2016—2020年山东省儿童蛲虫感染监测结果分析

目的了解山东省儿童蛲虫感染现状及变化趋势,为调整和制订蛲虫病防控策略提供科学依据。方法2016-2020年,在山东省以县为单位设立51个土源性线虫病监测点,对3~9岁儿童采用改良加藤厚涂片法和透明胶纸肛拭法检测蛲虫感染,对检测结果进行描述性分析。结果2016-2020年,山东省在51个土源性线虫病监测点累计检测5060名3~9岁儿童,蛲虫感染率为2.23%,逐年感染率分别为3.99%(26/651)、1.70%(14/824)、0.96%(8/837)、2.90%(45/1552)和1.67%(20/1196),差异有统计学意义(χ^(2)=21.455,P<0.01)。鲁中、鲁东、鲁南和鲁北地区儿童蛲虫感染率分别为1.25%(15/1198)、1.85%(14/755)、3.18%(84/2640)和0(0/467),差异有统计学意义(χ^(2)=27.326,P<0.01);男、女童蛲虫感染率分别为1.98%(56/2831)和2.56%(57/2229),差异无统计学意义(χ^(2)=1.916,P>0.05);不同年龄儿童蛲虫感染率差异有统计学意义(χ^(2)=16.448,P<0.05),其中6岁儿童感染率最高(3.18%,25/786)、3岁儿童感染率最低(0.75%,6/800)。结论2016-2020年山东省3~9岁儿童蛲虫感染率整体维持在中等水平,在省内存在地区分布差异,需采取综合性防治措施加以控制。

2011—2018年山东省淄博市“三热”病人疟原虫血片质量分析

目的分析山东省淄博市“三热”病人疟原虫血片质量,为制订和调整该市消除疟疾后监测策略和措施提供科学依据。方法对2011—2018年淄博市市级镜检站复核的全部“三热”病人疟原虫阴性血片和辖区内全部阳性血片进行复核,对血片制作、染色、清洁度以及复核结果进行分析。结果2011—2018年淄博市市级镜检站共复核疟原虫阴性血片2141张,阳性血片39张。阴性血片制片合格率为99.44%,染色合格率为97.62%,清洁度合格率为93.65%,复核一致率为100%,未发现漏检;复核阳性血片39张,血片制片合格率为46.15%,染色合格率为61.54%,清洁度合格率为76.92%,复核一致率为97.44%,其中虫种分型错误1张。淄博市各区(县)血片制作合格率和染色合格率差异均有统计学意义(P值均<0.05),血片清洁度合格率差异无统计学意义(χ^2=13.72,P>0.05);2011—2018年淄博市各年度血片制作、染色和清洁度合格率差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论淄博市各区(县)血片质量较高,但市级血片质量有待提高。今后应进一步加强基层疟原虫镜检培训力度和血涂片质量控制,促进血片质量不断提高,以保证疟疾消除后监测阶段疟原虫镜检能力。

2021年烟台市近海海鱼异尖线虫感染率及居民异尖线虫病防治知识知晓率调查

目的了解2021年山东省烟台市近海海鱼异尖线虫感染率和当地居民异尖线虫病相关知识知晓情况,为制定异尖线虫病防控措施提供参考依据。方法2021年11月,于山东省烟台市顺鑫港口购买海鱼,检测海鱼异尖线虫感染情况,并分析不同鱼种、不同部位异尖线虫感染率。采用Spearman秩相关分析海鱼体长和体质量与异尖线虫感染度间的相关性,对当地居民饮食习惯和异尖线虫病防治知识知晓率进行问卷调查。结果共解剖海鱼20种201尾,其中11种77尾检出异尖线虫,鱼种异尖线虫感染检出率为55.00%(11/20)、海鱼总感染率为38.31%(77/201);异尖线虫感染阳性海鱼中累计检出异尖线虫3468条,平均感染度为45.04条/尾。Spearman秩相关结果显示,鮟鱇鱼体长(rs=0.74,P<0.05)和体质量(rs=0.79,P<0.01)与异尖线虫感染度呈正相关,比目鱼体长与感染度呈正相关(rs=0.68,P<0.05),其他种类海鱼体长、体质量与异尖线虫感染度均无相关性。问卷调查结果显示,53.38%男性和56.57%女性对异尖线虫病防治知识完全不了解,不同行政村居民生熟菜板不分比例差异有统计学意义(χ^(2)=17.89,P<0.01),不同年龄组居民有生食或半生食海产品习惯者比例差异有统计学意义(χ^(2)=28.27,P<0.01)。结论2021年烟台市近海海域海鱼异尖线虫感染率、感染度均较高,当地居民异尖线虫病防治知识知晓率较低;应加大对居民异尖线虫病健康教育,降低异尖线虫感染风险。

