蜂胶及其疫苗的研究进展

蜂胶是一种具有较强粘性的同体状、棕黑色、有芳香气味的物质，是蜜蜂从树木的新生枝芽处采集胶状物。经过蜜蜂混入其上颚腺、蜡腺分泌物反复加工而成的胶状物质，作为一种纯天然的广谱抗生素，蜂胶具有的高强度和粘度、杀菌防腐能力都是其他天然品无法比拟的，它是天然药材、辅料及兽医药、植物，肉食品加工、食品防腐保鲜的好材料。

应用小白鼠对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检的研究

为寻找更好的鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗的效检方法,本研究应用小白鼠代替本动物“鸡”,对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检。结果表明,小白鼠免疫体重为18～22g,疫苗免疫剂量为0.3ml/只;免疫后10d,攻毒体重为20～28g,攻毒剂量为2～3×107CFU/只时,可代替本动物“鸡”对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检,判定标准为免疫组8/10以上保护,对照组5/5死亡为合格。本效检方法可缩短检验期限7d,降低检验成本,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点。

鸡新城疫蜂胶灭活疫苗制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性的研究

用NDVColon_30株病毒接种非免疫鸡胚 ,制备抗原液 ,经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化 ,研制成功鸡新城疫蜂胶灭活疫苗 ,对制品的安全性和免疫原性进行了测定 ,对 3～ 6周龄易感雏鸡以 2倍使用剂量肌肉注射 ,安全性良好 ,对 1日龄雏鸡接种 1个使用剂量 ,进行急性毒性试验观测 ,15天生长曲线表明 ,对雏鸡无影响 ,对 3～ 6周龄雏鸡注射 1个使用剂量 ,每批疫苗免疫 10只鸡 ,免疫 5～ 32天鸡血清中ND血凝抑制 (HI)抗体的几何平均滴度 (GMT)分别为 4.8～ 9.8log2 ,对鸡新城疫免疫攻毒试验表明 ,3批疫苗 ,每羽份含有的半数保护量 (PD50 )分别为≥ 131和≥ 12 7。

禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗的研究

为研制绿色环保型的禽霍乱与大肠杆菌病多价二联灭活疫苗 ,本研究以禽多杀性巴氏杆菌强毒株C4 8_1、C4 8_2和禽致病性大肠杆菌常见血清型 0 1/ 0 15 4、0 2 / 0 86、0 78、0 18、0 8/ 0 93等为制苗菌株 ,分别以改良马丁琼脂和马丁肉汤进行固体表面培养和高密度发酵培养制备抗原 ,将灭活的抗原铺以具有广谱生物学活性的天然物质_蜂胶为免疫增强剂 ,已拥有完全自主知识产权的纳米蜂胶疫苗制造工艺技术平台制备禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗。试验结果表明 ,疫苗安全可靠 ,无明显的干扰现象 ,免疫后 5～ 7d产生坚强保护力 ,对禽霍乱和鸡大肠杆菌病的近期保护率均为10 0 %。以实验动物小鼠代替本动物进行二联疫苗效检取得成功 ,本效检方法可缩短检验期限 7d ,降低检验成本 ,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点。禽霍乱采用攻毒法 ,大肠杆菌采用改良微量凝集试验测定抗体效价法测定禽_大二联疫苗的免疫期与保存期。结果表明 ,该疫苗的免疫期为 6个月以上 ,- 10℃保存期为 18个月 ;4℃～ 8℃为 12个月 ;15℃～ 30℃为 6个月。田间免疫试验表明 ,疫苗安全可靠 ,现场应用已逾 2亿羽份 。

鸡减蛋综合症蜂胶灭活疫苗的研究与应用

用纯化的天然免疫增强剂蜂胶研制成功鸡减蛋综合症蜂胶灭活疫苗。疫苗中蜂胶干物质含量为１０ｍｇ／ｍＬ。用该苗０．５ｍｌ免疫开产或临开产母鸡，接种后７ｄＨＩ抗体价为７～１０（ｌｏｇ２），９０ｄ为９～１２（ｌｏｇ２），１８０ｄ为８．７～９．８（ｌｏｇ２），３００～３６０ｄ为６．５～８．０（ｌｏｇ２）。免疫期为一年。－１５℃保存不冻结，保存期为１８个月，０～８℃为１５个月，１０～１５℃为１２个月，２５～３０℃为３个月，经实验室试验和６００多万羽份的田间区域推广试验结果表明，ＥＤＳ－７６蜂胶苗的免疫效果显著，优于进口和国产ＥＤＳ－７６油苗，完全可以替代进口，具有良好而广阔的推广应用前景。

动物疫苗用蜂胶的质量要求及工业化提取技术的研究

本研究对动物疫苗用蜂胶质量提出了“外观、相对密度、味道、熔点”４项简易指标和“碘值、蜂蜡、可氧化性、黄酮类反应阳性、酚类化合物、杂质、含量”６项理化指标，摸索出一整套有效的蜂胶工业化纯化提取工艺技术，实践证明，该工艺技术具有快速、简便、经济。

