脉动真空清洗机清洗眼科器械效果的研究

目的研究脉动真空清洗消毒器对眼科器械的清洗效果,为医院消毒供应工作提供实际数据支撑,通过与国外设备进行对比,促进国产医疗器械发展。方法在实验中选取本供应中心2020年1—5月清洗的眼科器械结果作为统计样本,分别采用脉动真空清洗消毒器与传统方法清洗,比较器械的清洗效果;同时调查本市内其他医院的其他厂家设备对比器械损坏率、干燥效果。结果传统方法清洗1021件,脉动真空清洗1058件,清洗效果目测与生物荧光检测法相结合,其中传统清洗方法器械合格率为92.73%,真空清洗合格率为97.14%;ATP检测:传统清洗阳性率为15.23%,真空清洗阳性率为5.11%;器械破损率三个厂家基本相同;干燥差别较大:真空清洗为95.0%,国外设备为81.0%。结论真空清洗消毒器对眼科器械的清洗具有良好的效果,可减少手工处理强度,提高工作效率,并降低器械损坏率,用户满意度优于同类型对照国内外品牌。

免疫刺激剂CpGODN防治烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎的实验研究

背景研究证实免疫调节剂CpGODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用，但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚。目的研究局部应用CpGODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎。方法建立烟曲霉菌变态反应性结膜炎小鼠模型，用CpGODN或对照ODN（GpCODN）对其进行干预，PBS干预作为阴性对照。实验分为预防实验（模型动物在变态反应原再次激发前给药）和治疗实验（激发后给药），对小鼠眼部临床症状进行评分。取小鼠结膜组织进行组织病理学检查，并计数标本中的炎性细胞。应用实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）法动态观察小鼠结膜组织中TLR4mRNA的变化；将烟曲霉菌免疫原与眼部回流淋巴结和脾脏的细胞进行共培养，流式细胞分析培养细胞中调节性T淋巴细胞的比例和活化状态。结果预防实验中，结膜下注射CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较，小鼠眼部过敏症状评分差异均无统计学意义（P〉0．05）；CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较结膜组织中性粒细胞数降低，差异均有统计学意义（21．25±11．59vs30．75-4-_11．44，21．25±11．59vs69．00±9．90；t=5．140，t=3．210，P〈0．01）；TLR4mRNA表达上调。在治疗实验中，CpGODN组与GpCODN对照组、模型对照组比较，跟部过敏症状评分降低（t=4．000，t=2．750，P〈O．05）；中性粒细胞数显著减少（t=4．870，t=3．829，P〈0．01）。CpGODN治疗组小鼠眼部回流淋巴结CD4^＋CD25^＋细胞以及CD4^＋CD25^＋CD69’细胞所占的比例均显著高于GpCODN组和PBS对照组（P〈0．05）。结论CpGODN通过上调结膜TLR4的表达、活化Treg细胞来预防和治疗烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎，预先结膜下注射和点眼均可减轻小鼠眼部过敏症状和晚期结膜炎性细胞的聚集。

ATP生物荧光检测仪在眼科精密器械清洗质量控制中的应用效果

目的探讨ATP生物荧光检测仪在眼科精密器械清洗质量控制中的应用效果。方法医院于2019年1月开始对眼科精密器械开展全面清洗管理,将ATP生物荧光检测仪应用在器械清洗中,开展清洗质量控制工作,以最大程度提高眼科精密器械清洗质量,减少院内感染风险。对管理前后器械清洗质量进行对比。结果将ATP生物荧光检测仪应用到眼科精密器械清洗工作中后,有齿类、无齿类、管腔类器械的清洗合格率均明显提高,与全面管理前相比差异显著(P<0.05);ATP监测表面采样、水质采样检测结果显示,器械外表和管腔内细菌检测数量相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论将ATP生物荧光检测仪应用到眼科精密器械清洗中,可显著提高器械清洗效果,在清洗质量控制中发挥重要作用。

人工智能技术在眼科问诊中的探索与应用

目的:探索人工智能技术在眼科门诊问诊方面的应用。方法:本研究结合眼科专家共识和诊疗常规,建立思维导图,导入脱敏数据,训练人工神经网络模型,通过人机对话实现既往史、现病史、过敏史以及家族史的智能采集。临床实践采用人-机对照实验对系统进行验证。结果:29367例患者中,干预组(人工智能组)患者3850例,对照组(医生人工采集组)25517例,在等候时间上,干预组平均等候847 s,比对照组减少108s,差异有统计学意义(P<0.05),在问诊耗时上,干预组平均162 s,比对照组减少9 s;在门诊病历完整性方面,干预组为96.62%,与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人工智能技术应用在问诊环节可提高门诊医生工作效率,缩短患者的候诊时间,系统准确度高,医生认可度高,在病历完整性上与医生人工采集无统计学差异。