山东省首次发现福寿螺入侵

目的对山东省境内首次发现的入侵生物福寿螺进行物种鉴定。方法2021年10月,在山东省济宁市野外采集福寿螺样本进行形态学鉴定;随机选取部分福寿螺样本,取螺腹足部肌肉组织提取基因组DNA进行多重PCR扩增并测序,利用MegAlign 7.1.0软件对测序后的序列进行比对并构建系统发育树。采用肺检法检测福寿螺中广州管圆线虫感染情况。结果共采集福寿螺活体样本104只,经形态学鉴定均为福寿螺属物种;随机挑选12只成螺样本,经多重PCR和测序鉴定11只为小管福寿螺、1只为斑点福寿螺。104只福寿螺均未发现广州管圆线虫感染。结论山东省境内首次发现福寿螺入侵,且存在小管福寿螺和斑点福寿螺。

2015—2016年山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析

目的了解山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗性基因多态性情况。方法采集2015—2016年山东省由赤道几内亚务工返乡的输入性恶性疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA,对恶性疟原虫抗性基因Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13进行套式PCR扩增、DNA测序和序列对比分析。结果全部样本5种抗性基因目的片段均成功扩增和测序。Pfcrt野生型、突变型、混合型分别占72.8%、18.6%、8.6%,突变型全部为CVIET(下划线表示突变位点,下同);Pfmdr1野生型、突变型、混合型分别占20.0%、61.4%、18.6%,突变型主要为YF和NF;Pfdhfr野生型、突变型、混合型分别占1.4%、98.6%、0,突变型主要为AIRNI;Pfdhps野生型、突变型、混合型分别占1.4%、94.3%、4.3%,突变型主要为SGKAA;Pfdhfr和Pfdhps完全抗性基因型IRNGE占8.6%;1.4%的样本K13基因发生A578S突变。结论山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13基因均发生不同程度突变;Pfcrt突变型比例较低,Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps突变型比例较高;检测到K13基因发生A578S突变。

基于线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的山东省济宁市三带喙库蚊种群遗传多样性分析

目的了解山东省济宁市三带喙库蚊适应不同环境生态的遗传基础,为其种群结构或隔离模式研究提供参考。方法2023年6—8月,选择山东省济宁市城市、城郊及农村地区的7个采样点,采用诱蚊灯法采集蚊虫。对所采集的成蚊进行形态学鉴定,提取单只三带喙库蚊雌蚊基因组DNA,采用PCR法对细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome C oxidaseⅠ,COI)基因进行扩增、测序,并进行分子鉴定。使用DnaSP 6软件统计不同地区三带喙库蚊DNA序列的单倍型数量、单倍型多样性(haplotype diversity,Hd)、核苷酸多样性(nucleotide diversity,Pi)、序列间核苷酸差异的平均数量(average number of nucleotide differences,K)等指标,并进行中性检验。使用Arlequin 3.5.2软件计算种群固定指数(fixation index,FST)、基因流(number of migrants,Nm),并进行分子方差分析(analysis of molecular variance,AMOVA)。使用PopART和MEGA 11软件分别绘制种群单倍型网络图和系统进化树。结果从济宁市7个采样点采集的三带喙库蚊样本COI基因中成功扩增出420条序列,获得长度为603 bp的基因片段序列,其中有55个可变位点和46个单倍型,无插入和缺失突变。46个单倍型中,H01为优势共享单倍型,单倍型频率从城市地区(34.00%)向农村地区(47.00%)递增。城郊、城市、农村地区三带喙库蚊COI基因平均Hd、Pi值和K值分别为0.814、0.024、14.129,0.489、0.016、7.941和0.641、0.016、10.393;城郊地区三带喙库蚊种群多样性最高,城市地区种群多样性最低。不同类型采样点之间的配对FST分析表明,城市地区与城郊地区FST平均值为0.029,其种群间交流更为频繁。AMOVA分析结果表明,济宁市三带喙库蚊群体内变异百分比(95.74%)高于群体间变异(4.26%)。中性检验结果表明,7个采样点中仅南阳镇采集的三带喙库蚊种群偏离中性(Tajima's D=2.793,Fu's Fs=6.429,P均<0.05)。济宁市三带喙库蚊COI基因错配分布图曲线呈双峰或多峰,表明种群整体数量相对较稳定。结论线粒体COI基因可作为研究三带喙库蚊种群遗传多样性的分子标志。济宁市城郊地区三带喙库蚊种群遗传多样性高于农村和城市地区,城市和城郊地区三带喙库蚊种群间频繁发生遗传交换。

