核果类果树遗传转化及检测技术研究进展

综述了近年来国内外常见核果类果树遗传转化的研究进展,概述了目前果树遗传转化的主要方法,阐述了核果类果树遗传转化植株的主要鉴定方法,指出了当前研究中存在的一些问题,探讨了转基因研究未来的发展方向。

半日光间歇弥雾果树育苗系统及其应用

为解决某些果树树种繁育困难的问题,研制了半日光间歇弥雾果树育苗系统,用于甜樱桃矮化砧木吉塞拉6号嫩梢扦插育苗。通过对育苗环境主要因子的宽范围高精度调控,45d育成新苗,生根率93.66%以上,每株平均生根7.29条,新苗移栽成活率95%以上。与传统扦插育苗和组培繁育相比,育苗周期和成本均显著降低。

中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展

综述了近年来中国对甜樱桃(Prunus avium L.)病毒病及其检测技术的相关报道,介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害及特性,主要包括:李属坏死环斑病毒(PNRSV)、李矮缩病毒(PDV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、樱桃锉叶病毒(CRLV)、樱桃病毒A(CVA)、樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)、樱桃小果病毒(LChV);阐述了甜樱桃病毒检测中所用的方法、技术,包括指示植物法(生物学鉴定法)、电子显微镜技术、血清学方法、分子生物学技术方法等。

甜樱桃病毒病分子检测技术的研究

【目的】建立简便、快速、高效、准确的甜樱桃病毒分子检测方法。【方法】根据我国甜樱桃病毒病害的发生特点,先后建立和完善了几种主要病毒的单重RT-PCR、多重RT-PCR、纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法,并对各检测方法的适用范围、检测效率进行比较分析。【结果】改进后的单重RT-PCR方法利用随机引物反转录得到的c DNA模板可同时用于多种病毒的特异性检测。多重RT-PCR方法可在同一管PCR反应中同时检测多种病毒。运用纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法在植物病毒核酸提取环节简化了操作程序。【结论】该检测技术体系已应用于山东地区甜樱桃及中国樱桃等大批量植物样本的病毒检测工作之中,检测结果稳定、可靠。

山东板栗遗传多样性分析

利用29对SSR引物对26份山东主栽板栗品种进行遗传多样性分析,以了解山东板栗的遗传多样性分布情况,为种质资源的利用和开发提供依据。结果表明,SSR的遗传多样性指数的分布范围为1．2720～2．9500,Simpson指数分布范围为0．5517～0．9409。可见,山东板栗具有丰富的遗传变异。根据系统聚类分析将26个板栗品种分为3大类。同时在3大类内又将品种进行细分,第Ⅰ类全部为胶东地区的材料,第Ⅱ类为鲁中南地区和泰沂山区的材料,分为3个亚类,第Ⅲ类只含有8019份材料,其结果说明山东的3个板栗主产区内部的品种或种质间亲缘关系较近,鲁中南地区和泰沂山区的品种或种质间可能有共同的起源。

甜樱桃砧木PcDHN1的克隆及其对非生物胁迫的响应

为明确甜樱桃砧木脱水素基因特征及其在干旱、高盐和低温胁迫过程中的表达模式,以甜樱桃砧木Y1为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆了甜樱桃砧木脱水素基因Pc DHN1,利用生物信息学分析其编码蛋白特征,并采用qRT-PCR分析该基因的表达模式。序列分析显示,甜樱桃砧木脱水素基因Pc DHN1的c DNA全长893 bp,编码225个氨基酸,推测编码蛋白分子量约为23.98 k D,理论等电点为8.65。氨基酸序列分析显示,Pc DHN1含有2个Y-片段、1个S-片段和2个K-片段,具有植物脱水素蛋白的特征性结构,属于YnSK2型脱水素。表达特性分析显示,Pc DHN1在干旱、高盐和低温胁迫条件下受胁迫诱导而上调表达,但对低温胁迫响应比较迟缓,说明该基因可能参与了甜樱桃砧木对干旱和高盐胁迫的耐受调节过程。本研究结果为甜樱桃砧木抗逆基因工程提供了一定的参考。

