苯酚使用情况的探讨

目的探讨在中国药典鉴别项中减少使用三硝基苯酚。方法对中国药典2020年版中三硝基苯酚的使用情况进行梳理,并与国外药典的使用情况进行对比,对其使用的必要性进行探讨。结果中国药典2020年版收载的某些品种鉴别项中不必要使用三硝基苯酚。结论建议中国药典删除不必要使用三硝基苯酚的鉴别项。

玻璃酸钠特性黏数与相对分子质量测定研究

目的:从特性黏数、相对分子质量、相对分子质量分布三个方面开展对比研究,确立合适的检测方法纳入起草标准。对比考察玻璃酸钠特性黏数与相对分子质量测定方法,并确定最优的方法对玻璃酸钠进行质控。方法:对比考察EP 10.0/BP 2020和JPⅩⅦ特性黏数测定方法。采用乌氏黏度计测定供试品溶液流出时间,经线性回归计算特性黏数;经公式转换计算平均相对分子质量。采用多角激光光散射仪(检测波长:690 nm)与示差折光检测器结合,照分子排阻色谱法,以Shodex RC804凝胶柱为色谱柱;以0.2 mol·L^(-1)氯化钠溶液为流动相,用Astra 6软件计算相对分子质量分布。照分子排阻色谱法,示差折光检测器,以0.2 mol·L^(-1)氯化钠溶液为流动相,以Shodex SB-806HQ凝胶柱为色谱柱,以6个已知相对分子质量范围25万~316万的聚苯乙烯磺酸钠盐对照品作标准曲线,计算供试品相对分子质量。结果:特性黏数测定受温度影响显著,EP 10.0/BP 2020特性黏数测定结果高于JPⅩⅦ测定结果。EP 10.0/BP 2020特性黏数计算出的平均相对分子质量与对照品法测得相对分子质量结果均偏高,由JPⅩⅦ测得特性黏数计算出的平均相对分子质量与多角激光散射-示差折光法测得结果基本一致。结论:经对比考察,采用JPⅩⅦ特性黏数测定方法,可同时获得特性黏数和平均相对分子质量,无需再单独设定相对分子质量检测项目,满足玻璃酸钠的质控要求。

微晶纤维素对巴洛沙星渗透性影响的研究

目的采用平行人工膜渗透性分析法(PAMPA)研究微晶纤维素的用量、来源、型号对巴洛沙星渗透性的影响,为巴洛沙星片处方中微晶纤维素的筛选及不同来源微晶纤维素的替代提供参考。方法采用μFLUXTM型药物渗透性测定系统,前30 min以胃模拟液(pH 1.6)为介质,而后介质转换成肠模拟液(pH 6.5),测定巴洛沙星在不同来源、型号、用量的微晶纤维素中的渗透性。通过对渗透性差异的比较,考察微晶纤维素对巴洛沙星渗透性的影响。结果随微晶纤维素(PH101型和PH102型)用量增加,巴洛沙星渗透性降低;不同型号的微晶纤维素对巴洛沙星渗透性的影响略有差异;同型号的进口微晶纤维素与国产品对巴洛沙星渗透性的影响没有显著性差异。结论微晶纤维素的用量和型号影响巴洛沙星的渗透性。在巴洛沙星片中,渗透性可作为重要指针,为选择不同来源的微晶纤维素进行相互替代。

pH响应性可降解聚(醚酯-氨酯)的制备及在药物缓释领域的应用

设计和制备了一类具有高pH响应性的可降解聚氨酯材料,旨在作为一种智能给药载体。首先通过“硫醇-烯”点击反应合成了一种吡啶基二醇(PyDH);然后,以PyDH、聚醚酯二醇和二异氰酸酯为原料,通过缩聚反应制备了侧链含吡啶基团的聚(醚酯-氨酯)(PEEU-Py),并经溶剂挥发得到相应的薄膜材料。通过核磁共振、红外光谱、凝胶渗透色谱等对PyDH和PEEU-Py的化学结构进行了表征,并对PEEU-Py膜的力学、溶胀、降解、药物缓释等性能进行了研究。PEEU-Py膜展示出高的pH溶胀性,其在pH=1.5介质中的平衡吸水率分别为pH=7.0和pH=11.5的2倍和8倍以上;体外药物缓释研究表明,膜材料的药物释放速率随pH值的降低而提高,其药物释放能力与材料的溶胀性能相一致。此外,细胞毒性评价表明该材料具有良好的细胞相容性。研究结果表明,PEEU-Py作为一种受外界pH变化触发的智能开关在药物载体上有好的应用前景。

豚鼠被动皮肤过敏试验条件研究

目的探讨豚鼠被动皮肤过敏(PCA)试验的最佳条件(致敏阳性物质、时间)。方法采用卵白蛋白(ova,0.4%)和牛血清白蛋白(BSA,1%)为PCA抗原,分别于不同激发时间(4 h和24 h)对不同生产厂家(潍坊圣诺实验动物养殖有限公司、青岛康大生物科技有限公司、济南金丰实验动物有限公司,简称圣诺、康大、金丰)的豚鼠进行PCA试验,记录蓝斑直径。结果在ova被动致敏4 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm(阳性);在ova被动致敏24 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。在BSA被动致敏4 h后,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm,金丰生产的豚鼠仅含抗体血清(1∶2、1∶4,V/V)的蓝斑直径大于5.0 mm;在BSA被动致敏24 h后,金丰生产的豚鼠的蓝斑分界清晰且直径大于5.0 mm,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。结论豚鼠PCA中首选0.4%ova溶液作为试验抗原时致敏时间宜为4 h。

