2011年黄三角地区鸭源大肠杆菌的分离鉴定

本试验从黄河三角洲区域2011年规模化肉鸭商品鸭场送检的病料中,通过细菌分离、培养特性观察、生化试验和致病性试验,分离到54株鸭源高致病性大肠杆菌。通过药敏试验,发现分离菌对多种抗生素存在多重耐药,其中对链霉素、氨苄西林和克林霉素3种药物的耐药性达到90%以上。敏感性较高的药物有阿米卡星、头孢噻肟、头孢曲松等药物。对分离菌进行了O抗原血清型分型,初步鉴定有12种血清型存在,其中O78、O35、O2、O18分别有12株、8株、6株和5株,为该区域优势血清型。本试验为了解和掌握该区域鸭源大肠杆菌病的流行情况,进一步研究和防控该病提供了参考依据。

猪伪狂犬病病毒HN2012株的分离鉴定及gE基因遗传进化分析

2012年以来,由新型猪伪狂犬病病毒引起的猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,在河南省发病猪场分离到1株PRV,命名为HN2012。该病毒在BHK-21细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将HN2012以10~5 TCID50的剂量感染成年家兔,接种兔在36h内全部死亡,均出现典型的PR症状。序列比对结果表明,HN2012与其他毒株同源性为94.82%~99.83%。进化树分析结果显示,PRV gE进化方向分为国内分离毒株和国外分离毒株两支,中国分支明显划分为2012年前分离毒株亚群和2012年后分离毒株亚群。这些结果对于我国PR的预防和疫苗株的选择具有重要的参考价值。

一例牛急性感染伪狂犬病病毒的分离鉴定

山东东营地区某牛场发生以流涎、眼睑肿大、表现为神经症状为主的疾病,通过采集病牛鼻腔试子,提取病毒基因组DNA,感作乳仓鼠肾(BHK-21)细胞,经细胞传代培养出现明显特征病变。以伪狂犬病病毒(PRV)高度保守的gB基因扩增引物进行PCR扩增,获得特异性的DNA片段,连接PMD18-T载体,测序鉴定与PRV SC株同源性高达99%以上。确诊为牛感染伪狂犬病病毒。

重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分的免疫效果评价

为了评价重组腐败梭菌α毒素在联苗中的免疫效果,试验用不同含量的重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分制备联苗,分别免疫兔和绵羊,在免疫后的第10,14,21天分别测定血清中和效价,免疫后第25天用1个最小致死量(MLD)的腐败梭菌毒素对免疫兔和绵羊分别进行攻毒,以期得到能使动物获得足够保护的抗原含量。结果表明:对于兔和绵羊联苗中重组腐败梭菌α毒素蛋白最小免疫剂量分别为0. 3 mg、0. 25 mg时,在免疫后第14天腐败梭菌毒素血清中和效价均能达到1;免疫后第25天进行攻毒保护试验,免疫兔和绵羊攻毒保护率分别为100%、75%。说明重组腐败梭菌α毒素可以替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分用来进行免疫。

PRV SA株gB基因和EGFP基因在BHK细胞中的融合表达研究

为了研究gB蛋白在细胞内的作用位点,试验以猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)SA株为模板,设计特异性引物,扩增gB基因保守片段;以pEGFP-N1质粒为模板扩增EGFP基因;以gB基因与EGFP基因胶回收产物为模板,用gB基因上游引物及EGFP基因下游引物通过重叠延伸PCR(SOE PCR)技术获得gB/EGFP融合基因;构建pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒,转染乳仓鼠肾细胞(BHK细胞),采用Western-blot技术及荧光显微镜检测荧光蛋白在细胞内的表达情况。结果表明:试验成功扩增到300bp的gB基因、760bp的EGFP基因及1060bp的gB/EGFP融合基因;成功构建出pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒并转染BHK细胞;Western-blot技术及荧光显微镜检测显示,融合蛋白在BHK细胞中成功表达。说明通过荧光蛋白研究目的蛋白的作用位点是可行的。

2013年滨州地区猪链球菌病发病特点及分析

为充分了解滨州及周边地区猪链球菌病的发病率和发病特点,以期为猪链球菌病的科学防控提出建设性建议,特开展了2013年滨州地区猪链球菌病发病特点及分析研究工作。在研究过程中,开展了病原菌的分离纯化、生化和分子生物学鉴定和药物敏感性试验,并对链球菌与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒混合感染进行了数据统计分析。结果显示,筛选到46株猪源链球菌,阳性分离率约为24.9%,存在较高程度的耐药性和多重耐药现象;链球菌与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒混合感染程度不同,总的混合感染率为58.7%。

伪狂犬病病毒疫苗株SA738侵染BHK-21细胞诱导其凋亡及Caspase3表达情况分析

旨在深入了解猪伪狂犬病病毒疫苗株PRV SA738侵染BHK-21细胞后,诱导细胞凋亡,细胞凋亡的时间及相关细胞凋亡因子表达情况。通过测定传统疫苗毒株Bartha-K61株和实验室人工筛选的gI-/gE-/PRV SA738病毒株滴度,分别利用2株疫苗毒株侵染BHK-21,采用原位双荧光染色法检测细胞凋亡,用分光光度法测定细胞凋亡因子Caspase-3表达情况。结果表明,低剂量gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株均延迟侵染细胞的凋亡。缺失疫苗毒株gI-/gE-/PRV SA738延迟侵染细胞的凋亡时间比Bartha-K61疫苗毒株时间长,但侵染细胞增殖速度下降。细胞凋亡后期最终细胞死亡,正常细胞细胞死亡后无凋亡小体。gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株侵染细胞凋亡后期凋亡小体形成,并检测到膜结构。在病毒侵染早期细胞内关键凋亡细胞因子Caspase3表现为上调。Caspase-3参与了病毒侵染过程中细胞凋亡的调控。

2013年黄河三角洲地区猪源链球菌病发病特点及分析

为充分了解黄河三角洲地区猪源链球菌病的发病率和发病特点,为黄河三角洲地区猪链球菌病的科学防控提出建设性建议,开展了黄河三角洲地区猪源链球菌病发病特点及分析研究工作,进行了病原菌的分离纯化、生化鉴定和分子生物学鉴定、病原菌的毒力试验和药物敏感性试验,并对猪链球菌与猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病三种病毒性疾病混合感染进行了数据统计分析。结果表明:筛选到46株猪源链球菌,阳性率为24.9%;分离株对小鼠均具有高致病性,存在较高程度的耐药性和多重耐药现象;不同阶段生猪的链球菌与猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病混合感染程度不同。

一例猪瘟混感猪肺炎支原体、沙门菌病例的诊治

2012年4月份，山东东营一规模化猪场送病猪到滨州畜牧兽医研究院诊断中心。经问诊及临床症状、病理剖检和实验室诊断，确诊为猪瘟、猪支原体肺炎与沙门菌混合感染，经采取积极的防治措施，病情得到了有效控制，现报道如下。