高铁饮食致C57BL/6小鼠黑质DA多巴胺能神经元选择性损伤的研究

目的研究高铁饮食对C57BL/6小鼠黑质(SN)和中脑腹侧被盖区(VTA)多巴胺能神经元的不同损伤。方法将C57BL/6小鼠随机分为高铁饮食组和正常对照组,利用免疫组织化学染色法及铁染色技术检测两组小鼠SN和VTA的酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数及铁水平的变化。结果高铁饮食组SN的TH阳性细胞数较正常对照组明显减少(t=16.31,P<0.001),铁染色阳性细胞数较对照组明显增高(t=13.01,P<0.001)。而两组小鼠VTA的TH阳性细胞数及铁染色阳性细胞数均无明显差别。结论铁在SN的选择性聚积参与了SN多巴胺能神经元的选择性损伤。

帕金森病和阿尔茨海默病中Ghrelin的神经保护作用研究进展

Ghrelin作为一种新发现的脑肠肽,与其受体生长激素促分泌素受体结合后,在体内主要刺激生长激素的释放、影响摄食,从而维持机体能量代谢和体重的平衡。近年来随着研究的不断深入,发现其生理作用远不止这些。有关ghrelin神经保护作用的研究越来越引起人们的重视和关注。在帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病中,ghrelin均发挥不同程度的神经保护作用,提示其可能是一种潜在的治疗靶点。本文主要就此方面的研究状况进行阐述,以期为ghrelin的神经保护效应提供理论依据和支持。

铁过载对原代神经元衰老的影响

目的研究铁过载对原代神经元发生衰老的影响。方法取大鼠原代中脑腹侧神经元进行体外培养,随机分为对照组和实验组,实验组给予100μmol/L枸橼酸铁铵(FAC)处理24 h,对照组用不含FAC的培养液进行处理,通过检测细胞衰老相关β-半乳糖苷酶活性评估细胞衰老状况。结果与对照组相比,在100μmol/L FAC作用24 h时,实验组原代神经元衰老相关β-半乳糖苷酶活性增加(t=18,P<0.05)。结论铁过载可诱导原代神经元发生衰老。

帕金森病的研究进展

帕金森病(PD)是一种与年龄密切相关的疾病,随着老龄化社会的到来,PD患病率在全球呈现显著增高态势。但到目前为止,PD的病因尚未明确,现有的治疗方法及手段也具有其局限性及副作用。本文综述了PD在病因、发病机制、非运动症状及治疗领域的研究进展,以期为PD的机制探索和个体化临床治疗提供理论基础。

迷迭香酸的铁离子螯合作用

目的观察迷迭香酸的铁离子螯合作用。方法采用邻二氮菲分光光度法和Western blot检测方法 ,分别观察不同浓度的迷迭香酸的铁离子螯合作用及对MES23.5细胞铁转出蛋白ferroportin1（FP1）的调节作用。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测方法 ,观察不同浓度的迷迭香酸对MES23.5细胞存活率的影响。结果 10-4~10-2mol/L的迷迭香酸具有铁离子螯合作用（F=7.851,q=3.88~6.14,P〈0.05）,10-5mol/L的迷迭香酸没有表现出铁离子螯合作用（P〉0.05）。10-5、10-4mol/L的迷迭香酸对细胞无毒性作用（P〉0.05）,10-3mol/L的迷迭香酸使细胞存活率下降（F=4.948,q=4.04,P〈0.05）。10-4mol/L迷迭香酸不能调节MES23.5细胞内FP1的表达（F=0.333,P〉0.05）。结论迷迭香酸有明显的铁离子螯合作用,在治疗铁代谢相关疾病方面有着潜在的应用前景。

携带人alpha-突触核蛋白真核重组质粒构建及其SK-N-SH细胞表达

目的构建携带人alpha-突触核蛋白真核重组质粒,检测其在人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中的表达及对细胞存活率的影响。方法 PCR扩增alpha-突触核蛋白基因,产物纯化后与pcDNA3.1(+)载体进行连接反应,构建pcDNA3.1(+)/alpha-突触核蛋白真核重组质粒。Lipofectamine法转染人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,RT-PCR方法检测SK-N-SH细胞中alpha-突触核蛋白mRNA的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞存活率的影响。结果酶切鉴定及基因测序证明人alpha-突触核蛋白基因已被完整、正确地插入到pcDNA3.1(+)载体中。RT-PCR结果显示该表达载体转染SK-N-SH细胞后,细胞内alpha-突触核蛋白mRNA的表达水平明显增高,MTT方法检测结果显示该表达载体转染并未引起细胞存活率的改变。结论 alpha-突触核蛋白真核重组质粒构建成功,并可在SK-N-SH细胞内表达,且对细胞的存活率不产生任何影响,从而为进一步研究alpha-突触核蛋白在帕金森病发病机制中的作用奠定了基础。

