CD34免疫亲合柱在脐血造血干祖细胞分离与扩增中的应用

目的 :观察CD34免疫亲合柱对脐血造血干 祖细胞分离纯化的效果及纯化后CD34+ 细胞的增殖分化特性。方法 :采用CD34免疫亲合柱分离脐血单个核细胞 (MNC)中的CD34+ 细胞 ,流式细胞技术 (FACS)进行细胞表面标志测定。将分离前后的细胞加入造血生长因子进行液态扩增培养和多向祖细胞集落 (CFU GEMM)培养。结果 :经CD34免疫亲合柱分离后脐血中CD34+ 细胞为 49 6 2 %± 17 6 9% ,明显高于脐血MNC(1 17%± 0 6 8% ) ,细胞回收率为 5 4 38%± 11 91%。分离后CD34+ 细胞和脐血MNC经造血生长因子刺激培养 2 0d分别扩增 5 6 1 0 0倍和 44 44倍。培养至 12d时 ,免疫亲合柱分离组CD34+ 细胞阳性率为 5 3 38% ,对照组为 7 91%。分离组CFU GEMM产率明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。结论 :CD34免疫亲合柱应用于脐血造血干 祖细胞的分离可充分富集CD34+ 细胞 ,且分离后的CD34+ 细胞具有明显的增殖效应和CFU GEMM形成能力。

Th1/Th2相关细胞因子基因检测方法的建立

建立检测Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子的方法。方法：设计６对用于ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＦＮｒ和β－ａｃｔｉｎ基因扩增的引物，建立可用于Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子检测的ＲＴ－ＰＣＲ技术，同时用切口平移法制备６种细胞因子的ｃＤＮＡ探针，建立ＲＮＡ斑点杂交技术。结果：用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交技术检测２０种肿瘤细胞株，发现１１／２０为Ｔｈ２型细胞因子表达，８／２０为Ｔｈ０型，１／２０未检测到细胞因子。结论：ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＲＮＡ斑点杂交技术是检测Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子的有效方法。

CD34^+细胞免疫亲合柱的研制

本文建立了利用免疫亲合柱纯化CD34+细胞的方法。将亲合素交联于聚丙烯酰胺凝胶Bio Gel上 ,装于塑料柱制成免疫亲合柱 ;将脐血单个核细胞与生物素化抗CD34单克隆抗体作用后 ,加到该免疫亲合柱上进行纯化 ,得到纯化的CD34+细胞。纯化后CD34+细胞纯度达 48 8%± 18 2 % ,细胞回收率为 5 5 6 %± 14 5 % ,台盼蓝染色法显示活细胞达 98%。利用该方法纯化CD34+细胞具有纯度高、回收率高、细胞活性好等优点 ,是一种方便有效的细胞纯化方法。