免疫突触形成的生物学特点及其光学成像研究

免疫突触(immunological synapse,IS)是抗原提呈细胞与T细胞免疫识别时,多种分子参与、分阶段不断变化的过程,涉及黏附分子、细胞因子、信号传导分子、细胞骨架蛋白等多分子的聚集或离散.其形成不仅促进T细胞和抗原提呈细胞的稳定接触,而且激活T细胞信号传导途径,促进T细胞的活化和增殖.对IS的研究可以从分子水平解释免疫激活、免疫耐受、病原微生物感染与免疫细胞相互作用的机制,为进一步揭示疾病发生的分子机制,寻求疾病防治的靶向分子提供新的思路.近年来,光学成像的发展为可视化研究IS形成与T细胞活化的关系提供了有力帮助,为研究生理病理状态下的免疫应答提供了有力工具.

HCMV感染动物生殖细胞的实验研究

目的 探讨HCMV感染是否引起大鼠和家兔的睾丸、卵巢组织的损伤。方法 将人巨细胞病毒AD169毒株经静脉接种50只大鼠和30只新西兰兔，30d后以原位杂交和免疫组化方法检验病毒感染动物组织的证据，以组织病理学方法检查动物睾丸、卵巢组织的病理变化。结果 接种病毒之动物睾丸、卵巢组织内可查到病毒抗原或基因，睾丸组织多见生精细胞变性、坏死，精细胞减少甚至消失。结论 HCMV感染可以导致动物睾丸组织生精细胞损伤和生精功能下降。

黄酮外用酊剂治疗外阴白斑的药效学研究

目的:探讨黄酮外用酊剂治疗外阴白斑的药效学。方法:将黄酮提取物配成0.2%(含25%乙醇)的酊剂。通过体外抑毒实验,小鼠抗炎、止痛、止痒实验,大鼠肉芽肿实验,及初步临床治疗116名外阴白斑患者,探讨了黄酮酊剂与治疗外阴白斑有关的药理机制和初步临床疗效。结果:该药具有明显止痛、止痒、促进损伤组织愈合、抗慢性肉芽肿、抗急性炎性渗出和抗病毒的功效。结论:黄酮酊剂治疗外阴白斑药效确实,见效快,使用方便,安全、不良反应少,值得临床进一步使用。

高脂饮食和病毒感染损伤血管内膜组织的比较研究

为了比较病毒感染与高脂饮食造成家兔的血管组织病理变化。将 6 0只家兔分为对照组 (正常对照组 )、灭活病毒组、高脂饮食组、病毒感染组四组 ,随后给予相应处理。 6 0d后取动物血管组织 ,以免疫组织化学方法检测组织内病毒抗原作为病毒感染的证据 ,分析高脂饮食与病毒感染损伤血管内膜的光镜和电镜病理学特点。结果发现 ,对照组动物血管组织无论光镜或电镜均未见明显异常。高脂组动物光镜下在血管查到脂质沉积 ,红细胞粘附 ;扫描电镜可见内皮细胞破损 ,有红细胞和白细胞粘附于内皮细胞表面 ;透射电镜可见动物血管内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞内有脂滴。在病毒组动物 ,光镜检查发现血管组织损伤主要为内皮细胞的变性、坏死和脱落 ,部分血管腔内有密度较高的呈丝状、颗粒状似“血栓样堆积物” ;扫描电镜发现内皮细胞表面有丝状物粘附 ;透射电镜检查发现血管基底膜增宽 ,厚度不均 ,内皮细胞微突增多 ,核呈分叶状 ,异染色质积聚 ,靠核膜处电子密度增高 ,核膜呈皱折状。在一份血管标本的平滑肌细胞浆内查到可疑病毒颗粒 ;免疫组织化学法在多组织细胞、尤其是血管内皮细胞查到人巨细胞病毒抗原。实验结果提示 ,病毒感染与高脂饮食造成的血管内皮细胞损伤病理改变不同。

