肝素在组织工程研究中的应用进展

近年来随着组织工程的迅速发展,肝素在组织工程研究中的应用越来越值得关注。肝素及其衍生物作为组织工程支架材料的成分之一,不仅赋予支架抗凝血、减少血栓的特点,而且可以改善支架的生物相容性和促进种子细胞的黏附、增殖和分化,另外还可作为细胞因子的储库和缓释载体,在组织构建过程中进一步促进种子细胞的增殖、分化和维持细胞表型,为组织的再生创造必要条件。我们对肝素在血管、肝脏、神经、皮肤、骨和软骨等组织工程领域中的应用研究进行了综述。

硅烷化玻璃酸酯的制备及其护肤功效研究

以四丁基碘化铵为催化剂,采用二甲基一氯硅烷与混悬在有机相中的玻璃酸钠反应,反应滤液经乙酸乙酯沉淀获得硅烷化玻璃酸酯(SHAC)。考察SHAC的皮肤刺激性、细胞毒性及护肤效果,结果表明,家兔背部涂抹质量分数为1%的SHAC溶液,红斑和水肿积分均为0,对皮肤无刺激;SHAC的IC50值大于5 g·L-1,该数值远大于欧盟化妆品无毒性的判定标准1.5 g·L-1,说明其没有细胞毒性;在相对湿度为65%和30%时,使用SHAC的猪皮表面水分含量分别为(49±2.16)%和(45±2.27)%,相对于现在广泛使用的保湿剂玻璃酸钠,SHAC具有良好的保湿效果;在其质量浓度为0.001 g·L-1时,SHAC作用的角质细胞存活率为(106.0±6.2)%,与表皮生长因子(EGF)对比没有显著差异。

硅烷化玻璃酸酯对皮肤屏障相关基因和蛋白的作用研究

主要通过qRT-PCR及免疫荧光(IF)法,研究了硅烷化玻璃酸酯(SHAC)对于皮肤屏障相关的8种基因表达和2种屏障相关蛋白合成的影响。选取合适样品浓度检测培养24 h后角质形成细胞中的FLG、LOR、IVL、KRT10、KRT16、TGM1、CLDN1、OCLN 8种基因表达量,同时检测角质形成细胞中ZO-1、CLDN1 2种蛋白的表达量。结果表明,SHAC在浓度0.625%时能显著促进IVL、TGM1、OCLN、CLDN1基因的表达,在浓度为2.5%时能显著促进OCLN、TGM1基因的表达;当SHAC浓度在0.625%时,能更好促进CLDN1基因的表达并能显著促进CLDN1蛋白含量上升,对ZO-1蛋白作用不明显,SHAC具有潜在的屏障修护作用。

聚谷氨酸的保湿功效及安全性评价

通过CM825型皮肤水分测试仪和皮肤斑贴试验,研究聚谷氨酸的保湿功效及安全性。结果表明:不同分子量和质量分数的聚谷氨酸在保湿特性上差异较大,其中分子量为1 200 k Da的聚谷氨酸在质量分数为0.1%时,保湿效果最好;受试者涂抹该受试物2和4 h后皮肤水分含量的变化率分别为(103.9±0.2)%和(112.2±0.2)%,接近现在广泛使用的保湿剂透明质酸钠的(114.0±0.3)%;皮肤斑贴试验结果表明聚谷氨酸对皮肤安全、无刺激性。

以交联透明质酸钠为支架体外构建组织工程软骨

背景:采用组织工程技术再生和重建软骨是目前修复软骨组织缺损效果最好、最有应用前景的方法。目的:以体外培养的软骨细胞和交联透明质酸钠为支架材料,开发一套体外构建组织工程软骨的完整方案。方法:分离新西兰兔膝关节软骨细胞,制成细胞悬液滴加于交联透明质酸钠支架上,体外复合培养21 d,提取RNA进行RT-PCR检测,制备冰冻切片进行显微观察和免疫组织化学观察。结果与结论:软骨细胞接种于交联透明质酸钠支架材料后,可贴附于支架上生长,并且大量细胞聚集成团,在支架材料的纤维间隙中生长或呈单层细胞附着于支架材料纤维。细胞-支架复合物表达软骨组织特异性蛋白聚糖基因和Ⅱ型胶原α1基因,以及软骨组织特异性蛋白Ⅱ型胶原蛋白,可维持软骨细胞表型。表明培养的细胞-支架复合物在体外培养可形成软骨细胞外基质,有望获得组织工程软骨组织。

细菌透明质酸酶基因工程菌的构建及高效表达

目的将兽疫链球菌透明质酸酶hyl基因在大肠杆菌原核表达系统中高效分泌表达。方法通过PCR方法扩增得兽疫链球菌hyl基因,Xho I和Nco I双酶切后,连入表达载体pET26b(+),并转化入大肠杆菌,经低温异丙基-β-D-硫代半乳糖苷或乳糖诱导表达,DNS法检测胞外透明质酸酶活性。结果成功构建含兽疫链球菌透明质酸酶基因hyl的大肠杆菌基因工程菌株,经IPTG诱导并添加甘氨酸后胞外透明质酸酶活性高达5.3×104 U/mL。结论实现了透明质酸酶在原核系统中的表达,为工业化生产奠定了基础,具有很好的市场前景。