关注哺乳动物晶状体再生及“晶状体干细胞”的研究

一些哺乳动物的晶状体摘出后，在囊袋存在的情况下可以再生出新的晶状体。目前普遍认为囊袋内不能被完全清除而残留的晶状体上皮细胞（LECs）是晶状体再生的来源。但是哺乳动物的晶状体再生并非晶状体发育的简单重复，残余LECs的无序增生、移行和转化会影响再生晶状体的透明性。大量研究围绕LECs异常增生的机制进行，而近年来“晶状体干细胞”理论被逐渐提出。总结国内外关于哺乳动物晶状体再生研究的现状，提出一些观点和看法，希望为临床预防后发性白内障以及对其进行药物治疗提供新的靶点和思路。

慢性泪囊炎相关角膜溃疡的临床特征及治疗转归

目的分析慢性泪囊炎相关角膜溃疡的临床特征及治疗转归,为临床合理诊疗提供依据。方法采用系列病例观察研究方法,纳入2016年1月至2020年1月于山东第一医科大学附属眼科医院诊断为慢性泪囊炎相关角膜溃疡患者31例31眼,平均年龄(53.0±10.8)岁。随访观察眼部临床特征、病原微生物检查及药物敏感试验、治疗及转归。结果患者慢性泪囊炎病史平均(3.6±1.9)年,角膜溃疡多位于角膜周边部,形态呈圆形,边界清晰。角膜刮片培养阳性率为74.2%(23/31),19眼查见细菌,3眼查见真菌菌丝,1眼同时查见革兰阳性球菌及真菌菌丝。微生物培养阳性率为74.2%(23/31),20眼细菌培养阳性(革兰阳性球菌16眼,革兰阴性杆菌4眼),3眼真菌培养阳性。革兰染色阳性球菌对万古霉素、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星敏感率分别为100%(16/16)、87.5%(14/16)、81.3%(13/16)、75.0%(12/16)。所有患者均通过手术治疗慢性泪囊炎,其中22眼行鼻内镜下泪囊鼻腔造口吻合术,7眼行泪囊摘除术,2眼行泪道探通联合置管术。角膜溃疡深度<1/3角膜厚度(CT)者9眼,其中6眼经药物治疗(10.8±3.2)d后溃疡愈合,3眼行角膜病损切除术;溃疡深度为1/3~2/3 CT者6眼,均行结膜瓣遮盖术;溃疡深度>2/3 CT者16眼,其中6眼行板层角膜移植术,8眼行穿透性角膜移植术,2眼合并感染性眼内炎行眼内容物剜除术。结论慢性泪囊炎相关角膜溃疡多位于角膜周边部,以革兰阳性球菌感染最为常见。轻症患者应用敏感抗生素治疗后角膜溃疡逐渐愈合,感染严重的患者需要根据角膜溃疡的深度选择合适的手术进行治疗。

不同剂量链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠角膜病变模型的对比研究

目的 比较研究单次高剂量和多次低剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射诱导糖尿病小鼠角膜病变的成模情况及其病理表现的异同. 方法 正常6～8周龄雄性C57BL/6小鼠80只,随机分为正常对照组、多次低剂量1个月组、多次低剂量3个月组（60 mg/kg STZ连续腹腔内注射5次）和单次高剂量1个月组（150 mg/kg STZ腹腔内注射1次）,每组20只.比较各模型组小鼠成活率、糖尿病成模率、平均体质量、糖化血红蛋白（HbA1c）水平.各组小鼠均行角膜上皮刮除术,采用荧光素钠染色法检测角膜上皮的缺损面积百分比.采用免疫荧光染色法检测角膜上皮p-Akt、Sirt1和Ki67的表达情况.采用Cochet-Bonnet触觉测量器检测角膜上皮刮除前、刮除后3、7、10和14 d角膜敏感度,采用免疫荧光染色检测角膜上皮刮除前、刮除后14 d角膜神经密度.结果 多次低剂量1个月组、多次低剂量3个月组和单次低剂量1个月组小鼠糖尿病成模率分别为90％、80％和70％.各糖尿病模型组小鼠血液HbA1c水平较正常对照组明显升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;各糖尿病模型组间小鼠血液HbA1c水平比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.角膜上皮刮除后24 h和48 h,多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜上皮缺损面积百分比均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜上皮p-Akt、Sirt1和Ki67的荧光强度均低于正常对照组.角膜上皮刮除前和刮除后14d,多次低剂量1个月组小鼠角膜敏感度、角膜神经密度与正常小鼠相比,差异均无统计学意义（均P＞0.05）;但多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜神经敏感度、角膜神经密度明显下降,与正常对照组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 低剂量STZ注射1个月不能诱导糖尿病小鼠出现角膜病变特征,而高剂量STZ注射后1个月和低剂量STZ注射后3个月的糖尿病小鼠出现典型的角膜上皮和神经病变,可作为研究1型糖尿病性角膜病变的理想动物模型.