LC-MS/MS法测定替诺福韦前体药物中遗传毒性杂质

目的采用高效液相色谱-三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)法测定替诺福韦前体药物中遗传毒性杂质9-丙烯基腺嘌呤含量,并分析最小二乘法不同线性拟合方法对结果准确度的影响。方法采用Waters XBridge C_(18)(4.6 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱;以甲醇-水(55∶45)为流动相,流速:1.0 mL·min^(-1),等度洗脱8 min(2.0~2.6 min进质谱)。进样体积2μL,柱温40℃。采用正离子电喷雾(ESI^(+))模式电离,多反应离子监测(MRM)模式,选择m/z 176.0→136.0作为检测离子。结果经分析方法验证,该方法专属性良好;系统精密度试验RSD为1.1%(n=6);使用最小二乘法进行线性回归,线性范围0.051~25.250μg·mL^(-1);加权线性回归在低浓度区域准确性明显高于未加权线性回归。定量限0.051 ng·mL^(-1),检出限0.017 ng·mL^(-1);原料药样品溶液平均回收率99.08%~99.97%(n=9),重复性RSD为0.4%~1.3%;片剂样品溶液平均回收率98.94%~101.96%(n=9),重复性RSD为0.2%~0.3%;耐用性良好。结论建立的方法操作简单、灵敏度高、分析速度快、基质不影响检测,结果准确可靠,能够满足痕量遗传毒性杂质的检测要求。

吲达帕胺片在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究吲达帕胺受试制剂(片剂)和参比制剂(片剂)空腹给药的人体生物等效性。方法采用开放、随机、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的12名健康志愿者随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂2.5 mg,采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的的分析方法测定人全血中吲达帕胺浓度,用于吲达帕胺片人体生物等效性预试验研究。利用DAS软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果吲达帕胺受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:C_(max)分别为(128.7±19.4)ng/ml和(126.5±19.2)ng/ml;T_(max)分别为(1.5±0.6)h和(1.5±0.5)h;AUC_(0-t)分别为(2163.4±352.4)ng/ml和(2148.5±346.2)ng/ml;AUC_(0-∞)分别为(2241.1±383.8)ng/ml和(2228.4±371.5)ng/ml,相对生物利用度为99.5%±6.2%。结论受试制剂AUC_(0-t)、 AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试吲达帕胺缓释片与参比吲达帕胺缓释片具有生物等效性。

国家评价性抽验复方胃蛋白酶颗粒质量分析

目的:评价复方胃蛋白酶颗粒质量现状及存在的问题,为国家药品标准的建立和修订提供更加科学的依据,同时为行政监管提供有力保障。方法:对国家评价性抽验的265批复方胃蛋白酶颗粒进行全项检验,并对检验结果进行统计分析。结果:按照标准检验,有2批次样品不合格,总体不合格率为0.8%。不合格项目均为胃蛋白酶效价。按照探索性研究方法检验,发现维生素B1含量及均匀度不合格、加速试验中部分企业胃蛋白酶活性下降幅度较高等问题。结论:复方胃蛋白酶颗粒的现行质量标准不能满足质量控制的要求,仍需进一步充实和完善。

激光散射法测定羧甲纤维素钙粒度与粒度分布的研究

目的建立激光散射法测定羧甲纤维素钙的粒度与粒度分布。方法采用Malvern Mastersizer 2000型激光散射粒度分析仪,干法测定模式,样品折射率1.52,颗粒吸收率0.1,分散介质折射率1.00,空气分散压力0.5 bar,振动进样速度40%,测量时间10 s,进样口宽度7 mm,遮光度0.5%~5%。结果d(0.5)值的RSD均小于3%,d(0.1)和d(0.9)值的RSD均小于5%。结论本方法适合羧甲纤维素钙的粒度与粒度分布的测定。

注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中两组分成盐率的分析

目的建立离子色谱法同时测定注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠离子与钾离子的含量,通过计算其成盐率,对不同企业样品的成盐工艺进行评价。方法采用IonPacCS12A阳离子交换色谱柱(4mm×250mm)和IonPac CG12A保护柱(4mm×50m m),检测器为电导检测器,抑制器电流为20mA,以6.7mmol/L甲烷磺酸溶液为淋洗液,流速为1.0 mL/min。结果钠离子浓度在6.01~18.04μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=5);平均回收率为100.4%(RSD=0.4%,n=9);钾离子浓度在3.33~9.98μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998,n=5);平均回收率为100.2%(RSD=0.5%,n=9)。测定了37批注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠和钾的含量,其成盐率分别为1.00~1.13和0.94~1.05。结论本方法可用于注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠离子与钾离子的含量测定,各企业样品成盐情况较好,但需关注成盐剂的残留。

依诺肝素钠注射液质量分析及一致性评价

目前依诺肝素钠注射液没有统一的药典标准,属于存在安全性风险的品种,因此对其进行质量监督至关重要。连续3年对该产品进行跟踪检验,抽样范围广,样品规格全,代表性强,能较好地反映全国依诺肝素钠注射液的质量现状。在日常监督抽验的基础上,结合国家评价性抽验已有的研究成果,该研究总结了8家生产企业的200余批样品质量现状,评估了不同企业依诺肝素钠注射液的质量差异。此外,首次考察了国内企业产品与原研制剂的质量一致性,以及首次对比分析了在中国市场、美国市场和欧洲市场上市的原研制剂质量,为质量标准提升及临床用药安全提供参考。通过调研、按现行法定标准检验以及探索性研究,结合现行标准的科学性、合理性综合分析,发现依诺肝素钠注射液仍然存在质量标准不统一、个别企业处方与生产工艺不一致以及一些其他问题。因此,现行质量标准仍存在缺陷,需进一步统一和完善。