枸橼酸铁铵对小胶质细胞释放炎性因子的作用

目的观察枸橼酸铁铵(FAC)对小胶质细胞释放炎性因子的作用。方法分别用脂多糖(LPS)、FAC、LPS+FAC刺激小胶质细胞,采用酶联免疫吸附试验方法检测培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果对照组和FAC组几乎检测不到炎性因子的释放,LPS组IL-1β、TNF-α释放量较对照组显著增加(F=38.864、102.504,q=8.204、14.369,P<0.01),LPS+FAC组IL-1β、TNF-α释放量较LPS组显著增加(q=4.517、5.610,P<0.01)。结论 FAC可以刺激激活状态小胶质细胞释放大量炎性因子。

MK-801对6-OHDA诱导PD模型大鼠黑质-纹状体通路作用

目的观察N-甲基-D-天门冬氨酸受体阻滞剂MK-801对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的帕金森病（PD）模型大鼠黑质-纹状体通路的作用。方法将40只大鼠随机分为正常对照组、6-OHDA模型组、MK-801低剂量（0.1mg/kg）处理组和MK-801高剂量（0.2mg/kg）处理组。采用6-OHDA单侧损毁大鼠黑质制备PD模型。应用免疫组织化学法检测各组大鼠黑质内酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性神经元数目,高效液相色谱法检测纹状体内多巴胺（DA）的含量。结果与正常对照组相比,6-OHDA模型组大鼠6-OHDA损毁侧中脑黑质TH免疫阳性神经元数目、纹状体内DA含量显著降低（F=478.02、34.86,q=51.25、14.09,P〈0.05）。与6-OHDA模型组相比,MK-801低剂量处理组和MK-801高剂量处理组大鼠黑质TH免疫阳性神经元数目、纹状体内DA含量均显著增加（q=4.27~14.96,P〈0.05）。结论 MK-801对PD模型大鼠黑质-纹状体通路有明显的保护作用。

人Ndfip1基因在转染MES23.5细胞中的表达

目的应用携带人Ndfip1(Nedd4family interacting protein 1)基因的质粒pCMV6-XL5-Ndfip1转染MES 23.5多巴胺能神经细胞,检测其在细胞中的表达。方法应用Lipofectamine法转染MES 23.5细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MES 23.5细胞中Ndfip1mRNA的表达。结果该表达载体转染MES23.5细胞后,细胞内Ndfip1mRNA的表达水平明显增加(t=-8.295,P<0.01)。结论 Ndfip1基因可在MES23.5细胞内表达,从而为进一步研究Ndfip1在神经元保护中的作用奠定了基础。

铁对LPS诱导BV2小胶质细胞Lcn2蛋白表达影响

目的研究铁负载试剂枸橼酸铁(FAC)和铁螯合试剂去铁胺(DFO)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞中脂质运载蛋白2(Lcn2)表达的影响。方法为观察铁负载对Lcn2的影响,实验分为对照组、FAC组、LPS组、FAC+LPS组,对照组给予细胞培养液,FAC组与LPS组分别给予FAC或LPS处理24 h,FAC+LPS组给予FAC预处理4 h后应用LPS处理24 h。为观察铁螯合对Lcn2的影响,实验分为对照组、DFO组、LPS组、DFO+LPS组,对照组给予细胞培养液,DFO组与LPS组分别给予DFO或LPS处理24 h,DFO+LPS组给予DFO预处理4 h后应用LPS处理24 h。免疫印迹法检测各组Lcn2蛋白表达。结果与对照组比较,FAC不影响Lcn2蛋白表达水平(F=3.394,P>0.05),FAC预处理对LPS诱导的Lcn2蛋白表达上调没有影响(F=4.182,P>0.05);DFO不影响Lcn2蛋白表达水平(F=0.575,P>0.05),DFO预处理对LPS诱导的Lcn2蛋白的表达也没有影响(F=0.454,P>0.05)。结论细胞内铁状态改变对LPS诱导的Lcn2蛋白表达上调无明显影响。

