RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和SCF等四种细胞因子膜外区cDNA

应用RT—PCR方法,体外扩增获得人IL—6、IL—10、IL—13和SCF膜外区蛋白质编码序列.又运用基因重组手段,将这些基因序列分别插入到表达性载体PBV220中,转化大肠肝菌DH5α,经过筛选和鉴定,获得了上述细胞因子膜外区cDNA克隆.SDS—PAGE和生物学活性测定证实:IL—6、IL—10和IL—13已在大肠肝菌中得到表达,尤其是IL—6获得了高效表达,其表达量约占菌体总蛋白质含量的30%左右.

rIL-6对小鼠血液系统的体内调节效应

为了探讨rIL-6对小鼠血液系统的调节效应,我们进行了rIL-6对小鼠胸腺、脾脏细胞总数和外周血细胞总数影响的体内实验研究。实验采用C57BL/6荷瘤或正常小鼠。给予rIL-6或生理盐水,15d后取小鼠外周血及胸腺、脾脏进行细胞计数。结果表明（1）rIL-6可以明显提高小鼠外周血白细胞和血小板总数,正常鼠分别为158.18％和29.15％,荷瘤鼠分别为81.24％和11.32％;（2）rIL-6可以提高小鼠胸腺和脾脏细胞总数,正常鼠分别为273％和95.8/,荷瘤鼠分别为30.4％和27.3％;（3）rIL-6对外周血红细胞无作用。

硼的环境水平

本文对环境中硼的水平进行了论述。主要论及空气、地面水、地下水、雨水、污水及土壤中硼的分布情况和水平。同时通过对不同国家、不同地区环境中硼的浓度的报道和比较 ,分析了造成周围环境中高硼污染的可能因素 ,并对水生生物和陆生生物体内硼的浓度变化和硼的可能来源进行了探讨 ,观察到了水生植物、陆生植物对硼都有生物积聚现象 ,但在水生食物链和动物中硼无生物扩增效应。

hIL-13融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

通过ＲＴＰＣＲ技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）中扩增出约０３ｋｂ的ｈＩＬ１３基因片段，经ＤＮＡ重组技术，插入到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ２中，转化入感受态的大肠杆菌ＴＧ１中，成功地构建了ｈＩＬ１３的基因工程表达菌株ｈＩＬ１３ｐＧＥＸ４Ｔ２／ＴＧ１。经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后表达的ＧＳＴＩＬ１３融合蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ证明分子量约３６ｋＤ，表达量约占菌体蛋白总量的１０％～３０％。复性后ＩＬ１３融合蛋白的生物学活性可达８０～１２０Ｕ／ｍｌ。复性后的融合蛋白经凝血酶作用后，可被切割成２６ｋＤ的ＧＳＴ与１０ｋＤ的ｈＩＬ１３。

IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺的初探

本文对IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺进行了研究.结果表明在发酵过程中pH的稳定（7.0）、糖的补充（3%）、O2的及时供给（<10PSIG持续泵入）和发酵密度的控制(OD550=1.9),对提高发酵产量至关重要（12g/L）.在包含体制备及溶解工艺中,以4mol/L脲去除脂质及杂蛋白,1%SDS溶解包含体,可获最大IL2活性单位（2.35×107u/ml,即相当于5L发酵可获3.53×109u）.

rIL-6抗癌机理初探—rIL-6对小鼠Mφ、LAK、NK、CTL细胞体内外调节效应

随着IL-6研究的日益深入，IL-6的抗癌效应研究越来越受到重视。为了进一步探讨IL-6对MΦ、LAK、NK、CTL细胞的调节效应，我们进行了rIL-6对小鼠MΦ、LAK、NK、CTL细胞调节效应的体内外实验研究，实验采用6～7周龄，体重为18—22g，雌性C57BL／6荷瘤(EL6)或正常小鼠，

重组人IL-2的纯化和初步质量监测

从重组IL-2菌株发酵后包含体中,采用增溶分离、分子筛层析、超滤和反相HPLC等工艺,纯化出具备临床质量要求的IL-2.全套工艺在10d内完成,每周期可获IL-2达200mg(8×10~8CU),产品比活为4×1O^6CU/mg蛋白,回收率为37.5%,产品纯度为99%.产品经家兔热原试验、小鼠安全试验和内毒素测定符合临床要求.根据本实验室规模每周期具备放大5～10倍的能力.

IL-13对造血系统的作用

IL-13具有与某些造血生长因子相似的基因结构、染色体定位和蛋白质分子结构,具有与造血生长因子IL-4相似的受体,并对造血干细胞、中性粒细胞等其有明显的调节作用,很有可能成为一种极其重要的新的治疗性细胞因子而被开发,应用于临床。

IL-13 cDNA探针的制备及应用

采用缺口平移的方法用生物素标记hIL-13的cDNA片段作为探针,检测传代培养的肿瘤细胞株中IL-13的基因表达,RNA斑点杂交和Northern杂交的结果均显示这些肿瘤细胞株有不同程度IL-13基因的表达.该探针本身的显色灵敏度较高,用5～10pg量的探针点膜可见明显的显色.探针的特异性良好,含IL-13mRNA的核酸杂交结果呈阳性,而不表达IL-13基因的RNA与该探针的杂交结果呈阴性.IL-13cDNA探针的制备为进一步研究IL-13的生物学特性提供有效的手段.