激光角膜屈光术后继发圆锥角膜的临床特征及治疗预后分析

目的分析激光角膜屈光术后继发圆锥角膜的发病特征和临床表现,并评估其治疗预后。方法回顾性病例研究。收集2013年1月至2021年12月于山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院)就诊的激光角膜屈光术后继发圆锥角膜的患者27例(54只眼),其中男性患者22例,女性患者5例,4例单眼发病,23例双眼发病,患者年龄为19~48岁,平均(28.6±5.9)岁。分析其发病特征、临床分期、角膜地形图的参数资料、治疗方法和疗效。结果27例继发圆锥角膜患者术前的屈光手术方式为:准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)24例,准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术(LASEK)1例,经上皮准分子激光屈光性角膜切削术(Trans PRK)1例,飞秒激光基质透镜切除术(FLEx)1例。患者接受角膜屈光手术的年龄为15~34岁,平均(19.4±3.6)岁。27例(54只眼)患者中,潜伏期4只眼,初发期16只眼,完成期34只眼。完成期患者均表现出角膜前突变薄,8只眼(24%)可见Fleischer环、7只眼(21%)可见Vogt线。角膜地形图中角膜后表面形态表现为:初发期患者以桥型递增型(38%)和桥型递减型(25%)为主,完成期患者则以岛型(64%)和不完全岛型(18%)为主。初发期患者主要采用框架眼镜(50.0%)和透气性角膜接触镜(RGP)(31.3%)治疗,而完成期患者多数需行角膜交联术(CXL)(29.5%)或板层角膜移植术(LKP)(50.0%)手术治疗,17例接受LKP术的患者均为LASIK术后继发圆锥角膜患者。结论激光角膜屈光术后继发圆锥角膜以LASIK术后多见,初发期患者的角膜地形图后表面形态较少进展为岛型,完成期患者多数需行角膜交联术或角膜移植术手术治疗。

神经肽P物质与神经营养性角膜病变的关系及其应用现状

神经营养性角膜病变是由多种因素损伤角膜感觉神经,导致角膜知觉减退,进而引起角膜营养障碍和炎症性改变,其常表现为复发性或持续性的角膜上皮缺损、角膜创伤愈合的延迟,产生角膜溃疡,甚至穿孔。目前临床靶向性治疗神经修复仍有一定难度。P物质作为一种神经递质,在眼部神经、角膜上皮细胞、角膜基质细胞及多种免疫细胞中广泛表达,通过启动胞内信号通路产生相应生物学功能。近年来,随着P物质相关研究增多,神经营养性角膜病变的治疗方式逐渐发生改变。本文回顾神经营养性角膜病变的临床特征及发病机制,从感染、手术及全身性疾病导致神经营养性角膜病变方面,总结神经肽P物质与神经营养性角膜病变关系及其应用前景。

沉默信号调控因子1在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达及意义

背景糖尿病是引发角膜神经病变的高危因素之一。沉默信号调控因子1（Sirtl）在糖代谢、脂代谢、胰岛素分泌调节中发挥着重要的作用，并与神经系统性疾病密切相关。目前，关于Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系尚不完全清楚。目的探讨Sirtl在1型糖尿病C57BL／6-Ins2Aklta／J小鼠角膜及三叉神经节中的表达及其意义，探讨Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系。方法取C57BL／6-Ins2Aklta／J雄性小鼠与同窝出生的野生型C57BL／6小鼠各8只，分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组。两组小鼠均在12月龄时过量麻醉处死，处死前检测空腹血糖、测体质量。取小鼠三叉神经节和角膜组织，采用苏木精-伊红染色法检测两组小鼠三叉神经节和角膜组织的组织病理学变化，用免疫组织化学法检测三叉神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的表达和定位；用荧光定量PCR法检测Sirtl mRNA在三叉神经节和角膜组织中的表达；采用Westernblot检测两组小鼠三又神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的相对表达量，并进行比较。结果C57BIM6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节细胞大小不均，细胞排列较为疏松，神经纤维排列紊乱，角膜上皮细胞层数减少，角膜变薄；野生型C57BL／6小鼠神经节细胞排列紧密，细胞形态均一，神经纤维排列整齐。免疫组织化学法检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达强度低于野生型C57BL／6小鼠。荧光定量PCR结果显示，SirtlmRNA在C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜表达的灰度值显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．56±O．03VS．0．98±0．13），差异有统计学意义（t=5．853，P=0．010）；C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节中SirtlmRNA表达的灰度值为2．45±0．18，低于野生型C57BL／6小鼠的2．51±0．22，但差异无统计学意义（t=0．587，P=0．599）。Westernblot检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．780±0．017vs．1．300±0．012），差异有统计学意义（t=33．140，P=0．001）；两组小鼠间三叉神经节中Sial蛋白的表达差异无统计学意义（1．100±0．015 vs．1．110±0．017）（t=0．430，P=0．709）。结论12月龄C57BL／6一Ins2Akita／J小鼠角膜的神经和结构发育异常，Sirtl参与糖尿病角膜病变的发病，有可能是潜在的靶点分子。