A53T转基因小鼠黑质Kv4.3 A型钾通道的表达改变

目的探讨不同月龄α-突触核蛋白A53T转基因小鼠黑质区Kv4.3 A型钾通道的表达变化。方法选取不同月龄A53T转基因小鼠和同窝野生型(WT)对照小鼠,采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测小鼠黑质区Kv4.3以及酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达。结果3月龄的A53T转基因小鼠Kv4.3及TH蛋白的表达与WT小鼠比较差异无显著性(P>0.05),15月龄的A53T转基因小鼠Kv4.3蛋白表达较WT小鼠升高(t=3.202,P<0.01),TH蛋白表达较WT小鼠降低(t=2.475,P<0.05)。结论黑质区Kv4.3 A型钾通道随着帕金森病(PD)病情的进展发生改变,可能参与了PD的发病过程。

铁对过表达α-syn诱发iPC12细胞内钙离子增多影响

目的研究铁过载试剂对过表达α-突触核蛋白(α-syn)诱发iPC12细胞内钙离子增多的影响。方法用多西环素(DOX)处理iPC12细胞48 h,诱导其高表达α-syn。实验分为对照组、DOX组、DOX+枸橼酸铁胺(FAC)组和DOX+去铁胺(DFO)组。对照组用细胞培养液处理48 h;DOX组用DOX处理48 h;DOX+FAC组给予DOX预处理24 h后,用FAC处理24 h;DOX+DFO组给予DOX预处理24 h后,用DFO处理24 h。通过检测细胞内钙离子浓度评估细胞钙稳态。结果与DOX组相比,DOX+FAC组细胞内钙离子浓度升高(F=43.84,q=4.074,P<0.05),DOX+DFO组细胞内钙离子浓度无明显变化(q=1.430,P>0.05)。结论铁过载可加剧α-syn过表达诱发的细胞内钙离子水平升高。

铁离子对α-突触核蛋白聚集的诱发作用具有剂量和时间依赖性(英文)

目的帕金森氏病的一个重要标志是胞浆内路易小体的形成。路易小体的主要成分是α-突触核蛋白的聚集体,它和铁的积聚一同存在于黒质区。本实验旨在研究铁和α-突触核蛋白聚集的关系。方法 SK-N-SH细胞在不同浓度的三价铁作用下,分别孵育24h或48h,用MTT法和硫磺素S染色法分别检测细胞存活率、观察α-突触核蛋白的聚集情况。结果随着铁离子浓度的升高,细胞存活率显著下降。其中5mmol/L和10mmol/L三价铁引起的α-突触核蛋白的聚集相较于1mmol/L的三价铁引起的聚集更为严重。此外,在同一浓度的三价铁作用下,孵育48h引起的聚集比孵育24h引起的聚集更严重。结论铁离子诱发的α-突触核蛋白的聚集具有剂量和时间的依赖性,并且α-突触核蛋白的聚集介导了铁的毒性作用。

重组腺病毒携带的人GHS-R1a基因在人胚肾293细胞中的表达(英文)

目的构建携带GHS-R1a基因的重组腺病毒,为转基因做准备。方法采用PCR法扩增GHS-R1a基因片段,随后亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,形成重组质粒pAdTrack-CMV-GHS-R1a。线性化的pAdTrack-CMV-GHS-R1a和腺病毒骨架质粒pAdEasy1在感受态大肠杆菌BJ5183内同源重组。将线性化重组质粒pAdGHS-R1a转染进HEK293细胞,并用激光共聚焦显微镜、RT-PCR和Western blot技术检测绿色荧光蛋白及GHS-R1a的表达。结果重组质粒pAdGHS-R1a经Pac I酶切后得到一个大于30kb的大片段和一个4.5 kb的小片段,证明重组腺病毒质粒pAdGHS-R1a构建成功。Ad-GHS-R1a转染293细胞后24h能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-PCR和Westernblot均证实GHS-R1a基因能在293细胞中有效表达。结论携带GHS-R1a基因的重组腺病毒构建成功,为进一步研究GHS-R1a的功能提供了基础。

杨梅黄酮减弱MPP^+诱导的MES23.5细胞的细胞毒性(英文)

目的:探讨杨梅黄酮对MPP+处理的MES23.5细胞的保护作用。方法:实验分为空白对照组,MPP+处理组,MPP+和杨梅黄酮共处理组,分别处理MES23.5细胞24h后,应用Hoechst 33258染色观察各组细胞细胞核形态的改变,应用RT-PCR技术观察Bcl-2和Bax mRNA表达的改变。结果:杨梅黄酮能明显抑制MPP+引起的MES23.5细胞核固缩,核碎裂等形态学的改变,杨梅黄酮还可以对抗MPP+处理造成的MES23.5细胞的Bcl-2/Bax比率的降低。结论:杨梅黄酮对MPP+处理的MES23.5细胞具有保护作用。