中心实验室的消毒管理

随着医学科学的飞速发展和科技水平的不断提高,医院科研工作受到医院管理层的重视,我院中心实验室现已成为各专业技术人员开展医学科学实验研究的重要基地.实践证明,医院实验室不仅会接触到大量已知感染性生物因子,也可能会接触到未知感染性生物因子,因此加强实验室消毒管理非常重要.

VEGF反义寡核苷酸对舌鳞癌影响的实验研究

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人舌癌肿瘤的生长抑制作用。方法:20只BALB/C裸鼠分为4组,每组5只,实验1～3组建立人舌癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂;第4组为未荷瘤对照组。①VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg。②错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg。③生理盐水组:注射生理盐水。各组每3天注射1次,共注射7次。实验结束后2d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片用免疫组织化学方法检测VEGF、PCNA、CD34的表达,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNALabelindex,PLI),分子原位杂交测VEGFmRNA表达。结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,肿瘤的体积和重量,VEGFmRNA及其蛋白和PCNA、CD34的表达均显著低于对照组。结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制舌癌细胞的生长、增殖。

成年大鼠嗅球成鞘细胞的原代培养及形态学研究

目的探讨大鼠嗅球成鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)分离与纯化培养方法并对形态学进行研究。方法取材后采用差速贴壁和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅鞘细胞,并分不同阶段进行观察和NGFRp75和GFAP免疫组化染色鉴定。结果成功培养出高纯度的嗅鞘细胞,胞体呈梭形、多突起形及油煎蛋形三种类型,突起细长编织成网状为其特点。结论差速贴壁和Ara-c抑制相结合的纯化培养方法兼收了两者的优点,实践证实是一种简单经济而又有实效的嗅鞘细胞培养方法。

偏侧咀嚼对大鼠颞下颌关节滑膜影响的研究

目的:研究偏侧咀嚼对大鼠颞下颌关节滑膜的影响。方法:30只大白鼠随机分为6组,实验组间断磨除右上、下颌磨牙牙冠至龈下,对照组末做处理,饲养条件相同。实验1组磨除牙冠后4周末、实验2、3组磨除牙冠后10、16周末处死动物,取其双侧TMJ进行光镜切片检查,结果与对照组对照。结果:实验1、2、3组双侧颞下颌关节滑膜均出现受损的病理变化。结论:偏侧咀嚼可引起颞下颌关节滑膜损伤,是颞下颌关节紊乱病的病因之一。

颜面皮肤癌中NOS和VEGF的表达及其临床病理意义

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在颜面皮肤癌中表达的相关性;探讨三者与颜面皮肤癌血管生成和临床病理特征的关系;研究一氧化氮(NO)和 VEGF的相互作用及 NO在 VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 应用免疫组织化学方法检测47例颜面皮肤癌手术切除标本 VEGF、iNOS和 eNOS的表达,Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果 (1)32例颜面皮肤癌组织表达VEGF,30例表达iNOS,35例表达eNOS;(2)VEGF与iNOS的表达呈正相关,与eNOS的表达无相关;(3)VEGF、iNOS的表达与颜面皮肤癌MVD呈正相关, eNOS的表达与颜面皮肤癌MVD的差异无显著性意义;(4)VEGF的表达与颜面皮肤癌淋巴结转移和肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度呈正相关;与临床分期无关。iNOS表达与颜面皮肤癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度正相关;eNOS表达与颜面皮肤癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度均无关。结论 (1)iNOS对 VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响;(2)MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对颜面皮肤癌血管生成具有促进作用。

口腔鳞癌中NOS和VEGF的表达与血管生成及临床病理因素的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)在口腔鳞癌中表达的相关性 ;探讨三者与口腔鳞癌血管生成和临床病理特征的关系 ;研究一氧化氮 (NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 :应用免疫组织化学方法检测 64例口腔鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达 ,Ⅷ因子相关抗原 (FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色 ,计数肿瘤微血管密度 (MVD )。结果 :( 1) 3 9例口腔鳞癌组织表达VEGF ,42例表达iNOS ,45例表达eNOS ;( 2 )VEGF与iNOS的表达正相关 ,与eNOS的表达无相关 ;( 3 )VEGF、iNOS的表达与口腔鳞癌MVD呈正相关 ,eNOS的表达与口腔鳞癌MVD的差异无显著性意义 ;( 4 )VEGF的表达与口腔鳞癌淋巴结转移和肿瘤分化程度正相关 ;与临床分期无关。iNOS表达与口腔鳞癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移正相关 ;eNOS表达与口腔鳞癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移均无关。结论 :( 1)iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响 ;( 2 )MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加 。

