肠癌中雌激素受体β与核因子κB互作分析

目的:结直肠癌是全球第三大常见肿瘤,核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和激活蛋白1(acti-vator protein-1,AP-1)已被证实可促进结直肠癌的发生,而ERβ在肿瘤发生过程中具有保护作用。然而NF-κB和AP-1是否存在协同作用,且与ERβ是否存在蛋白互作尚不清楚。本文通过分析肿瘤坏死因子α(tumor necrosis fac-torα,TNF-α)处理后的结肠癌细胞系HT29和SW480探索ERβ、NF-κB和AP-1在结肠癌中的交互作用机制。方法:利用TNF-α转录组测序结果,综合p65和ERβ染色质免疫沉淀测序结果,利用R语言在肠癌细胞系HT29和SW480中构建TNF-α、NF-κB/p65和ERβ互作网络,探索蛋白互作关系。结果:TNF-α通过p65的DNA结合调控一部分基因的表达,这些基因主要富集在NF-κB和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路。NF-κB/p65和MAPK通路的组分与AP-1家族蛋白存在潜在的相互作用。ERβ的过表达并未显著影响TNF-α介导的基因调控,但可能通过MAPK和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt途径调节AP-1的活性。此外,ERβ降低了HT29中p65的DNA结合位点,增加了SW480中的p65结合位点,提示ERβ对NF-κB的调控与细胞性别相关。结论:在结直肠癌中NF-κB、ERβ和AP-1存在潜在交互作用:TNF-α可通过NF-κB调控AP-1,而过表达ERβ可以改变NF-κB介导的调控作用,且ERβ对NF-κB的影响可能与性别有关。

纳米二氧化硅诱导巨噬细胞焦亡对肺成纤维细胞的影响

目的探讨纳米二氧化硅(SiNPs)诱导巨噬细胞焦亡对原代肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响。方法构建SiNPs致巨噬细胞焦亡模型后,采用纳米高光谱定位巨噬细胞中SiNPs、光学显微镜观察巨噬细胞SiNPs暴露后形态、Western blot检测焦亡相关蛋白表达。通过胰酶和Ⅳ型胶原酶消化法提取小鼠原代肺成纤维细胞;以光学显微镜和免疫荧光技术表征并鉴定原代肺成纤维细胞;体外构建SiNPs诱导巨噬细胞焦亡与原代肺成纤维细胞共培养模型。以正常巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为MF组,焦亡巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为PF组,采用qRT-PCR、Western blot技术分别检测原代肺成纤维细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平和蛋白表达,免疫荧光、免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞标志物α-SMA蛋白表达。结果纳米高光谱、形态学观察和Western blot检测结果显示,SiNPs成功诱导J774A.1巨噬细胞发生焦亡,光学显微镜观察发现,与胰酶消化法相比,Ⅳ型胶原酶法提取小鼠原代肺成纤维细胞的纯度更高;免疫荧光结果提示Ⅳ型胶原酶法获得的成纤维细胞波形蛋白呈现典型的微丝结构,细胞骨架结构完整。qRT-PCR结果显示,PF组MMP2和MMP9 mRNA水平较MF组增加(P<0.05),Western blot结果显示,PF组MMP2和MMP9蛋白表达水平较MF组升高(P<0.05),免疫荧光结果显示,与MF组相比,PF组α-SMA红色荧光强度增加,免疫细胞化学染色为强阳性。结论SiNPs诱导巨噬细胞焦亡能够促进原代肺成纤维细胞MMP2和MMP9表达水平上调,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化。

基于高通量测序计算免疫细胞评分构建子宫内膜癌诊断与预后模型

目的基于高通量测序数据计算子宫内膜癌组织中免疫细胞评分,探讨免疫细胞浸润与子宫内膜癌诊断、预后的关系。方法数据来源于癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库,采用caret包将数据按8∶2分为训练集和验证集,通过xCell对免疫细胞类型进行识别和丰度分析,Logistic回归分析对肿瘤组织进行判别、建模,Cox回归进行生存分析,曲线下面积(AUC)用于模型灵敏度和特异度分析,生存曲线采用Log-rank检验。结果共纳入544例子宫内膜癌样本和23例癌旁正常组织样本,病例组与对照组基线资料差异无统计学意义,均衡可比,P>0.05。不同免疫细胞在肿瘤组织与瘤旁正常组织的分布不同,对总样本、训练集及验证集有较好的区分(P<0.05),训练集AUC为0.93(0.89~0.97),验证集AUC为0.90(0.78~1.00)。样本总体、训练集及验证集2、3、5年生存概率AUC点估计值均≥55.7%,样本总体和训练集免疫评分低者生存概率高(P<0.05),验证集差异无统计学意义,P>0.05。结论子宫内膜癌变引发高强度免疫细胞浸润,依赖免疫细胞评分的统计学模型可用于子宫内膜癌诊断和预后评价。