p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil在不同年龄人角膜内皮细胞中的表达及其意义

背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil的表达。方法收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织，记录供体年龄。经锥虫蓝一茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精一伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常。将收集到的角膜环材料按照年龄分为〈30岁组、30～50岁组和〉50岁组，每组30个角膜环，其中15个用于总RNA提取，另外15个角膜环等分为3份，分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察。提取每个角膜环的总RNA，行实时荧光定量PCR检测，观察p16^INK4amRNA、BmilmRNA和Ki67mRNA在CECs中的表达。行冰冻切片免疫组织化学染色，检测p16^INK4a、Bmil和Ki67蛋白在CECs中的表达。免疫荧光法检测p16”“。在CECs的表达。结果苏木精一伊红染色结果显示，供体角膜上皮、基质和内皮结构完整，排列规则。实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长，p16^INK4a。mRNA的表达增强，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达减弱，差异均有统计学意义（F=5．703，P=0．014；F=3．950，P=0．042；F=548．500，P=0．000），其中与〈30岁组比较，〉50岁组p16^INK4amRNA在CECs中的表达量明显升高，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义（P=0．006、0．013、0．000）。免疫组织化学结果可见，p16^INK4a。蛋白在各组CECs中均有表达，主要位于细胞核内，而Bmil与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体，与实时荧光定量PCR的结果基本一致。免疫荧光染色显示，年老供体CECs p16^INK4a的表达强度强于年轻供体。结论细胞衰老主导基因p16^INK4a的表达随年龄增加而增高，其抑制基因Bmil的表达随年龄增加而降低。

白细胞介素-6对糖尿病小鼠角膜缘干细胞活化的促进作用和角膜上皮愈合的加速作用

背景白细胞介素（IL）-6既介导炎症反应过程又在损伤修复中发挥重要作用，但其具体机制及其在糖尿病角膜组织损伤修复中的作用值得探讨。目的探讨IL-6在正常和糖尿病小鼠角膜缘干细胞活化和角膜上皮修复过程中的作用及其机制。方法正常6～8周龄C57BL/6小鼠52只，采用随机数字表法随机分为正常对照鼠32只和糖尿病模型鼠20只，采用50 mg/kg链脲佐菌素连续腹腔内注射5 d的方法诱导建立小鼠糖尿病模型。正常对照小鼠和糖尿病模型小鼠均行角膜上皮刮除术，然后分别于刮除后即刻和48 h结膜下注射IL-6或等容量PBS，采用荧光素染色法评价随时间延长的角膜上皮的愈合情况。体外培养小鼠角膜上皮干/祖细胞（TKE2细胞系），采用结晶紫染色法评估不同质量浓度IL-6处理后细胞克隆率（CFE），并与空白对照组进行比较；采用免疫荧光检测法和Western blot法检测细胞和小鼠再生上皮中干细胞标志物ΔNP63、Ki67的表达以及关键转录因子STAT3磷酸化水平；采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测小鼠角膜再生上皮中IL-6的mRNA及蛋白水平。结果角膜荧光素染色检查显示，正常对照小鼠和糖尿病模型小鼠PBS注射组与IL-6注射组注射后24、48和72 h残留角膜上皮缺损面积占原始缺损面积的百分比随角膜上皮损伤后时间延长均明显缩小，同时间点IL-6注射组角膜上皮缺损面积均明显小于PBS注射组，组间总体差异均有统计学意义（正常对照组：F分组＝19.982，P〈0.01；F时间＝589.350，P〈0.01；糖尿病组：F分组＝25.411，P〈0.01；F时间＝334.807，P〈0.01）。空白对照组及10、20、50、100 ng/ml IL-6处理组CFE分别为（13.23±1.12）%、（15.87±1.30）%、（21.69±1.62）%、（25.33±1.28）%和（18.67±1.54）%，随着IL-6质量浓度的增加CFE逐渐增加，总体比较差异有统计学意义（F＝35.547，P〈0.01）。50 ng/ml IL-6处理5、10、15、30和60 min细胞中ΔNP63、Ki67和p-STAT3蛋白的相对表达量随着处理时间的延长均逐渐增加，各时间点细胞中ΔNP63、Ki67和p-STAT3蛋白的相对表达量均明显高于空白对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。糖尿病组和正常对照组小鼠角膜上皮刮除后24 h的再生上皮中IL-6 mRNA相对表达量分别为0.45±0.21和1.00±0.16，糖尿病组小鼠角膜再生上皮中IL-6 mRNA相对表达量较正常对照组小鼠下降56%，差异有统计学意义（t＝3.42，P＝0.03），糖尿病小鼠角膜上皮刮除后48 h的再生上皮中IL-6蛋白质量浓度为（257±12）ng/μl，明显低于正常对照组小鼠的（323±17）ng/μl，差异有统计学意义（t＝5.60，P〈0.01）。结论IL-6能够通过激活STAT3信号通路促进正常和糖尿病小鼠角膜缘干细胞的活化和增生，进而促进角膜上皮修复，而封闭内源性IL-6则会延迟小鼠角膜上皮的修复。