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05)。结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长。

VEGF和NOS在口腔鳞癌组织中的表达

目的:研究口腔鳞癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达与癌细胞增殖的相关性。方法：应用免疫组化方法检测64例口腔鳞癌手术切除标本VEGF、iNOS、eNOS和增殖细胞核抗原(PCNA)的分布及表达。结果：①39例(60.94％)口腔鳞癌组织表达VEGF，42例(65.63％)表达iNOS；45例(70.31％)表达eNOS；②VEGF与iNOS的表达具有明显相关性，VEGF与eNOS的表达无明显相关性；③表达VEGF的口腔鳞癌PCNA标记指数(PLI)明显高于不表达VEGF的口腔鳞癌；表达iNOS的口腔鳞癌PLI明显高于不表达iNOS的口腔鳞癌。表达eNOS的口腔鳞癌PLI与不表达eNOS的口腔鳞癌无显著性差异(P＞0.05)。结论：①VEGF与iNOS的表达具有明显相关性，说明iNOS在VEGF的生成和发挥作用过程中起重要作用；②PLI随着VEGF和iNOS表达的增加而增加；提示二者对口腔鳞癌细胞增殖具有促进作用。

成年大鼠嗅粘膜细胞原代培养及形态学研究

为了探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞(OECs)的分离与纯化培养方法并对其形态学进行研究,我们自鼻腔嗅粘膜取材后采用差速贴壁、机械刮除和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅粘膜细胞,并分不同阶段进行镜下观察及p75NGFR和GFAP免疫组化染色鉴定。结果显示,自嗅粘膜组织可以培养出四种细胞:梭形细胞、双极细胞、窝形细胞和大细胞。其中大部分梭形和双极细胞呈p75NGFR或GFAP免疫反应阳性,属于OECs。结果提示本文介绍的培养方法可以培养出嗅粘膜OECs;差速贴壁、机械刮除和Arac抑制相结合方法可纯化OECs。

涎腺腺癌COX-2表达和肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)表达和涎腺腺癌血管生成的关系。方法免疫组化检测涎腺腺癌COX-2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,并测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果涎腺腺癌COX-2表达与VEGF、iNOS表达密切相关(P<0.05)。涎腺腺癌COX-2表达阳性组和阴性组MVD差异有统计学意义(P<0.01)。结论涎腺腺癌COX-2表达和肿瘤血管生成有关,iNOS和VEGF可能参与COX-2对肿瘤血管生成的促进作用。

口腔鳞癌COX-2表达和肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)表达和口腔鳞癌血管生成的关系。方法免疫组化检测口腔鳞癌COX-2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,并测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果口腔鳞癌COX-2表达与VEGF、iNOS表达密切相关(P<0.05)。口腔鳞癌COX-2表达阳性组和阴性组MVD有显著差异(P<0.01)结论口腔鳞癌COX-2表达和肿瘤血管生成有关,iNOS和VEGF可能参与COX-2对肿瘤血管生成的促进作用。

大肠癌患者围手术期免疫治疗的意义

目的研究大肠癌患者的细胞免疫功能及外科手术对它的影响.方法分别应用APAAP法和乳酸脱氢酶释放法测定了43例大肠癌患者手术前后的外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性（NKCC），结果患者术前CD3，CD4，CD4／CD8比值和NKCC分别为53．8％±5．4％，35．7％±6．1％，1．21±0．14，17．1％±8．9％，较对照明显降低；CD8明显升高，为29．7％±5．3％；接受围手术期免疫治疗的10例患者，术后1wkCD3，CD4，CD4／CD8比值及NKCC较术前明显升高；而对照组术后2wk内各指标除NKCC有升高外，余无明显变化，至4wk～6wk各指标达正常水平．结论术后2wk内患者仍处于免疫抑制期，围手术期免疫治疗可提高患者的围手术期细胞免疫功能，缩短术后的免疫抑制期.