HCMV感染动物胃肠组织损伤实验研究

目的 探讨HCMV感染是否引起大鼠和家兔胃肠组织损伤。方法 将人巨细胞病毒 (HumanCyto megalovirus,HCMV)AD1 6 9毒株静脉接种大鼠和新西兰兔 ,大鼠 90d、兔 30d后 ,检查动物胃、肠组织的病理变化 ,用免疫组化方法和原位杂交方法检查组织中的病毒抗原和DNA片段。结果 接种病毒之部分动物出现食量减少、粘液性大便 ,胃粘膜组织可见淋巴细胞浸润 ,肠粘膜变性坏死 ,甚至有穿孔灶 ;在粘膜细胞中查到病毒抗原或DNA片段。结论 HCMV感染可以侵犯动物胃肠组织并引起该组织病理损伤。

HCMV大小鼠眼组织损伤模型的初步研究

目的 探讨接种人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)是否引起Wistar大鼠、昆明种小鼠眼组织损伤。方法 将HCMVAD1 6 9毒株经静脉接种Wistar大鼠和昆明种小鼠 ,观察动物眼部发病情况 ,原位杂交检测动物眼组织中的HCMVDNA片段。结果 接种病毒后部分动物缓慢出现眼部发病 ,局部分泌物增多、浑浊甚至失明 ;经原位杂交于视锥、视杆细胞和角膜内皮细胞中检出HCMVDNA片段。结论 HCMV可以感染动物眼组织 。

Nama1va细胞与人白细胞干扰素抗单纯疱疹病毒的研究

用本室自制的Namalva细胞与人白细胞干扰素(IFN),对培养在微孔塑料培养板的人胚肺成纤维细胞(HEL)进行病毒生长抑制试验。结果:Namalva-IFN在750U/ml、人白细胞IFN在500U/ml浓度时,可抑制100TCID_(50)单纯疤疹病毒Ⅰ型(HSV_1)的生长繁殖。在联合用药的细胞培养抑毒试验中,Namalva-IFN与无环鸟苷表现为协同作用,与病毒唑表现为相加作用。

真菌提取物JN219抗病毒谱的初步研究

目的:探讨真菌提取物JN219的体外抗病毒谱。方法:采用体外细胞病变法,研究JN219对疱疹病毒科病毒(HCMV、HSV-1、HSV-2)、腺病毒科病毒(Ad3)、副粘病毒科病毒(RSV)、呼肠病毒科病毒(RVSA11)、正粘病毒科病毒(流感甲地方株、流感乙地方株)、小RNA病毒科病毒(COX B1-6)、弹状病毒科病毒(VSV)共15株病毒的抗病毒活性。将JN219与以上病毒作用1 h后接种于相应宿主细胞(同时设有病毒对照和细胞对照),当病毒对照病变达到90%以上时终止培养,宿主细胞用1%中性红染色,在450 nm处读取吸光度A值,计算细胞存活率、半数中毒浓度(TD50)、半数有效浓度(IC50)和抑毒指数(TI)。并根据TI判断JN219的抗病毒活性,确定其抗病毒谱。结果:JN219对HCMV、RV(SA11)、VSV有抑制作用,其IC50分别为1.42、0.96和1.22μg/ml,TI分别为35.26、52.30、40.82;对HSV-1、HSV-2、RSV、流感病毒甲、流感病毒乙有部分抑制作用;对COX B1-6、腺病毒(Ad3)无作用。结论:JN219抗病毒谱比较广泛。