应用FISH-AFLP技术分析平欧杂种榛主栽品种的遗传关系

【目的】建立平欧杂种榛FISH-AFLP技术体系,并应用该技术分析平欧杂种榛主栽品种的遗传关系。【方法】以达维等10个主栽品种为试材,经DNA提取、PstⅠ/MseⅠ双酶切,进行FISH-AFLP反应,数据转换为"0—1"矩阵后,使用NTSYS pc 2.11F和Popgene 1.32软件进行数据分析并作图。【结果】从64对引物中,筛选出15对多态性强的PstⅠ/MseⅠ引物,共获得1 739条谱带,引物平均多态带比率97.94%;平欧杂种榛主栽品种的相似性系数为0.7556—0.8543,当阈值为0.8398时,可分成4个AFLP群,其中,玉坠(84-310)、辽榛4号(85-41)和平欧69号(84-69)单独为1群,其他品种为1群;平欧杂种榛主栽品种的有效等位基因数、基因多样度、Shannon信息指数分别为1.3921、0.2482和0.3957,具有较高的遗传多样性;研究获得的特征条带可用于平欧杂种榛主栽品种的快速鉴别。【结论】由于平欧杂种榛的实生选优群体是多亲本组合的混合后代,因此,该群体是一个具有高度遗传多样性的群体,主栽品种间存在复杂的亲缘关系;研究构建的FISH-AFLP技术流程、筛选得到的引物以及分析得到的各项遗传参数,可为其他榛属植物的相关研究提供参考。

山东泰安甜樱桃“花叶病”树体症状观察及病毒检测

为了探明山东泰安患有"花叶病"的甜樱桃树体内感染病毒的种类,本研究以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。结果显示,10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、PDV(Prune dwarf virus,PDV)、CVA(Cherry virus A,CVA)、CGRMV(Cherry green ring mottle virus,CGRMV)、LChV-2(Little cherry virus-2,LChV-2),各病毒检出率较高。各"花叶病"甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。

果树种质资源超低温保存研究进展

超低温保存是作物种质资源离体保存的有效方法之一。本文概述了超低温保存技术在果树种质资源保存中的应用及国内外研究进展,对存在的问题进行了分析,并对其发展提出了建议。

山东地区樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)的RT-PCR检测及外壳蛋白基因的克隆

为调查我省甜樱桃感染樱桃绿环斑驳病毒(Cherry Green Ring Mottle Virus,CGRMV)情况,本研究以甜樱桃(Prunus avium L.)品种"红灯"叶片总RNA为模板,根据CGRMV基因组序列设计特异引物,对山东地区37份甜樱桃"红灯"样品进行RT-PCR检测,共检测出19份阳性样品。利用CGRMV外壳蛋白基因序列引物,从阳性植物样本中分离到约800 bp的目的片段,克隆测序,序列分析显示该片段全长807 bp,编码268个氨基酸,与GenBank中已登录的CGRMV分离物的外壳蛋白基因序列一致性为87%～97%,氨基酸序列相似性为95%～99%。该结果表明山东地区甜樱桃生产园中感染CGRMV的病例较为普遍。

蓝莓嫩枝半日光间歇弥雾扦插育苗技术研究

利用半日光间歇弥雾果树育苗系统对4个北高丛蓝莓品种嫩枝进行了扦插试验,结果表明,扦插生根率达到80%以上,扦插苗生长健壮,提高了扦插成苗率,缩短了育苗周期。利用温湿度记录仪研究了扦插期间温湿度变化情况,结果表明,利用半日光间歇弥雾果树育苗系统能够较好地控制扦插期间育苗棚内的温度和湿度,可为蓝莓的嫩枝扦插生根提供有利的环境条件。

基于UPLC-MS/MS技术对蓝莓中花青苷类物质的定性定量分析

采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在电喷雾离子源(ESI)、正离子多反应监测(MRM)模式下建立蓝莓果实中花青苷类物质的定性和定量检测方法。结果表明,11种花青苷类物质的定量限为0.26~1.50μg/kg,在0~100μg/L范围内呈现很好的线性关系,相关系数(r)为0.9950~0.9996,方法检测性良好。采用本方法对3个蓝莓栽培品种的成熟果实进行测定,分别从‘喜来’和‘蓝冠’中鉴定出11种花青苷,从‘蓝丰’中鉴定出10种花青苷,各种花青苷物质含量在3个蓝莓品种中存在明显差异,‘蓝冠’的总花青苷类物质含量明显高于‘蓝丰’和‘喜来’,‘喜来’中最低。本研究结果可为蓝莓优异种质挖掘和蓝莓花青苷产品开发奠定理论基础。

