HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织中的表达及其与病理组织学分级的关系

背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病的分子机制有待进一步阐明。目前,HSPs家族成员在某些恶性肿瘤的发生发展中的作用已有一些报道,但是这一家族成员HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织中的表达还未见报道。本课题旨在研究结直肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA及其蛋白的表达,并分析其与病理分级的关系。方法:采用RT-PCR、免疫组化及Westernblot方法测定49例结直肠癌及其癌旁组织中HSP60、HSP70、HSP90α的表达;分析其与结直肠癌的病理组织学类型及分化程度的关系。结果:结直肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90αmRNA及蛋白的表达均显著高于相应的癌旁组织。癌组织较其癌旁组织HSP60、HSP70和HSP90α表达率及过表达率均有明显升高。在蛋白水平证明三种HSPs在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。但是,HSP60、HSP70及HSP90α在结直肠癌高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌的表达率和过表达率差异均无统计学意义。Western-blot表明HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织较癌旁组织中的表达也明显增高。结论:结直肠癌组织HSP60、HSP70、HSP90α三种基因的mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁组织,但是其与病理分级无相关关系。

蝎毒多肽提取物促进环磷酰胺抑制Lewis肺癌的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物增强环磷酰胺抗肿瘤的机制。方法建立小鼠Lewis肺癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组(模型组)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组、蝎毒多肽提取物(polypeptideextract from scorpion venom,PESV)组和联合组(CTX+PESV组),每组10只。记录肿瘤生长曲线,并采用逆转录PCR法和免疫组织化学法检测肿瘤微环境中免疫抑制因子血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化,采用免疫荧光化学法检测肿瘤组织中树突细胞(dendritic cells,DCs)表型CD80、CD86的表达变化。结果连续治疗21天后,联合组Lewis肺癌移植瘤的生长明显抑制(P<0.05);与模型组相比较,PESV组中CD80、CD86的表达有所增强,而CTX组中CD80、CD86的表达有所下降,联合组与CTX组相比强度和表达量均有所增加;与模型组比较PESV组和CTX组TGF-β1和VEGF-A mRNA表达量均降低(均P<0.05);与PESV组和CTX组比较,联合组TGF-β1和VEGF-A的mRNA表达量均降低(P<0.05)。结论 PESV可抑制Lewis肺癌中VEGF-A和TGF-β1的表达,促进DC的成熟,恢复其抗原摄取提呈功能,逆转CTX对机体的免疫损伤,从而起到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。

蝎毒多肽提取物对肿瘤微环境中树突状细胞成熟表型的影响

目的探讨蝎毒多肽提取物诱导肿瘤微环境中树突状细胞成熟的分子机制。方法建立小鼠Lew is肺癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、化疗组(CTX组)和实验组(CTX+PESV组),每组8只。实验组在常规化疗的间隔期给予蝎毒多肽提取物干预,连续治疗21d,记录肿瘤生长曲线,观察蝎毒多肽提取物对肿瘤浸润性树突状细胞成熟表型的影响,并采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测肿瘤微环境中血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤生长转化因子β1(TGF-β1)的表达变化,从肿瘤组织微环境的角度探讨其作用机制。结果常规化疗的间隔期给予蝎毒多肽提取物连续治疗21d后,实验组中Lew is肺癌移植瘤的生长明显受到抑制(P<0.05);肿瘤浸润性树突状细胞数量以及CD80表达均较模型组升高(P<0.05);与荷瘤对照组比较,化疗组和实验组肿瘤微环境中VEGF mRNA的相对表达量降低,分别为荷瘤对照组的32%和12%;TGF-β1mRNA表达量也降低,分别是荷瘤对照组的42%和21%(P<0.05)。结论蝎毒多肽提取物在化疗间期通过抑制肿瘤微环境中VEGF和TGF-β1的表达,促进树突状细胞的成熟,恢复其功能表型。

ATRA促进DDP对肺腺癌细胞A549凋亡作用机制的研究

探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对顺铂(cisplatin,DDP)抑制肺腺癌细胞株(A549)增殖的影响及其机制。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)以及流式细胞术检测DDP、ATRA处理前后A549凋亡率及维甲酸受体-β(retinoic acid receptorβ,RARβ)mRNA、凋亡抑制蛋白Survivin mRNA的转录情况。结果表明DDP对A549有抑制作用,且呈剂量依赖性。ATRA小于0.4 mmol/L抑制作用不明显,ATRA达到0.4 mmol/L及更高浓度时,抑制作用显著,且呈剂量依赖性。qRT-PCR结果显示DDP组RARβmRNA及Survivin mRNA均降低。ATRA组RARβmRNA增加,而Survivin mRNA降低;联合用药组较空白组RARβmRNA降低,较DDP组RARβmRNA提高,而Survivin mRNA均降低。流式结果显示联合用药组较单独用药组凋亡率明显增高。ATRA上调RARβ并下调Survivin,提高A549化疗敏感性,强化DDP化疗作用。

单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gG在毕赤酵母表达系统中的表达及抗原性分析

目的 构建单纯疱疹病毒gGl-毕赤酵母表达系统并初步分析表达产物的抗原活性.方法 以HSVI病毒增殖物为模版,用PCR扩增HSV-1gGl基因全序列,将目的序列插入载体pPIC9K,测序后电转化GS115菌株进行G418筛选、甲醇诱导表达,用SDS-PAGE方法跟踪分析表达条件,用ELISA方法检测目的蛋白的抗原活性.结果 DNA测序、凝胶电泳、ELISA试验结果表明pPIC9K-HSVgGI载体构建成功,G418压力筛选得到的重组酵母菌株可分泌表达目的蛋白gGl,蛋白可与特异性抗体发生结合反应.结论 构建了HSV一1 gGl酵母表达系统,表达的目的蛋白gGl具有抗原活性.