直接PCR法对感染性棘阿米巴角膜炎的诊断价值

背景棘阿米巴角膜炎的致盲率极高，发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎，常规的临床诊断方法费时较长，特异性差，极易错过治疗的“时间窗”。常规PCR法检测简单、特异、有效，但由于病变标本取材量少，不易提取组织DNA，限制了其临床应用。目的探讨非提取组织DNA的直接PCR法扩增棘阿米巴虫株18SrRNA保守序列在棘阿米巴角膜炎快速诊断中的可行性。方法从山东省眼科研究所暨青岛眼科医院诊治的10例棘阿米巴角膜炎患者的病变角膜中分离10株棘阿米巴虫株，经鉴定均为T4基因型虫株。用直接PCR法分别扩增棘阿米巴原虫、白念珠菌、绿脓杆菌、I型单纯疱疹病毒以及正常人角膜上皮细胞以确定该方法的特异性。将棘阿米巴原虫稀释至不同的浓度以确定直接PCR法的敏感性。采用SPF级6周龄健康雌性BALB／c小鼠构建棘阿米巴角膜炎动物模型，于感染后第1、3、5、7、10、15天获取角膜组织，分别进行直接PCR、实时定量PCR（real—timePCR）、K0H封片镜检和原虫培养鉴定，比较各种方法的有效性和可行性。结果直接PCR法仅能扩增棘阿米巴DNA，其他病原体DNA均未扩增出；在每个获取的棘阿米巴角膜炎样本中最少可检测到10个棘阿米巴原虫。在棘阿米巴角膜炎小鼠模型中，直接PCR法在感染后第1、3、5、7、10、15天的阳性检出率分别为80．0％、90．0％、80．0％、70．0％、70．0％和50．0％，总阳性率为73．3％，高于原虫培养法的31．7％，差异有统计学意义（P=0．005）；K0H封片镜检的总阳性率为56．7％，real—timePCR法检测的总阳性率为61．7％，均略低于直接PCR法，差异均无统计学意义（P=0．056、0．172）。结论直接PCR法操作简单，在上述4种方法中对棘阿米巴原虫检测的特异性和敏感性最高，能够快速诊断棘阿米巴角膜炎，尤其对于待检标本少而无法提取DNA的患者可首选。

