核果类果树遗传转化及检测技术研究进展

综述了近年来国内外常见核果类果树遗传转化的研究进展,概述了目前果树遗传转化的主要方法,阐述了核果类果树遗传转化植株的主要鉴定方法,指出了当前研究中存在的一些问题,探讨了转基因研究未来的发展方向。

果树种质资源超低温保存研究进展

超低温保存是作物种质资源离体保存的有效方法之一。本文概述了超低温保存技术在果树种质资源保存中的应用及国内外研究进展,对存在的问题进行了分析,并对其发展提出了建议。

山东泰安甜樱桃“花叶病”树体症状观察及病毒检测

为了探明山东泰安患有"花叶病"的甜樱桃树体内感染病毒的种类,本研究以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。结果显示,10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、PDV(Prune dwarf virus,PDV)、CVA(Cherry virus A,CVA)、CGRMV(Cherry green ring mottle virus,CGRMV)、LChV-2(Little cherry virus-2,LChV-2),各病毒检出率较高。各"花叶病"甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。

蓝莓嫩枝半日光间歇弥雾扦插育苗技术研究

利用半日光间歇弥雾果树育苗系统对4个北高丛蓝莓品种嫩枝进行了扦插试验,结果表明,扦插生根率达到80%以上,扦插苗生长健壮,提高了扦插成苗率,缩短了育苗周期。利用温湿度记录仪研究了扦插期间温湿度变化情况,结果表明,利用半日光间歇弥雾果树育苗系统能够较好地控制扦插期间育苗棚内的温度和湿度,可为蓝莓的嫩枝扦插生根提供有利的环境条件。

果树需冷量自动检测装置的研制及在樱桃上的应用试验

为解决人工监测落叶果树需冷量准确度差、劳动强度大的问题,研制了"落叶果树需冷量自动检测装置",包括现场温度检测、温度信号处理、数字显示、测控信号转换与输出、有效低温设定值信号发生器、电源输出控制、手动显示控制、需冷量记录显示等单元。经连续3年2个生产周期用于甜樱桃保护地栽培试验应用表明,该装置能准确检测落叶果树的需冷量,使扣棚控温时机的掌控更科学合理,节省人力,解决了因需冷量监测不准造成的萌芽不齐、坐果不良和延迟成熟等问题,使果实产量、质量及采收期控制均达到预期效果,替代了人工检测,减轻了劳动强度。

川榛遗传资源分类、分布及其研究利用现状分析

利用图书馆和网络数据库检索工具,通过对包含＂川榛＂字段的各类书籍、文献的整理,对川榛遗传资源的分类地位、分布范围及其研究利用现状等内容进行了归纳总结,并通过对川榛分布区代表样点气象数据的统计,对其适生的生态条件进行了分析。结果表明：川榛（贵榛、黔榛）主要分布于中国102°06＇～121°26＇E,26°29＇～36°58＇N之间,年均温6.1～19.3℃的广大区域,覆盖全国15个行政省区、直辖市,自然分布以山坡地为主,跨越温带、暖温带和亚热带,具有广泛的生态适应性;分布范围、生态习性、植物学性状、孢粉学和遗传关系等方面的资料表明,川榛与平榛存在明显的差别,两者应为独立的种;川榛具有较高的经济价值和育种价值,但其开发利用进展缓慢;川榛遗传资源的调查与保护、种群多样性及杂交利用等研究工作亟待开展。此研究可为今后开展川榛遗传资源的调查、收集和评价工作提供依据。

应用FISH-AFLP技术分析平欧杂种榛主栽品种的遗传关系

【目的】建立平欧杂种榛FISH-AFLP技术体系,并应用该技术分析平欧杂种榛主栽品种的遗传关系。【方法】以达维等10个主栽品种为试材,经DNA提取、PstⅠ/MseⅠ双酶切,进行FISH-AFLP反应,数据转换为"0—1"矩阵后,使用NTSYS pc 2.11F和Popgene 1.32软件进行数据分析并作图。【结果】从64对引物中,筛选出15对多态性强的PstⅠ/MseⅠ引物,共获得1 739条谱带,引物平均多态带比率97.94%;平欧杂种榛主栽品种的相似性系数为0.7556—0.8543,当阈值为0.8398时,可分成4个AFLP群,其中,玉坠(84-310)、辽榛4号(85-41)和平欧69号(84-69)单独为1群,其他品种为1群;平欧杂种榛主栽品种的有效等位基因数、基因多样度、Shannon信息指数分别为1.3921、0.2482和0.3957,具有较高的遗传多样性;研究获得的特征条带可用于平欧杂种榛主栽品种的快速鉴别。【结论】由于平欧杂种榛的实生选优群体是多亲本组合的混合后代,因此,该群体是一个具有高度遗传多样性的群体,主栽品种间存在复杂的亲缘关系;研究构建的FISH-AFLP技术流程、筛选得到的引物以及分析得到的各项遗传参数,可为其他榛属植物的相关研究提供参考。