麻核桃CBF基因的克隆与生物信息学分析

CBF基因是植物CBF抗冷途径的枢纽,对增强植物抗冷能力极为重要。本研究根据已知的核桃CBF基因序列设计通用性引物,对麻核桃cDNA进行PCR扩增,成功获得麻核桃CBF基因全长序列,命名为JhCBF。JhCBF全长820 bp,包含一个645 bp的开放读码框(ORF),编码214个氨基酸。序列分析表明JhCBF与其他物种来源的CBF具有较高的同源性,其中,与桦木科白桦的同源性最高,为61.22%;JhCBF含有一个预测的AP2结构域及CBF特有的两段短肽序列。系统进化树分析表明JhCBF与桦木科白桦的亲缘关系最近,最先聚为一类。

甜樱桃矮化砧木吉塞拉嫩枝扦插技术研究

甜樱桃矮化砧木吉塞拉5号、6号扦插生根困难，只能通过组培繁育苗木。本试验在高温高湿条件下，用当年生吉塞拉组培苗嫩梢扦插于河沙、珍珠岩及河沙：珍珠岩：蛭石（1：1：1）混合基质中；吉塞拉6号嫩梢基部经500—1000mg／LIBA．ABT1号和6号生根粉处理后扦插于混合基质中，生根率均达70％以上，单株生根均达3条以上，可用于吉塞拉砧木苗的规模生产，加快繁育速度，满足生产需要。这是吉塞拉无性系优良砧木苗繁育研究的一个重要突破。

蓝莓的越冬防寒技术

蓝莓相对于其他落叶果树抗寒性较弱.中国北方地区蓝莓栽培以矮丛、半高丛和北高丛蓝莓为主,虽有一定的抗寒能力,但在越冬时仍常发生冻害,出现越冬抽条、花芽冻害、地上部死亡等现象,其中以抽条最为常见.分析蓝莓发生冻害的原因,一是生长前期管理措施不当,枝条发育不充实、贮存营养不足,抗冻能力下降,容易在冬季和早春发生冻害.二是早春气温上升快、空气干燥,树体蒸腾量增加,此时土壤尚未解冻,根系吸水能力和土壤可利用水分含量都较低,树体水分供应不足而产生抽条.三是蓝莓根系分布较浅,枝量大,更易发生抽条冻害.笔者介绍了蓝莓越冬防寒的管理措施,为蓝莓生产提供参考.

矮砧甜樱桃小冠疏层形整形修剪技术

采用小冠疏层形可使矮砧甜樱桃树体骨架牢固，有效地延长树体寿命。该树形干高40～60cm，树高3．0～3．5m，树冠直径4m左右；主枝分3层，第1层主枝上培养2～3个侧枝，第2层主枝上培养1～2个侧枝，第1～2层间距60cm左右，第3层主枝上直接着生结果枝组。

石榴化学成分及其生物活性研究进展

综述了石榴中对人体有益的化学成分、石榴的保健作用和生物活性,介绍了国内外对石榴的开发利用现状,展望了石榴研究方向。

蓝莓设施栽培管理技术要点

设施果树是山东省果树产业的重要组成部分，据统计，至2012年底，全省设施果树栽培总面积已超过4万hm2，主要栽培树种包括草莓、葡萄、桃、樱桃、杏、李等落叶果树。现将蓝莓的温室促成栽培技术介绍如下。

甜樱桃矮砧密植栽培技术规程

本文为山东省果树研究所山东省甜樱桃良种产业化课题组制定的《甜樱桃矮砧密植栽培技术规程》。内容包括园地选择、砧木与品种选择、苗木标准、定植密度、授粉树配置、定植时间和方法、土肥水管理、秸杆反应堆的应用、主要树形、幼树期整形修剪、盛果期修剪、花期管理、果实管理、病虫害防治及果实采收贮藏等。

介质接触式电加热杀菌消毒装置及其在果树组培快繁中的应用研究

该文介绍了果树离体组培快繁过程中,对无菌组培材料切割分离工具杀菌消毒的一种新方法。该方法应用现代控制和加热技术研制了新型自动化加热器。筛选出一种无毒无味耐高温的固体材料,加工成直径2 mm的球状体作为特种杀菌消毒介质。通过加热器对介质加热,利用介质的耐热贮热特性对无菌操作的切割分离工具进行接触式杀菌消毒。连续三年试验取得良好效果。该方法克服了传统的酒精灯消毒操作难度大,速度慢,能耗大,对空气有污染,有火灾隐患等缺点。使果树组培快繁育苗分离植株速度提高了15.38%,耗能费用大幅度降低,无菌效果达到100%,并彻底避免了空气污染和火灾隐患。