后囊膜混浊的体外上皮-间质转化模型的建立

背景上皮一间质转化（EMT）是导致后囊膜混浊（PCO）的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中LECsEMT的发生情况。方法利用健康供体的40只尸眼行体外模拟的白内障摘出术，游离晶状体囊袋后用昆虫针固定于培养皿，置于含体积分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养液中培养4周，分别于培养后0、3、7、14和28d在光学显微镜下观察培养囊袋中LECs的生长情况；收集0、3、7和28d的囊袋组织制备组织病理学切片，采用苏木精一伊红染色法检测囊袋上LECs的细胞形态；采用免疫组织化学染色法检测EMT标志物OL—SMA、E—cadherin和Vimentin蛋白在囊袋上LECs中的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测不同时间点囊袋上LECs中a-SMA、E—cadherin和VimentinmRNA及其蛋白的表达变化。结果未进行培养的囊袋后囊膜上未发现LECs生长，囊袋培养后3d可见后囊膜周边出现LECs并逐渐向中央区增生，培养后7dLECs完全覆盖后囊膜，略呈铺路石样外观并出现皱褶，此后随着培养时间的延长皱褶的数量增多并伸长，囊袋张力增强。免疫组织化学染色结果显示，随培养时间的延长，囊袋上LECs中E—cadherin的表达强度逐渐下降，而a-SMA和Vimentin的表达强度逐渐增强。实时荧光定量PCR检测表明，培养后0、3、7、14和28d囊袋上LECs中E—cadherinmRNA的相对表达量分别为3．35±0．13、1．47±0．20、1．13±0．14、1．00±0．85和0．23±0．03，VimentinmRNA的相对表达量分别为1．00±0．73、1．05±0．14、2．24±0．43、2．84±0．34和8．570±0．40，d—SMAmRNA的相对表达量分别为1．00±0．06、2．68±0．28、4．24±0．05、2．05±0．90和15．30±0．19，总体比较差异均有统计学意义（E—cadherinmRNA：F=23．430，P=0．000；VimentinmRNA：F=8．915，P=0．002；d—SMAmRNA：F=103．500，P=0．000），其中培养后28d囊袋上LECs中E—eadherinmRNA的相对表达量最低，而VimentinmRNA和a—SMAmRNA的相对表达量均最高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。Westernbla检测结果表明，培养后0、3和28d囊袋上LECs中E—eadherhin蛋白表达的灰度值分别为1．443±0．017、1．023±0．003和0．568±0．018，Vimentin蛋白表达的灰度值分别为0．565±O．012，1．156±0．007和1．24±0．009，d＋SMA蛋白表达的灰度值分别为0．195±0．045，0．693±O．036和1．501±0．005，总体比较差异均有统计学意义（E—cadherhin：F=2787．000，P=0．000；Vimentin：F=4488．000，P=0．000；d—SMA：F=1173．000，P=0．000），其中培养后3、28dLECs中E—cadherhin蛋白表达明显低于0d，而Vimentin和a-SMA蛋白表达明显高于0d，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究中的新囊袋模型进行LECs体外培养能模拟体内白内障术后晶状体后囊LECs的EMT自然过程，是探讨PCO发生机制和方法新的体外细胞模型。

T和B细胞缺陷对真菌性角膜炎发病过程的影响(英文)

目的:探讨特异性免疫应答是否参与真菌性角膜炎(fungalkeratitis,FK)发病早期的病理过程。方法:通过角膜基质内注射1×105白色念珠菌孢子或烟曲霉菌孢子的方法在相同免疫遗传背景的Balb/c小鼠和重症联合免疫缺陷小鼠(severecombinedT/B-nullimmuno-deficiency,SCID)诱导FK。用裂隙灯监测疾病临床变化特征并依据角膜病灶面积和病变深度以及角膜表面规则性进行临床评分。在病变显著的时间点,摘除小鼠眼球用HE和PAS染色观察小鼠角膜组织的病理变化特征。用菌落形成实验检测角膜组织中活菌数量的变化,用ELISA检测小鼠血浆和角膜组织匀浆液中细胞因子IL17、IFNγ和IL10的动态变化。结果:Balb/c小鼠和SCID小鼠都可诱导出典型的FK。在白念菌性角膜炎或烟曲霉菌性角膜炎中,无论是大体临床表现和疾病分数,抑或组织病理变化和真菌负荷分析,在两种小鼠之间均无显著性差异;两种小鼠间在血浆或角膜组织中IL17及IFNγ的水平等方面也没有显着差异。但诱导两种FK的SCID小鼠中,无论角膜匀浆液抑或外周血浆,在任何时间点均检测不到IL10的表达,而同样发生角膜炎的Balb/c小鼠则在FK发病早期检测到IL10的表达。结论:在免疫遗传背景相同的条件下,小鼠中获得性免疫组分的存在与否并不影响FK的发病过程,提示小鼠中初次FK的发病与固有性免疫组分相关。

