负载hTERT基因片段的DC肿瘤疫苗制备及其抗肿瘤作用的研究

目的:研究负载hTERT基因片段的树突状细胞(DC)肿瘤疫苗及其抗肿瘤作用。方法:构建负载hTERT基因片段的慢病毒载体,采用细胞免疫化学技术检测Lenti-hTERT转导的293T细胞中hTERT基因的表达;分离制备脐血来源的DC,通过相差显微镜和流式细胞仪鉴定;Lenti-hTERT转导DC细胞制备DC疫苗;DC疫苗刺激同种T淋巴细胞诱导特异性CTL并用MTT法检测其增殖能力和对靶细胞的特异性杀伤能力。结果:成功构建负载hTERT基因片段的Lenti-hTERT,病毒滴度达5.88×106U/mL;转导后细胞中hTERT的表达显著升高,持续时间>2个月;分离制备脐血来源的DC,经慢病毒转导成为负载hTERT的DC疫苗,负载了hTERT抗原的DC刺激淋巴细胞增殖的能力明显优于未负载hTERT的DC(P<0.01),增殖指数均>1.5。负载了hTERT抗原的DC诱导CTLT对HepG2肝癌细胞的杀伤能力明显高于未经修饰的DC所诱导CTLN(P<0.01),抑瘤率分别为54.78%和12.08%;对hTERT阴性的293T细胞CTLN和CTLT的抑制率均较低且差异无统计学意义,P>0.05。结论:用慢病毒介导hTERT修饰制备的DC疫苗,其刺激T细胞增殖的能力增强,诱导的CTL对端粒酶阳性的HepG2肿瘤细胞具有特异而且显著增强的杀伤效应。