新城疫(ND)-减蛋综合征(EDS76)蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ.制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒 ( NDV) Colon-30株和减蛋综合征病毒 ( EDS76AV) -1 2 7株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚 ,制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后 ,与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化 ,制成鸡新城疫 ( ND) -减蛋综合征( EDS76)蜂胶二联灭活疫苗 ,对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对 3～ 6周龄易感雏鸡以 2倍使用剂量肌肉注射 ,安全性良好 ;对 1日龄雏鸡接种 1个使用剂量进行急性毒性试验 ,1 5d生长曲线表明 ,对雏鸡无影响 ;对 6周龄雏鸡注射 1个使用剂量 ,每批疫苗免疫 1 0只鸡 ,免疫后 5～ 32 d,鸡血清中 EDS76血凝抑制( HI)抗体的几何平均滴度 ( GMT)为 6.5～ 1 1 .8log2 ,ND血凝抑制 ( HI)抗体的几何平均滴度 ( GMT)为 4 .8～ 9.8log2 ;对 ND免疫攻毒试验表明 ,3批疫苗 ,每羽份含有的半数保护量 ( PD5 0 )分别为≥ 1 2 7、≥ 1 31和≥1 2 7。

猪伪狂犬病蜂胶疫苗和油佐剂疫苗对小白鼠注射部位损伤的病理组织学比较

用猪伪狂犬病 g E/ g I基因缺失蜂胶灭活疫苗和油佐剂疫苗分别腿肌注射免疫实验动物小白鼠 ,分别于免疫后 2 ,7,1 4 d和 3 5d剖杀 ,取注射部位的肌肉组织 ,常规石蜡包埋切片观察。结果表明 ,蜂胶苗注射后立即吸收 ,局部不留痕迹 ,感官与对照相比无任何差异。免疫 2 d注射局部显微变化轻微 ,7d后肌纤维间隙发现吞噬黄色蜂胶疫苗的细胞 ,1 4 d此种细胞更多 ,3 5d汇聚成片 ;油苗注射后在 3 5d的试验期内一直未能全部吸收。免疫 2 d见肌纤维断裂、肿胀、坏死 ,大量嗜中性粒细胞浸润 ,肌纤维间隙广泛分布油囊 ,7d时局部炎症仍很严重 ,1 4 d表现炎症转归 ,至 3 5d形成肉芽组织包裹的油囊结构。结果表明 ,蜂胶疫苗免疫后 ,不但局部组织学影响明显小于油苗注射组 ,而且可趋化大量吞噬细胞到注射局部 ,促进抗原高效递呈 ,且可在注射局部的吞噬细胞胞浆中停留 3 5d以上 ,可能起到了类似“抗原库”的作用 。

蜂胶提取物对禽流感H9亚型Shandong/chicken/98株的灭活作用效果研究

本文通过鸡胚接种的方法就蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9亚型Shandong/chick-en/98株的灭活作用进行了研究。结果表明,常温下3分钟、30分钟,37℃3分钟、30分钟,含蜂胶乙醇浸出物0.1mg/mL的95%乙醇稀释液,含蜂胶乙醇浸出物2.5mg/mL的47.5%乙醇稀释液,含蜂胶乙醇浸出物10mg/mL的生理盐水稀释液,接种鸡胚后病毒HA测定为0。这充分说明以上浓度蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9亚型Shandong/chicken/98株具有完全的灭活作用。37℃3分钟、30分钟,含蜂胶乙醇浸出物0.1mg/mL的47.5%乙醇稀释液,含蜂胶乙醇浸出物6.25mg/mL的生理盐水稀释液对禽流感H9株有部分灭活作用。

禽多杀性巴氏杆菌强毒株与弱毒株制备的蜂胶灭活疫苗免疫原性的比较试验

用禽多杀性巴氏杆菌强毒株(C48 1)与弱毒株(G190E40和B26 T1200)制备的蜂胶灭活疫苗的免疫原性对比试验结果表明,强毒株C48 1制备的禽霍乱蜂胶灭活疫苗的免疫效果显著高于弱毒株G190E40和B26 T1200,近期保护率相差20%～40%,3个月后相差40%～80%。强毒株C48 1的免疫原性显著高于弱毒株G190E40和B26 T1200,说明禽多杀性巴氏杆菌荚膜上的毒力蛋白可能具有免疫原性。

禽霍乱+大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗与油佐剂疫苗注射部位的动态病理组织学比较观察

用禽霍乱+大肠杆菌二联蜂胶灭活疫苗和油佐剂疫苗分别胸肌注射免疫肉鸡,分别于免疫后7d、14d和28d剖杀,取注射部位的肌肉组织,常规石蜡包埋切片观察。结果为,蜂胶疫苗免疫组免疫后7d时,肌纤维轻度水肿,纤维间有大量淋巴细胞和巨噬细胞的浸润,巨噬细胞吞噬有蜂胶颗粒,14d时肌纤维则恢复正常;油苗注射组免疫后,7d时肌肉中度水肿,其间有大量油乳状疫苗残留,镜检可见肌纤维断裂、坏死,其间有较多较大的油囊,囊壁由大量增生的成纤维细胞、异嗜性粒细胞、巨噬细胞、小血管及淋巴样细胞组成,细胞增生持续存在到28d,最后形成肉芽肿结构。研究结果表明,蜂胶疫苗免疫后对局部组织学影响明显小于油苗注射组。

