实时定量PCR检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变及其与临床指标的相关性

目的采用实时定量PCR检测接受与未接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清中乙肝病毒(HBV)突变情况,并将检测结果与临床指标进行相关性分析。方法采用touch-down PCR反应程序,并结合SYBR Green Ⅰ染料进行实时定量PCR,检测115份乙肝患者血清标本(其中50名患者未服用过拉米夫定,65名患者服用过拉米夫定)。随机选择115份标本中的30份用同样的方法提取血清DNA,进行PCR扩增及测序,并与实时定量PCR检测结果进行比较。将乙肝病毒YMDD突变实时定量PCR检测结果与临床各指标之间进行相关性分析。结果115份血清标本中,75份含有野生型HBV(其中49份来自未接受过拉米夫定治疗的患者),40份含有YMDD突变的HBV(其中1份来自未接受过拉米夫定治疗的患者);180位点的突变检测中,98份标本含有野生型HBV,17份标本含有突变型HBV。随机选取的30份标本测序结果与实时定量PCR检测结果完全一致。乙肝病毒拉米夫定耐药突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间无相关性,而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性,用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180和204位点突变具有相关性。结论实时定量PCR可以高效、准确地检测拉米夫定治疗后乙肝病毒的耐药突变。

腹腔镜辅助直肠癌根治术对患者血清中HO-1及YKL-40的影响

目的比较腹腔镜辅助直肠癌根治术和开腹直肠癌根治术术后血清血红素氧化酶-1(HO-1)、人类软骨糖蛋白39(YKL-40)、C反应蛋白(CRP)的变化。方法将按照纳入排除标准选取的60例直肠癌患者分为腹腔镜组(30例)和开腹组(30例),检测患者术前和术后第1、3天外周血HO-1、YKL-40、CRP水平,并进行比较分析。结果术后第1、3天腹腔镜组血清HO-1、YKL-40、CRP水平均明显低于开腹组(P<0.05);两组术后血清HO-1、YKL-40、CRP水平均较术前明显升高,且两组术后第3天血清HO-1、CRP水平较术后第1天明显升高,而YKL-40水平术后第3天较术后第1天明显下降。结论腹腔镜辅助直肠癌根治术对机体的应激反应小,且术后恢复较开腹手术快。

乙肝病毒突变位点的寡核苷酸与肽核酸阵列杂交检测

目的:比较利用寡核苷酸阵列和肽核酸阵列检测乙肝病毒突变位点。方法:针对乙肝病毒常见的1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、1896G-A 3个突变位点,设计寡脱氧核苷酸和肽核酸检测探针,探针经固定后分别与不对称PCR荧光标记的靶DNA杂交,扫描分析荧光信号强度,DNA序列分析3位点的变异情况。结果:对于寡核苷酸芯片,1762与1764联合位点、1858以及1896位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为1.44、1/1.24、1.05。对于肽核酸芯片,相应位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为2.8、1/3.02、1.71。DNA序列分析结果表明该样本中1858位点为突变位点,1896以及1762与1764联合位点不存在突变。结论:与寡脱氧核苷酸探针相比,肽核酸与靶DNA杂交结合能力和识别单碱基错配能力均高于相应的寡脱氧核苷酸,二者杂交结果与测序结果一致。