DNA损伤标志物γH2AX在氧诱导视网膜新生血管形成中的作用

背景氧浓度变化诱导产生视网膜新生血管，并导致细胞DNA损伤反应。以往认为促血管生成因子过度表达是血管新生的原因，但DNA损伤是否与视网膜新生血管有关尚不清楚。目的探讨参与DNA损伤修复的磷酸化蛋白γH2AX与小鼠视网膜血管新生的关系。方法应用72只17日龄C57BL/6J小鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、OIR阳性对照组和OIR阴性对照组，每组18只。视网膜铺片免疫荧光法对比观察视网膜新生血管形态学变化及γH2AX表达情况。将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为正常对照组、低氧模型对照组、阳性干扰组和阴性干扰组。细胞处理后12 h，采用免疫荧光法比较并分析各组γH2AX的表达情况，采用Western blot法定量检测各组γH2AX的表达。结果正常对照组、OIR模型组、OIR阳性对照组和OIR阴性对照组17日龄小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积比较，总体差异均有统计学意义（F＝437.62、93.05，均P〈0.01），其中OIR模型组和OIR阴性对照组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较正常对照组明显增大；OIR阳性对照组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较OIR模型组和OIR阴性对照组明显减小，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。17日龄小鼠视网膜γH2AX焦点团聚集出现情况与新生血管和无灌注区面积大小变化趋势相一致。正常对照组、低氧模型对照组、阳性干扰组和阴性干扰组HUVECs中γH2AX焦点阳性细胞百分数比较，差异有统计学意义（F＝64.97，P〈0.01），其中低氧模型对照组和阴性干扰组γH2AX焦点阳性细胞百分数均较正常对照组明显增大，差异均有统计学意义（均P〈0.01）；阳性干扰组均较低氧模型对照组和阴性干扰组明显减小，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。各组HUVECs间γH2AX的表达量与免疫荧光趋势相一致。结论缺氧环境下，γH2AX在小鼠视网膜血管和体外培养的HUVECs中均大量表达。γH2AX的表达与视网膜血管新生有关。低氧诱导的DNA损伤修复反应可能与视网膜血管新生有一定关系。

准分子激光上皮下角膜磨镶术与飞秒激光辅助原位角膜磨镶术矫治高度近视的效果及安全性比较

目的对准分子激光上皮下角膜磨镶术(LASEK)和飞秒激光辅助原位角膜磨镶术(FS-LASIK)治疗高度近视的有效性、安全性以及稳定性进行比较。方法采用队列研究方法,纳入2013年1月至2016年12月在山东省眼科医院接受LASEK或FS-LASIK且1年随访期资料完整的高度近视患者75例141眼病历资料,其中接受LASEK者28例56眼作为LASEK组,术前等效球镜度为(-8.29±1.64)D;接受FS-LASIK者47例85眼作为FS-LASIK组,术前等效球镜度为(-7.97±1.38)D。采用小数视力法记录术眼术前和术后最佳矫正视力(BCVA)和术后裸眼视力(UCVA);采用主觉验光法测定术眼等效球镜度。评估2个组术眼术后有效性指数、安全性指数、稳定性和可预测性以及术后并发症,其中有效性指数为术眼术后UCVA与术前BCVA比值,安全性指数为术眼术后BCVA与术前BCVA比值,稳定性为术后6个月与12个月间等效球镜度差异,可预测性为术后6个月和12个月屈光度在±0.50 D以内的眼数比例。结果术后6个月和术后12个月,LASEK组和FS-LASIK组术眼有效性指数和安全性指数比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。术后6个月和12个月LASEK组术眼等效球镜度分别为(0.08±0.30)D和(0.10±0.38)D,差异无统计学意义(t=0.376,P>0.05);FS-LASIK组术后6个月和12个月术眼等效球镜度分别为(0.00±0.32)D和(0.01±0.35)D,差异无统计学意义(t=0.227,P>0.05),2个组术后屈光稳定性较好。术后12个月,LASEK组和FS-LASIK组等效球镜度在±0.50 D以内者分别占91.1%(51/56)和96.4%(82/85),2个组间差异无统计学意义(χ2=1.838,P>0.05)。术后12个月LASEK组4眼出现角膜上皮下混浊,术后BCVA小于术前。结论LASEK和FS-LASIK矫治高度近视均安全、有效。角膜上皮下混浊是引起LASEK术后BCVA下降的主要原因。

荧光染色与过碘酸希夫染色对真菌性角膜炎诊断效果的比较

目的比较荧光染色和过碘酸希夫染色对真菌性角膜炎(FK)的诊断效果。方法收集2017年1月至2019年5月于山东第一医科大学附属眼科医院就诊且角膜刮片或真菌培养阳性的FK患者147例角膜标本147份,其中行穿透角膜移植术(PKP)患者84例,板层角膜移植术(LKP)患者42例,病灶切除患者21例;选取11例单纯疱疹病毒性角膜炎活检组织作为阴性对照。对角膜组织标本分别行真菌荧光染色和过碘酸希夫染色。将染色完成的切片分别置于荧光显微镜和光学显微镜下查找真菌菌丝或孢子。比较2种染色方法的阳性率、不同手术方式获得的FK角膜组织以及不同真菌菌株标本间2种染色方法的阳性例数。结果过碘酸希夫染色的阳性率为60.5%(89/147),真菌荧光染色的阳性率为79.6%(117/147),荧光染色法诊断FK的阳性率明显高于过碘酸希夫染色法,差异有统计学意义(χ2=28.00,P<0.01),2种染色方法的特异性均为100%。PKP手术切除标本荧光染色的阳性率为85.7%(72/84),明显高于过碘酸希夫染色的阳性率65.5%(55/84),差异有统计学意义(χ2=17.00,P<0.01);LKP手术切除标本荧光染色的阳性率为71.4%(30/42),明显高于过碘酸希夫染色的52.4%(22/42),差异有统计学意义(χ2=8.00,P<0.01);病灶切除标本分别采用荧光染色和过碘酸希夫染色法进行检查,阳性率分别为71.4%(15/21)和57.1%(12/21),差异无统计学意义(χ2=1.30,P=0.25)。不同真菌菌株标本间2种染色的阳性例数不同,其中茄病镰刀菌复合群、谲诈腐霉菌、烟曲霉复合群、季也蒙假丝酵母、木霉和铺叶沼兰褐莺真菌行荧光染色的阳性例数分别为19、5、5、1、1和1例,行过碘酸希夫染色的阳性例数分别为11、0、3、0、0和0例。11例阴性对照均为阴性结果。结论荧光染色技术应用于石蜡包埋角膜组织检查真菌成分较过碘酸希夫染色法敏感性高,可显著提高真菌检测的阳性率。