自育与非自育淡色库蚊体内菌群多样性比较

目的了解自育与非自育淡色库蚊体内菌群组成与多样性差异,从而为探索淡色库蚊自育发生机制提供参考依据。方法收集25℃自育与非自育淡色库蚊成蚊,利用Illumina NovaSeq 6000测序平台对细菌16S核糖体RNA基因高变区进行测序。采用α多样性指数分析菌群丰富度和多样性,采用β多样性指数分析菌群结构差异,通过线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)鉴别组间在丰度上具有显著差异的菌群。结果自育与非自育淡色库蚊体内菌群隶属18个门、28个纲、70个目、113个科和170个属,优势菌门主要有变形菌门、拟杆菌门等。在属水平,沃尔巴克氏体菌属为共有优势菌属,在自育及非自育淡色库蚊中的相对丰度分别为(77.6±11.3)%和(47.5±8.5)%;粪杆菌属(0.4%±0.1%)、杜氏杆菌属(0.5%±0.0%)、马赛菌属(0.5%±0.1%)等为自育淡色库蚊特有菌属。α多样性分析显示,自育淡色库蚊体内菌群Chao1指数和ACE指数大于非自育淡色库蚊(P均>0.05),而Shannon指数(P>0.05)和Simpson指数(P<0.05)小于非自育淡色库蚊。LEfSe分析结果显示,共计48个分类单元在自育和非自育淡色库蚊间存在显著差异(P均<0.05)。结论自育与非自育淡色库蚊体内菌群多样性存在显著差异。

基于CRISPR/Cas9技术的弓形虫病疫苗研究进展

刚地弓形虫是专性细胞内寄生虫,可感染多种温血动物,引起弓形虫病。弓形虫病严重危害人体健康及畜牧业生产。成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)系统(CRISPR/Cas系统)是有效的基因编辑工具之一,广泛应用于弓形虫基因敲除。本文综述了CRISPR/Cas9技术在弓形虫病单基因和双基因缺失株疫苗研究中的应用,旨在为弓形虫病疫苗研制提供参考。

微山湖区放养子代钉螺生殖腺透射电镜观察

目的观察在微山湖区螺笼放养12个冬季、繁殖12代的成年钉螺睾丸、卵巢形态变化。方法以亲代来源于长江扬州段的微山湖子代成年钉螺为实验组,以长江扬州段江滩阴性成年钉螺为对照组,解剖两组钉螺获得完整的睾丸和卵巢标本。以常规方法固定、脱水、包埋标本,烘箱内聚合,用超薄切片机常规切片,取切片在透射电子显微镜下拍照和观察,比较两组钉螺生殖腺超微结构。结果对照组钉螺精子细胞尾部横切面可见"9+2"微管结构,头端可见三角形顶体和呈螺旋形且致密的核质;实验组钉螺精子细胞尾部横切面"9+2"微管结构消失,头端染色质密度稀疏。对照组钉螺卵巢卵细胞核仁、核膜清晰,细胞质内可见卵黄体、脂质体、内质网,核膜为双层曲折,核仁均匀;实验组钉螺卵巢卵细胞核膜光滑,核仁不明显,细胞内含物更加稀疏。结论经过12个冬季放养,钉螺不能完全适应中国北方的自然环境,其生殖腺超微结构发生了明显变化,这可能是微山湖区放养钉螺逐步减少甚至趋于消亡的原因之一。

低温对淡色库蚊海藻糖和海藻糖酶的影响

目的了解低温环境对淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量的影响。方法在4℃环境中对淡色库蚊四龄初幼虫和雌成蚊分别冷处理0、1、3、6、12、18、24 h和0、1、3、6、12、18、24、36、48、72 h,采用酶联免疫吸附法测定低温处理不同时间淡色库蚊幼虫和成蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量。结果经低温处理后,淡色库蚊幼虫和雌成蚊体内海藻糖和海藻糖酶平均含量均明显增加。幼虫和雌成蚊体内海藻糖变化趋势一致,均在低温处理3 h达到最大值,平均值分别为(2.4588±0.3792)mg/g和(2.8257±0.2111)mg/g。海藻糖和海藻糖酶在低温处理前6 h内变化幅度较大,经过一段时间适应后,稳定保持在相对较高水平。结论低温能快速诱导淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶产生,海藻糖和海藻糖酶在提高淡色库蚊抗寒性方面可能发挥重要作用。