乙型肝炎病毒基因型、拉米夫定耐药突变的RFLP检测及临床相关性分析

目的对乙型肝炎(简称乙肝)肝病毒进行基因分型,检测患者服用拉米夫定后血清中乙肝病毒突变情况,并进行临床相关性分析。方法设计乙肝病毒突变及基因分型特异性引物和酶切位点,系用限制性片断长度多态性(RFLP)分析法检测突变类型并对乙肝病毒进行基因分型。结果在115份被检测的血清标本中,75份(65%)标本为野生型,18份(15.7%)标本为YIDD突变,10份(8.7%)标本为YVDD突变;在混合型突变中,YIDD+YVDD存在于6份(5.2%)标本中,YMDD+YIDD存在于4份(3.5%)标本中,2份(1.7%)标本为YMDD+YVDD混合突变型;未检测到YSDD突变型。在180位点的突变检测中,98份(85%)标本为野生型,5份(4.3%)标本为rtL180M,L180M+M204I存在于8份(6.96%)标本中,另4份(3.5%)标本为L180M+M204V混合突变型。在115份标本中,102份标本为C基因型,13份标本为B基因型,未发现其他基因型。通过χ2检验,乙肝病毒YMDD突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间没有相关性(P>0.05),而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性(P<0.05),用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180位点的突变和204位点突变具有相关性(P<0.05)。结论采用RFLP分析法可以有效地检测乙肝病毒YMDD突变并对乙肝病毒进行基因分型。

初诊慢肝患者血清中乙肝病毒DNA载量与血清标志物的关系

目的探讨初诊慢性乙型肝炎血清标志物与HBV DNA的关系。对象与方法采用酶联免疫方法和荧光定量聚合酶链反应分别对512例不同乙肝病人及202例HBeAg阴性、257例HBeAg阳性慢肝病人进行血清标志物、HBV DNA定量检测并分析结果。结果慢肝组有315例(68.9%)病毒颗粒浓度高于107,肝硬化组7例(13.2%)病毒颗粒浓度高于107;HBeAg阳性慢肝组245例(95.3%)患者病毒颗粒含量高浓度,HBeAg阴性慢肝组68例(33.7%)患者病毒颗粒含量在105-7copy/mL区段。结果慢肝组与肝硬化组相比,高浓度病毒以慢肝组中最明显,病情发展至肝硬化期病毒含量多数不高;慢肝病人中不同乙肝血清标志物模式其病毒含量分布特点不同,与HBeAg阳性慢肝组相比HBeAg阴性组体内病毒复制水平低(p<0.01),传染性较前者弱。最常见前C区突变,导致HBeAg阴性CHB病情加重和病毒复制增加。

人乳头瘤病毒分型联合液及细胞学检测在宫颈病变患者筛查中的应用

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型联合细胞学检测在宫颈病变患者筛查中的应用。方法:收集疑似患者,将收集到的疑似宫颈病变患者450例,分别进行细胞学和HPV基因芯片分型检测,了解各亚型HPV感染率以及其与细胞学结果的相关性,并对HPV感染人群年龄问题加以研究分析。结果:450例宫颈疾病患者中,NLIM感染HR-HPV仅为10.5%,ASCUS感染HR-HPV为48.4%,LSIL感染HRHPV为75.5%,HSIL感染HR-HPV高达85.7%,HR-HPV感染率随宫颈病变级别升高呈增加趋势。其中感染HR-HPV者113例(25.1%)、感染LR-HPV者13例(2.9%),双重感染者有10例(2.2%)。差异有统计学意义。各年龄组HPV感染率相当,差异无统计学意义。结论:HPV分型检测宜联合细胞对宫颈癌病变筛查有着重要意义,将能够更准确的对病变进行筛查,及时发现病变进行治疗。

血清中可溶性CD30在85例病毒性肝炎患者中的检测

目的 检测病毒性肝炎患者血清中可溶性CD30（sCD30）的水平及其与血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）的相关性及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测85例病毒性肝炎患者（包括43例乙型肝炎,19例丙型肝炎,23例戊型肝炎）血清中sCD30的水平,同时采用日立7600生化仪检测血清中ALT的水平.另取30例ALT正常的乙型肝炎病毒（HBV）携带者作为乙型肝炎对照组,30名健康体检者作为正常对照组.结果 各型病毒性肝炎患者血清中sCD30和ALT水平均明显高于正常对照组,ALT水平升高的乙型肝炎患者较ALT正常的HBV携带者血清中sCD30水平明显升高.各型病毒性肝炎患者血清中sCD30水平均与ALT呈正相关.结论 病毒性肝炎存在Th2型细胞的活化,血清sCD30水平可以作为肝炎活动性的检测指标.