咬合恢复对大鼠三叉神经节PPTAmRNA及其相应蛋白表达的影响

目的:研究咬合恢复对大鼠三叉神经节P物质(substance P,SP)及编码SP的前速激肽原A(PPTA)mRNA表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠48只,随机分为3个实验组及相应的正常对照组,每组8只。实验组动物间断磨除右上、下颌磨牙牙冠至龈下,2组分别于第3、9周停止磨牙,任其自行萌出,恢复咬合关系。双侧三叉神经节(trigeminal ganglia,TG)切片行SP免疫组织化学反应(SABC法)和原位杂交反应。光镜观察摄片,并用Image Pro Plus 5.1图像分析软件进行测定。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:单侧咀嚼实验组咀嚼侧和非咀嚼侧TG内,SP阳性神经元百分比与对照组比较显著降低(P<0.01,P<0.05),其非咀嚼侧显著低于咀嚼侧(P<0.05);而PPTA mRNA阳性神经元百分比显著增高(P<0.01,P<0.05),其非咀嚼侧显著高于咀嚼侧(P<0.01)。早期恢复咬合实验组TG内SP和PPTA mRNA阳性神经元百分比与对照组比较无显著差别(P>0.05),其咀嚼侧与非咀嚼侧比较无显著差别(P>0.05)。晚期恢复咬合实验组TG内,SP和PPTA mRNA表达情况与单侧咀嚼实验组一致。结论:早期恢复咬合关系TG内SP和PPTA mRNA表达可恢复正常,晚期恢复咬合关系其表达不能恢复正常,SP和PPTA mRNA参与了单侧咀嚼引起的颞下颌关节病的病理变化过程。

Survivin及COX-2在涎腺腺样囊性癌中的表达研究

目的:研究Survivin及环氧化酶-2(Cycloxygenase-2,COX-2)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid ey-stic carcinoma,SACC)中的表达,探讨其与临床病理因素的关系及两者的相关性。方法:采用SABC免疫组织化学染色方法检测32例SACC及15例癌旁正常腮腺组织标本中Survivin及COX-2的表达,采用SPSS13.0软件行统计分析。结果:SACC组织中Survivin及COX-2阳性表达率分别为65.63%、71.88%。两者的表达均与肿瘤病理类型及临床分期密切相关,癌旁正常腮腺组织未见表达。结论:Survivin及COX-2可能参与SACC的发生、发展。Survivin及COX-2可做为SACC预后的一个有效指标。

联合疗法治疗痤疮的疗效及对患者三种细胞因子水平的影响

为观察昆明山海棠联合米诺环素治疗重度痤疮的疗效,及对患者血清中细胞因子IL-1α、IL-8和TNF-α水平的影响。将69例患者随机分为两组,治疗组给昆明山海棠联合米诺环素,对照组单独用米诺环素,观察治疗4周时的疗效。同时用ELISA法检测治疗前后患者血清中的IL-1α、IL-8、TNF-α水平。联合用药有效率(60.00%)明显高于对照组(26.47%)(P<0.05)。治疗前患者血清中细胞因子(IL-1α、IL-8、TNF-α)水平与健康查体者比较有显著性差异(P<0.001)。治疗后三种细胞因子水平显著下降且治疗组较对照组下降明显(P<0.05)。细胞因子IL-1α、IL-8、TNF-α与痤疮的发病及严重程度有密切关系。昆明山海棠联合米诺环素口服治疗重度痤疮通过抗炎和免疫调节作用,使炎性细胞因子下降,从而达到清除和减少皮损的效果,其疗效显著,安全性好,方便易行。