中药方剂治疗迈氏唇鞭毛虫感染1例

本文报道1例迈氏唇鞭毛虫感染者,并对其诊断和中医药治疗过程进行总结。

基于iTRAQ的定量蛋白质组学技术探索淡色库蚊越冬机制

目的比较淡色库蚊越冬后与滞育准备阶段蛋白表达差异,探索淡色库蚊越冬休眠(滞育)的机制。方法采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术,对越冬滞育及准备阶段淡色库蚊进行定量蛋白质组学分析。结果淡色库蚊越冬滞育前后共鉴定出244种差异表达蛋白,其中上调蛋白126种、下调蛋白118种。生物信息学分析表明,这些差异表达蛋白与能量产生及转化、脂代谢、细胞骨架重塑、糖代谢、蛋白质转运、分子伴侣、应激耐受以及各种代谢酶等有关。结论本研究首次采用现代蛋白质组学工具鉴定淡色库蚊越冬滞育相关蛋白,初步揭示了与淡色库蚊越冬滞育相关的KEGG通路及蛋白,进一步扩展了对蚊媒越冬滞育机制的理解。

基于接头序列“GSGGSG”的细粒棘球蚴病重组多表位疫苗EgG1Y162-2(4)的制备及鉴定

目的对细粒棘球蚴病重组多表位疫苗Eg G1Y162-2(4)进行原核表达并初步鉴定。方法利用免疫信息学方法对基于接头序列“GSGGSG”的细粒棘球蚴病重组多表位疫苗Eg G1Y162-2(4)进行三维结构建模,分析其结构变化并评估该疫苗抗原性。通过Eco R I和SalⅠ双酶切构建p ET30a-EgG1Y162-2(4)重组质粒,将重组质粒转化入感受态细胞,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导蛋白表达,Western blotting鉴定原核表达蛋白产物,并应用细粒棘球蚴病患者及健康人血清分析重组蛋白抗原性。结果构建的重组疫苗EgG1Y162-2(4)三维结构串联的4个Eg G1Y162-2蛋白均能独立、有效表达且具有良好抗原性。重组质粒pET30a-EgG1Y162-2(4)在0.2 mmol/L IPTG37℃诱导4 h条件下,上清中目的蛋白表达量最高,使用60 mmol/L咪唑洗脱的蛋白成分较纯。Western blotting分析发现,重组多表位蛋白HIS-EgG1Y162-2(4)在约39 k Da位置处出现条带,且该蛋白可被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论成功构建了细粒棘球蚴重组疫苗EgG1Y162-2(4),为研究细粒棘球蚴病重组多表位疫苗奠定了基础。

利用蛋白组学解析淡色库蚊对氯氰菊酯的抗性机制

目的比较氯氰菊酯选育后抗性淡色库蚊与敏感淡色库蚊蛋白差异表达情况,揭示淡色库蚊抗氯氰菊酯杀虫剂的机制。方法利用同位素相对和绝对定量(i TRAQ)技术,结合液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)分析技术,对氯氰菊酯敏感与抗性淡色库蚊进行蛋白组定量分析。结果共鉴定出164种蛋白在氯氰菊酯抗性选育前后差异表达,其中上调蛋白54种、下调蛋白110种,大量细胞骨架结构与组成相关的表皮蛋白、幼虫表皮蛋白、蛹表皮蛋白及表皮结构成分蛋白在淡色库蚊氯氰菊酯抗性选育前后差异表达。通过平行反应监测验证了能量产生与转换、翻译、核糖体结构与生物发生、脂质转运与代谢、翻译后修饰、蛋白质周转、分子伴侣、细胞骨架、细胞内运输等13种类型的蛋白在淡色库蚊氯氰菊酯选育后差异表达,可作为潜在抗性发生标记物。结论氯氰菊酯抗性淡色库蚊中同时存在表皮抗性及代谢抗性等多种杀虫剂抗性机制,与抗氯氰菊酯杀虫剂相关的表皮基因及细胞色素P450蛋白酶可能在淡色库蚊氯氰菊酯抗性中发挥了重要作用。