乙肝病毒RNA复制子疫苗与DNA疫苗对小鼠免疫效率的比较

为建立并获取更有效的乙肝疫苗,本实验通过将所构建的HBVRNA复制子疫苗和DNA疫苗分别免疫小鼠,检测细胞免疫与体液免疫的效果。结果表明,以pSFV为基础构建的疫苗载体免疫小鼠后采集的血清中抗体效价不随免疫剂量的增加而提高,在较低剂量免疫的时候,RNA复制子疫苗所产生的抗体效价优于DNA疫苗。并且RNA复制子疫苗在以较低剂量免疫后脾细胞CTL活性高于DNA疫苗。本研究证明HBVRNA疫苗比DNA疫苗表达效果更好,安全性更高,更具有应用前景。

基因工程实验创新性教学实践与探索

基因工程实验是一门理论与技术并进的新兴学科,传统的实验教学不能使学生很好的对这门课程进行系统的理解。创新性实验教学的开设有利于提高学生的综合能力。该文对基因工程创新性实验教学进行了初步的实践与探索,介绍了一些经验与体会。

生长抑素shRNA的慢病毒包装及对生长抑素的抑制作用

采用慢病毒(LV)载体介导siRNA感染宿主细胞,研究其对内源性生长抑素(Somatostatin,SS)的抑制作用。首先将筛选出的psh2与辅助质粒共转染293T细胞包装获得假病毒颗粒LV-sh2,同时,包装产生LV-sh0和LV-GFP作为阴性对照。超速离心,梯度稀释法测定病毒滴度,结果提示所构建的重组病毒滴度约为6×107ifu/mL。病毒感染BHK-21细胞,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,在感染细胞的基因组中PCR检测到了病毒基因,表明病毒感染获得了高效的基因转移和表达效率。荧光定量PCR和RIA检测表明,LV-sh2对内源性SS的mRNA和蛋白质水平均有显著的抑制作用(86.49%和78.80%,P<0.05)。

基因工程综合性实验项目的开展与探索

基因工程实验课是生物技术专业的主干课程,本课程存在着大量的实验技术,传统的单个技术的学习,学生对技术的掌握缺乏系统性。针对目前的实验现状,本文对基因工程综合实验项目进行了开展与初步的探索。

反枝苋种子萌发特性的研究

为确定不同因素对反枝苋种子萌发特性的影响,采用正交试验设计研究三因素五水平,即不同浸种药剂、不同浸泡时间以及不同浓度盐(NaCl)胁迫处理对反枝苋种子发芽的影响,又采用单因素试验进一步测定反枝苋种子对NaCl的耐盐能力以及复萌能力。结果表明:浸种药剂和NaCl浓度对发芽率有显著影响(P<0.05),浸种时间对发芽率没有影响(P>0.05),影响次序为浸种药剂=NaCl浓度>浸种时间;发芽率随NaCl浓度的升高而呈下降的趋势(P>0.05),反枝苋种子耐盐半致死浓度介于80～100 mmol/L之间,耐盐极限浓度介于100～120 mmol/L之间;反枝苋种子能够在一定浓度的NaCl溶液中保持活力,复萌率和总发芽率皆随NaCl浓度的升高而呈上升的趋势(P<0.05)。

特异性和非特异性猪脾转移因子的制备及其免疫活性比较

目的制备特异性和非特异性猪脾转移因子(Transfer factor,TF),并比较二者的理化特性及免疫活性。方法采集免疫猪和非免疫猪脾脏,采用冻融-透析法提取猪脾特异性和非特异性转移因子,检测二者的理化性质;E-玫瑰花环试验检测二者的活性;利用环磷酰胺复制小鼠免疫抑制模型,MTT法检测二者对小鼠淋巴细胞转化的影响。结果特异性及非特异性猪脾转移因子蛋白含量分别为0.392和0.026 mg/ml,核酸含量分别为1.130 6和0.987 7μg/μl,无菌试验、热原试验和安全试验均未出现异常,符合相关规定要求。特异性和非特异性猪脾转移因子均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加E-玫瑰花环的形成率。特异性猪脾转移因子对免疫抑制小鼠、生理盐水组小鼠及正常小鼠外周血淋巴细胞转化均有明显的免疫增强作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),且特异性猪脾转移因子的免疫增强作用显著高于PHA组(P<0.01);而非特异性猪脾转移因子对免疫抑制小鼠、生理盐水组小鼠及正常小鼠外周血淋巴细胞转化均无明显的免疫增强作用(P>0.05),且明显低于PHA对照组(P<0.05)。结论特异性猪脾转移因子比非特异性猪脾转移因子具有更明显的免疫增强作用。