甜樱桃砧木PcDHN1的克隆及其对非生物胁迫的响应

为明确甜樱桃砧木脱水素基因特征及其在干旱、高盐和低温胁迫过程中的表达模式,以甜樱桃砧木Y1为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆了甜樱桃砧木脱水素基因Pc DHN1,利用生物信息学分析其编码蛋白特征,并采用qRT-PCR分析该基因的表达模式。序列分析显示,甜樱桃砧木脱水素基因Pc DHN1的c DNA全长893 bp,编码225个氨基酸,推测编码蛋白分子量约为23.98 k D,理论等电点为8.65。氨基酸序列分析显示,Pc DHN1含有2个Y-片段、1个S-片段和2个K-片段,具有植物脱水素蛋白的特征性结构,属于YnSK2型脱水素。表达特性分析显示,Pc DHN1在干旱、高盐和低温胁迫条件下受胁迫诱导而上调表达,但对低温胁迫响应比较迟缓,说明该基因可能参与了甜樱桃砧木对干旱和高盐胁迫的耐受调节过程。本研究结果为甜樱桃砧木抗逆基因工程提供了一定的参考。

设施高灌蓝莓光合特性研究

以高灌蓝莓品种‘喜来’（Vaccinium corymbosum‘Sierra’）为试材，对设施高灌蓝莓的光合特性进行了研究。结果表明，设施内光合有效辐射（ PAR）及叶面温度（ TL）分别于12∶00和13∶00达到最大值，高灌蓝莓叶片的净光合速率（ Pn）于早晨8∶00达到最大值，之后持续降低，在15∶00～16∶00有小量回升，之后再次降低。气孔导度（ Gs）日变化与Pn变化趋势相同，而细胞间隙二氧化碳浓度（ Ci）的变化趋势与之相反。高灌蓝莓叶片的光饱和点为600μmol/（m2＆#183; s），光补偿点为62．6μmol/（m2＆#183; s），CO2补偿点为129．8μL/L，在温室高温弱光环境下，温度是Pn的主要限制因子，温度在28℃以上时高灌蓝莓的光合作用受到严重抑制，该抑制是气孔因素与非气孔因素共同影响的结果。

蓝莓新梢温室扦插育苗主要环境因子调控研究

为解决蓝莓繁育困难问题,选配改进后的现代温控仪表和适宜的湿度、光照监测仪表,研制了蓝莓扦插育苗专用的时序喷淋控制器,连续2年用于蓝莓新梢温室扦插育苗环境控制,取得预期效果。插后90天,蓝莓新梢插穗生根率高于96.00%,每株平均生根数多于6.91条,插穗死亡率低于4.00%,新苗壮苗率大于93.90%,与传统的蓝莓枝条扦插和组培繁育相比,育苗周期和成本显著降低。

蓝莓花粉直感研究进展及在栽培生产中的应用

论述了蓝莓的的花粉直感作用及其对果实发育期、果实大小等性状的影响规律,介绍了相关研究进展并探讨了花粉直感现象产生的机理,提出了现阶段在蓝莓栽培生产中有效利用花粉直感提高生产效率的途径。

麻核桃CBF基因的克隆与生物信息学分析

CBF基因是植物CBF抗冷途径的枢纽,对增强植物抗冷能力极为重要。本研究根据已知的核桃CBF基因序列设计通用性引物,对麻核桃cDNA进行PCR扩增,成功获得麻核桃CBF基因全长序列,命名为JhCBF。JhCBF全长820 bp,包含一个645 bp的开放读码框(ORF),编码214个氨基酸。序列分析表明JhCBF与其他物种来源的CBF具有较高的同源性,其中,与桦木科白桦的同源性最高,为61.22%;JhCBF含有一个预测的AP2结构域及CBF特有的两段短肽序列。系统进化树分析表明JhCBF与桦木科白桦的亲缘关系最近,最先聚为一类。

核桃叶片总RNA提取方法的比较研究

通过对比Trizol、EASYspin和Qiagen 3种试剂盒提取方法,探讨适合核桃叶片总RNA提取的有效方法。结果表明EASYspin试剂盒提取的RNA纯度较高、完整性好,试验用时较短,且试剂盒成本较低。

农用温控仪表测温误差及改进研究

分析了农用温控仪的部分技术指标,对产生测温误差的原因及改进技术进行了研究。常年工作的农用温控仪表,无论测量气温、地温或局部微环境温度,由于选用不当和仪表工作环境温度的变化,都能造成大于5℃的叠加误差幅度,严重影响农产品的产量和质量。试验筛选出3种可抑制和减小测温误差幅度的使用方法,研制成功了可抑制测温误差的仪表改进电路,在实际生产中试用,均取得预期效果。

