人IL-1β重组表达载体在肝癌细胞的表达及对其NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:构建全长人IL-1β真核表达载体,转染H7402肝癌细胞,分析对其NK细胞杀伤敏感性的影响。方法:RT-PCR法扩增人IL-1β基因全长编码序列,经T-A克隆,构建pIRES2-EGFP-IL-1β重组表达载体,采用阳离子聚合物jetPEI的方法转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,RT-PCR分析IL-1β的表达水平,MTT方法分析转染前后NK细胞对肝癌细胞杀伤活性的变化。结果:从LPS处理的人外周PBMCs总RNA中扩增出IL-1β(大小约829 bp),先构建pMD18-IL-1β克隆载体,DNA序列鉴定正确后,利用Pfu DNA聚合酶将IL-1β基因亚克隆到pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IL-1β,经PCR、限制性酶谱分析(BamHⅠ和EcoRⅠ)和DNA序列测定正确后,将其转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达IL-1β的细胞,与转染空载体的细胞相比,该细胞对NK-92细胞杀伤的敏感性显著降低,效靶比10∶1时下降了约30%。结论:促炎性细胞因子IL-1β能够显著增强肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是导致肝癌细胞发生天然免疫逃逸的重要机制。

TGF-β1和HSP70在大鼠肝癌早期诊断中的价值探讨

目的:通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中TGF-β1和HSP70水平并与传统指标AFP比较,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合的评价。方法:用CCL4诱导大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每两周心脏采血一次,ELISA法检测大鼠血清中TGF-β1、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检查。结果:造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。造模第10周TGF-β1和HSP70水平即显著升高,TGF-β1在肝硬化阶段无显著升高,而HSP70则略微有升高,二者特异性分别为90%和60%,阳性率分别为55%和70%,联合检测的阳性率为80%,造模第12周的阳性率分别达85%和90%,联合检测阳性率达100%;AFP水平在造模第12周才有显著升高,肝硬化阶段也有升高并与早期肝癌无显著性差异。其阳性率和特异性分别为60%和30%。结论:传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而TGF-β1和HSP70均较AFP敏感、特异,二者联合可提高检测敏感性。

胸腺基质淋巴细胞生成素、OX40和OX40受体在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中表达的关系

目的建立小鼠过敏性腹泻模型，检测其大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）、OX40、OX40受体（OX40L）的表达和肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-_4、IFN-1的水平，分析其之间的关系，探讨TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻中的作用。方法雌性BALB／c小鼠20只随机分成两组即对照组和实验组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL4和IFN-1的水平，取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变，SP免疫组织化学技术检测TSLP、OX40、OX40L的表达。结果@HE染色结果显示：实验组比对照组小鼠结肠黏膜组织非特异性炎症反应显著，上皮排列不规则，有大量炎性细胞浸润，固有层可见大量嗜酸性粒细胞浸润；@TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中的表达水平高于对照组的表达水平（t=7．07，t=7．81，t=7．79，P均〈0．01）；③Spearman等级相关分析发现TSLP、OX40、OX40L三者问表达强度存在正相关（r=0．889，r=0．932，r=0．943，P均〈0．01），同时三者与肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL4水平呈正相关（r=0．891，r：0．936，r=0．886，P均〈0．05），而与IFN-1水平呈负相关（r=-0．829，r=-0．881，r=-0．937，P均〈0．05）。结论TSLP、OX40、OX40L三者间表达存在正相关，并诱导了Th1／Th2轴向Th2轴漂移，促进了过敏性腹泻的发生发展。