穿透性角膜移植术后发生继发性青光眼的影响因素及治疗方法

目的探讨穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)后发生继发性青光眼的影响因素和治疗方法。方法回顾性临床研究。收集2016年1月至2018年11月在山东省眼科医院行PKP术后继发青光眼患者60例(60眼),根据发病时间、发作次数、术前有无青光眼病史对术后发生继发性青光眼患者进行分组。采用t检验、Mann-Whitney U检验或χ2检验比较组间的临床资料,采用Logistic回归分析术后发生早期青光眼、术后青光眼多次发作的危险因素。结果PKP术后继发性青光眼患者60例(60眼),随访(16.0±11.0)个月,总发生率为10.5%(60/573)。术后早期青光眼发病率为6.1%(35/573),主要诱因包括术后严重前房炎症及虹膜粘连19例,浅前房5例,其他11例。35例患者中药物治疗21例,联合手术治疗14例,以小梁切除术为主,共8例,最终眼压控制率为71.4%(25/35)。术后晚期青光眼发生率为4.4%(25/573),激素类药物诱发15例,周边虹膜前粘连6例,其他4例。单纯药物治疗21例,眼压控制率72%(18/25)。不同发病时间组间前房积脓、青光眼治疗方式比较,差异均有统计学意义(χ2=6.898,P=0.009;χ2=4.000,P=0.046);术前有青光眼者术后青光眼发作频繁,差异有统计学意义(χ2=5.137,P=0.023)。术前严重的前房积脓是术后早期继发性青光眼发生的危险因素,术前青光眼病史是继发性青光眼多次发作的危险因素。结论严重的角膜感染、青光眼病史、糖皮质激素药物使用是PKP术后青光眼发生的影响因素。PKP治疗的不同时期继发性青光眼防治重点不同,单纯药物和手术治疗对眼压控制均有效且无明显差异。

角膜溃疡患者与正常人结膜囊分离金黄色葡萄球菌差异基因表达分析

目的分析致角膜溃疡的金黄色葡萄球菌和正常人结膜囊分离的金黄色葡萄球菌的差异表达基因,探讨金黄色葡萄球菌性角膜溃疡可能的发病机制。方法收集2018年1—8月在青岛眼科医院检验科分离培养的10株金黄色葡萄球菌,其中5株来自经培养证实的细菌性角膜溃疡患者;5株来自正常人结膜囊细菌培养。应用转录组测序技术(RNA-Seq)对10株金黄色葡萄球菌进行转录组测序,对获得的数据进行生物信息学分析,以P≤0.05且差异倍数≥2为条件筛选显著差异表达基因(DEGs),并利用基因本体(GO)以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库对DEGs进行功能注释和富集分析。结果2个组间共发现270个DEGs,其中138个表达上调,132个表达下调。分析差异基因的功能发现,编码α溶血素、δ溶血素、毒力因子EsxA和LysR家族转录调节器的基因在角膜溃疡分离株中均显著上调。GO富集分析显示,DEGs的功能主要涉及与代谢相关的生物学功能,其中次黄嘌呤核苷酸的合成与代谢最显著。KEGG通路分析表明,多条代谢通路发生显著变化,其中金黄色葡萄球菌感染、双组分信号系统、丙酮酸代谢、嘌呤代谢等途径对探讨金黄色葡萄球菌性角膜溃疡的致病机制至关重要。结论角膜溃疡患者分离得到的金黄色葡萄球菌和正常人结膜囊分离的金黄色葡萄球菌之间存在差异基因表达,为进一步研究金黄色葡萄球菌性角膜溃疡的致病机制和治疗靶点相关的基因或通路提供了实验基础。