巨细胞病毒活动感染与冠心病

目的:探讨人类巨细胞病毒(HCMV)近期感染与冠心病(CAD)的关系。方法:用ELISA法检测正常人群(365例)和CAD(急性心肌梗死41例、心绞痛79例和隐匿型CAD111例)人群血清HCMV-IgM抗体,并通过检测血清肌酸肌酶同工酶(CK-MB)将CAD人群分为急性组和慢性组,比较两组HCMV-IgM抗体水平的差异。结果:在231例病人血清标本中,HCMV-IgM抗体阳性95例(41.1%);在对照组中,365例健康查体者HCMV-IgM抗体阳性84例(23.0%)。两组相比较有极显著性差异(χ2=22.08,P<0.0001)。急性心肌梗死组阳性24例(58.5%)同心绞痛组31例(39.2%)和隐匿型CAD组40例(36%)相比,HCMV-IgM抗体阳性率有显著性差异(χ2=4.04,P<0.05和6.21,P<0.025)。CK-MB阳性组43例(51.2%)和CK-MB阴性组55例(37.4%)相比,HCMV-IgM抗体阳性率有显著性差异(χ2=4.15,P<0.05)。结论:CAD人群有较高的HCMV-IgM抗体阳性率,急性CAD人群的HCMV-IgM抗体阳性率要显著高于慢性CAD。

健康免疫状态家兔接种HCMV AD_(169)株死亡原因的初步探讨

本研究将人巨细胞病毒ＡＤ１６９株以１０３ＴＣＩＤ５０接种于新西兰兔后，５～２０ｄ内动物死亡３３．３３％。将死亡动物可疑器官作病理学检查发现，早期死亡动物双肺广泛充满浆液性渗出物，稍后死亡动物肺脏肺泡壁增厚，尘细胞增多，伴有不同程度渗出性病变，肝脏、肾脏出现灶状变性坏死灶，人巨细胞病毒抗原定位检测在上述受到损伤的组织细胞中查到ＨＣＭＶ特异抗原，表明人巨细胞病毒感染家兔造成的肺脏、肝脏、肾脏的严重损害。

单克隆与多克隆抗体快速诊断轮状病毒性胃肠炎的比较研究

轮状病毒胃肠炎是广为流行的急性传染病,严重影响婴幼儿的生命与健康。实验诊断方法多,比较繁复,使用的动物免疫血清诊断试剂,又有制备较困难、效价低,且受非特异性因素影响等缺点,为探索更为快速简易和特异敏感的方法,我们制备了抗轮状病毒单克隆抗体(McAb),用之与多克隆抗体(PcAb)对比,进行了快诊轮状病毒胃肠炎的比较研究。

MTT法检测细胞因子抗巨细胞毒效应

本文采用MTT法和形态观察法比较检测细胞因子抗HCMV效应,以期了解MTT法用于反映病毒致细胞病变效应的可行性,寻找有效、合理的抗 HCMV制剂。结果发现:（1）MTT法能以定量方式区映病毒致细胞病变效应、结果更为客观、灵敏、便于统计学处理;（2）10 000U/ml IFN-α、125U/ml TNF-α、625U/ml IFN-γ、625U/mlIL-6单独均具有有效的抗HCMV效应,TNF-α和IFN-α或IFN-γ有显著的协同抗HCMV效应。结果表明:MTT法可用于反映病毒致细胞病变效应,用于滴定病毒的滴度,检测IFN的效价和细胞因子或药物抗病毒效应;IFN-γ、IFN-α、TNF-α及IL-6是有效的抗HCMV制剂。

氨甲酰基促红素的制备及其对过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞保护作用的观察

目的制备氨甲酰基促红细胞生成素并研究其对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。方法将促红细胞生成素与氰酸钾共同作用使其转化为氨甲酰基促红细胞生成素,并通过电泳鉴定。分别选用300、400μmol/LH2 O2作用于SH-SY5Y细胞12 h后分别加入相同浓度的氨甲酰基促红细胞生成素及促红细胞生成素,作用24 h终止培养,分别测定各组的噻唑兰(MTT)、乳酸脱氢酶值,通过Annexin V/PI双染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Caspase-8的表达,比较氨甲酰基促红素及促红素对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并探讨其作用机制。结果成功将促红素已氨甲酰化为氨甲酰基促红素。经氨甲酰基促红细胞生成素与促红细胞生成素作用后,H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的MTT值增高,乳酸脱氢酶降低,细胞凋亡率减少。结论氨甲酰化促红素对氧自由基损害的SH-SY5Y细胞具有与促红素同样的保护作用,且在一定浓度范围内保护程度随着浓度的升高而增加。