基于UPLC-MS/MS技术对蓝莓中花青苷类物质的定性定量分析

采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在电喷雾离子源(ESI)、正离子多反应监测(MRM)模式下建立蓝莓果实中花青苷类物质的定性和定量检测方法。结果表明,11种花青苷类物质的定量限为0.26~1.50μg/kg,在0~100μg/L范围内呈现很好的线性关系,相关系数(r)为0.9950~0.9996,方法检测性良好。采用本方法对3个蓝莓栽培品种的成熟果实进行测定,分别从‘喜来’和‘蓝冠’中鉴定出11种花青苷,从‘蓝丰’中鉴定出10种花青苷,各种花青苷物质含量在3个蓝莓品种中存在明显差异,‘蓝冠’的总花青苷类物质含量明显高于‘蓝丰’和‘喜来’,‘喜来’中最低。本研究结果可为蓝莓优异种质挖掘和蓝莓花青苷产品开发奠定理论基础。

蓝莓的越冬防寒技术

蓝莓相对于其他落叶果树抗寒性较弱.中国北方地区蓝莓栽培以矮丛、半高丛和北高丛蓝莓为主,虽有一定的抗寒能力,但在越冬时仍常发生冻害,出现越冬抽条、花芽冻害、地上部死亡等现象,其中以抽条最为常见.分析蓝莓发生冻害的原因,一是生长前期管理措施不当,枝条发育不充实、贮存营养不足,抗冻能力下降,容易在冬季和早春发生冻害.二是早春气温上升快、空气干燥,树体蒸腾量增加,此时土壤尚未解冻,根系吸水能力和土壤可利用水分含量都较低,树体水分供应不足而产生抽条.三是蓝莓根系分布较浅,枝量大,更易发生抽条冻害.笔者介绍了蓝莓越冬防寒的管理措施,为蓝莓生产提供参考.

蓝莓设施栽培管理技术要点

设施果树是山东省果树产业的重要组成部分，据统计，至2012年底，全省设施果树栽培总面积已超过4万hm2，主要栽培树种包括草莓、葡萄、桃、樱桃、杏、李等落叶果树。现将蓝莓的温室促成栽培技术介绍如下。

应用FISH-AFLP技术分析105份樱桃种质资源的亲缘关系

为建立樱桃种质资源的FISH-AFLP技术体系并进行亲缘关系分析,本研究以国内外搜集的105份樱桃种质为对象,经DNA提取、EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,再进行FISH-AFLP反应。扩增结果显示,筛选得到8对EcoRⅠ/MseⅠ多态性引物,可扩增出1148条谱带,平均多态性比率98.61%。聚类分析和遗传多样性分析结果显示,105份樱桃栽培品种的遗传相似性系数为0.54~0.89,当阈值为0.68时,可分成7个AFLP群;有效等位基因数、基因多样度、Shannon信息指数分别为1.52、0.30、0.45,具有较高的遗传多样性。本研究结果可为今后樱桃品种鉴别和遗传多样性研究等提供理论指导。

平榛种质资源坚果农艺性状鉴定与评价研究

平榛是我国重要的榛属植物资源,为鉴定、评价和保护平榛种质资源,提高其利用效率,采用主成分分析和聚类分析方法对99份平榛种质资源坚果的主要农艺性状进行了鉴定和综合评价。结果表明:平榛种质资源坚果的24个性状具有丰富的遗传多样性;10个数量性状的主成分分析确定了4类影响因子,反映了育种选择方向及潜力;基于各种质间形态性状的遗传差异,将99份平榛种质划分为5大类群,第Ⅰ类群可作为选育果面光滑品种的育种和候选亲本材料,第Ⅱ类群可作为选育大粒型、适宜机械化加工的育种和候选亲本材料,第Ⅲ类群具有作为市场产品的潜力,第Ⅳ类群可作为选育圆形、果面无条纹的育种和候选亲本材料,第Ⅴ类群可作为选育高丰产性品种的育种和候选亲本材料。上述研究为平榛种质资源的评价、保护和选优工作提供了基础数据。

甜樱桃砧木吉塞拉离体茎尖玻璃化法超低温保存研究

为保持甜樱桃矮化砧木吉塞拉的遗传稳定性和避免种质遗传资源丢失,以玻璃化法超低温冷冻保存过程中涉及的主要因子设计正交试验,摸索适合吉塞拉的最佳保存体系;设计单因子试验,观察不同单因子对吉塞拉超低温冷冻保存的影响。结果表明,取生长90 d的组培苗于4℃低温锻炼3周或4周,剥取茎尖放于含0.3 mol/L蔗糖的预培养液中预培养1 d,在装载液中渗透30 min,用PVS3玻璃化试剂0℃处理60min后投入到液氮中保存24 h,取出后经40℃水浴快速化冻1 min,卸载液洗涤两次,每次10 min,后置于恢复培养基上,茎尖的存活率最高且遗传稳定性好。本试验成功建立了甜樱桃矮化砧木吉塞拉的玻璃化法超低温保存技术,为甜樱桃种质资源的长期保存提供了一条有效途径。