口腔恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的表达与癌细胞增殖的关系

目的研究口腔恶性黑色素瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达与癌细胞增殖的相关性。方法应用免疫组化方法检测11例口腔恶性黑色素瘤手术切除标本VEGF、iNOS、eNOS和增殖细胞核抗原(PCNA)的分布及表达。结果11例中7例(63.64%)瘤组织表达VEGF,6例(54.55%)表达iNOS,9例(81.82%)表达eNOS,VEGF与iNOS的表达具有相关性,而与eNOS的表达无相关性;表达VEGF的口腔恶性黑色素瘤PCNA标记指数(PLI)高于不表达VEGF者;表达iNOS的口腔恶性黑色素瘤PLI高于不表达iNOS者。表达与不表达eNOS的口腔恶性黑色素瘤PLI差异无显著性(P>0.05)。结论iNOS、PLI对口腔恶性黑色素瘤细胞增殖具有促进作用。

大肠癌患者外周血细胞角蛋白-20信使核糖核酸与白细胞介素-10联合检测的临床意义

目的 联合检测大肠癌患者外周血细胞角蛋白 - 2 0信使核糖核酸 (CK - 2 0mRNA)与血浆中白细胞介素 - 1 0 (IL - 1 0 ) ,并评价其临床意义。方法 应用RT -PCR检测大肠癌患者外周血CK - 2 0mRNA ;应用ELISA检测其血浆IL - 1 0浓度。结果 对照组2 5例健康查体者 ,其外周血中未见CK - 2 0mRNA的表达 ;观察组 46例大肠癌患者 ,2 5例外周血中CK - 2 0mRNA表达阳性。大肠癌患者外周血CK - 2 0mRNA的表达与Dukes分期关系为 :A期 2 0 .0 % (1 / 5)、B期 2 7.3 % (3/ 1 1 )、C期 61 .1 % (1 1 / 1 8)、D期 83 .3(1 0 /1 2 ) ;其中C、D期与A、B期比较差异有高度显著性 (P <0 .0 1 )。大肠癌患者血浆IL - 1 0浓度明显高于健康查体者 ,且与Dukes分期显著相关。外周血CK - 2 0mRNA阳性表达的大肠癌患者血浆IL - 1 0水平高于阴性者。结论 联合检测大肠癌患者外周血CK -2 0mRNA与IL - 1 0 ,掌握检测大肠癌转移的相关指标 ,可以及时全面地了解大肠癌患者病情进展情况。

外周血CK-19评价乳腺癌术后化疗及监控血液微转移

目的以外周血CK-19为指标评价术后化疗作用及其监控血液微转移意义。方法以120例乳腺癌术后患者为研究对象,巢式RT-PCR检测外周血CK-19 mRNA,比较化疗前后表达差异及CK-19表达与乳腺癌远处转移关系。结果化疗前血液微转移阳性率为23.33%,化疗后为3.33%,差异有统计学意义(P<0.01);CK-19阳性组肿瘤转移率为76.9%,阴性组肿瘤转移率为8.6%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论术后辅助化疗能降低乳腺癌血液微转移;外周血CK-19能监控乳腺癌血液微转移。

胃癌患者CK20和Ki-67的表达及其临床意义

背景:有关CK20和Ki鄄67在肿瘤组织中表达的研究虽较多,但其临床意义尚无定论。目的:研究胃癌患者外周血CK20mRNA和癌组织中CK20、Ki鄄67的表达及其临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测40例胃癌患者术前外周血CK20mRNA的表达,采用免疫组化染色检测相应癌组织中CK20、Ki鄄67的表达。结果:随着胃癌临床分期的增高和分化程度的降低,外周血CK20mRNA的阳性率相应增高(P<0.001和P=0.038),癌组织中CK20、Ki鄄67的表达亦增强(P<0.001和P<0.01;P<0.001和P<0.001)。癌组织中CK20、Ki鄄67的表达越强,外周血CK20mRNA的阳性率越高(P=0.009和P<0.01),且癌组织中Ki鄄67的表达随CK20表达的增强而增强(P=0.002)。外周血CK20mRNA和癌组织中CK20、Ki鄄67的表达均与胃癌的组织学类型无关(P>0.05)。结论:外周血CK20mRNA和癌组织中CK20、Ki鄄67的表达与胃癌的临床分期和分化程度关系密切,可作为预测胃癌转移和评估预后的指标。