ND蜂胶灭活疫苗大剂量预防注射紧急防治鸡新城疫效果观察

鸡新城疫是严重危害养鸡业发展的主要传染病。由于该病的传播和蔓延,给养鸡业造成了巨大的经济损失。目前,控制该病的主要措施仍然是以预防免疫接种为主要手段。但由于免疫监测不全,疫苗免疫空白期的存在以及ND毒株的变异和强毒株的出现等种种原因,导致近年来在免疫鸡群中时常暴发新城疫或非典型新城疫,给养鸡生产造成了很大损失。为寻求新的防治措施,保护养鸡业的发展,我们经流行病学调查、临床观察、病理解剖、病原分离鉴定,将确诊为ND的鸡群用ND蜂胶灭活疫苗大剂量紧急预防注射,取得了较好的效果。现将结果报告如下: 一、材料和方法 1.流行病学调查、临床及病理观察 1.1 流行病学调查:1997年以来,我们对山东、河南、河北、江苏、安徽、陕西等省的鸡场和养鸡专业户进行了走访调查,发现以呼吸症状、神经症状、产蛋下降为主要症状的一种传染病严重制约了当地养鸡业的健康发展。该病主要危害25-40天左右的雏鸡和大龄的产蛋鸡,雏鸡发病率高达60％-100％,

基因工程菌K88-K99融合蛋白高密度发酵工艺的初步研究

通过培养基LB、改良LB、改良LB+微量盐、改良Minca和2×YT+10g/L葡萄糖5种培养基进行筛选,设定培养基初始pH分别为6.0、6.5、7.0和7.5四个梯度进行蛋白表达,用全自动微生物生长仪每隔30min测定菌液的OD值,最终确定2×YT+5g/L的葡萄糖生长菌数较多,细菌生长速度快,pH7.0时蛋白表达量较高,并且通过细菌生长曲线得出最佳诱导时机为细菌培养开始后3.0h^3.5h,诱导时长4.0h,溶氧量控制在30%,为ETEC大肠埃希菌高密度发酵工艺的研究提供了基础数据。

羊场布鲁氏菌病监测净化血清学检测方法选择与优化研究

为比较GICA与RBT方法用于布病初筛检测,iELISA、cELISA与SAT等方法用于布病确诊检测符合情况,统计比较以RBT、iELISA、GICA作为初筛试验方法,以SAT、cELISA、iELISA作为确诊检测方法不同组合阳性判断结果符合程度,遴选适合基层布病血清学检测方法的组合。同时采用RBT、GICA、iELISA与cELISA方法,对滨州某羊场151只绵羊进行布病抗体检测,选择RBT检测阳性样品,应用SAT复检,并对以上初筛方法和确诊方法进行不同组合分析,与RBT初筛、cELISA方法确诊方法判定结果进行符合程度比较。结果显示:以确定RBT法初筛、cELISA法确诊,GICA法初筛、cELISA法确诊,RBT法初筛、iELISA法确诊等组合可作为布病监测净化的优先选择血清学检测方法。

新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定

从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出 7株具有血凝活性的病毒 ,该 7株病毒的血凝活性均能被新城疫LaSota株标准阳性血清所抑制 ,但病毒不能被中和 ,仍能致死鸡胚。经分离鉴定 ,分离毒均为新城疫病毒株。通过鸡胚半数致死量(ELD50 )、最小致死量致死鸡胚的平均时间 (MDT)、1日龄雏鸡脑内致死指数 (ICPI)、6周龄雏鸡静脉致死指数 (IVPI)、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明 :7株分离病毒均为新城疫病毒强毒株 ,其毒力与标准强毒株F4

应用16S rRNA基因测序法鉴定禽多杀性巴氏杆菌的研究

应用 16SrRNA基因测序法对以疫苗标准强毒株C4 8_1和弱毒疫苗代表株G190E4 0为阳性对照株和分离鉴定的 2株禽源多杀性巴氏杆菌Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1株 ,进行 16SrRNA基因序列分析。结果表明 ,2株分离菌与对照的强弱毒株之间的同源性为 10 0 %。后经Blastn分析Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong /2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0株与已发表 11株多杀性巴氏杆菌同源性高达 10 0 % ,与已发表的 34株多杀性巴氏杆菌同源性均超过 98% ,同时与其它巴氏杆菌种如溶血巴氏杆菌等同源性均低于 96 % ,进一步证实Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1分离株均为多杀性巴氏杆菌。生化实验鉴定表明Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0菌株均为subsp .Multocida亚种。

功能基因组学研究进展

2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主要包括应用差异显示反转录 PCR、基因表达序列分析 (SAGE)、微点阵、蛋白质组学和生物信息学等研究基因组表达概况、基因组多样性和模式生物学等。