植物病害生物防治菌的改良技术及产业化

介绍了植病生防菌的遗传改良技术,通过诱变育种、杂交育种及基因工程技术增强生防菌的抗菌活性和扩大防治对象,使改良后的生防菌较传统的生物杀菌剂具有更高的生防效率和更强的市场竞争力,这些改良技术的研究需要现代生物科学、分子生物学等多学科的结合。对生防菌的产业化研究作了综述,分析了生防菌产业化研究现状及实现产业化的关键技术指出了生防菌产业化的市场开发需要国家的支持,科研单位和企业等各方面的合作。

棉花转基因技术研究

棉花是一种重要的经济作物,在我国广泛种植。培育转基因棉花被看作是解决产量和生态环境问题最根本和最有效的方式。本文介绍了转基因棉花主要的研究方法,包括转化方法以及转入的基因等,并对转基因棉花的发展趋势作了相关探索。

天蚕抗菌肽B在毕赤酵母中的表达

Cecropins B是一种昆虫抗菌肽,具有分子量小,热稳定性、水溶性好、抗菌谱广等优点,更为重要的是抗菌肽对真核细胞几乎没有作用,仅仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞,是目前已知天然抗菌肽中活力最强的一种。根据毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,改造并化学合成天蚕素基因B,克隆到pPIC9K载体中,构建分泌型重组酵母表达载体CB-pPIC9K,转化Pichia pastoris受体菌KM71,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,Cecropin B获得表达,分子量约3.8KD,摇瓶发酵产率可达到200μg/mL,并对其抗菌活性进行了初步测定。结果表明我们表达的重组Cecropins B对G-菌有较好的抑菌活性,且具有较好的热稳定性。这些特点使得重组抗菌肽Cecropins B在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显露出很好的应用前景。

水体中毒死蜱提取及测定的两种方法比较

比较了水体中毒死蜱两种不同的萃取和测定方法。结果表明,石油醚萃取、紫外分光光度计测定方法简单、快速,适用于大量样品的初期筛选;乙酸乙酯萃取、HPLC(高效液相色谱)测定方法在精确度上高于紫外分光光度法,且能同时检测毒死蜱及其代谢产物TCP(3,5,6-三氯-2-吡啶醇)的含量,但其方法耗时、费力,适用于少量样品的精确测定。紫外分光光度法和HPLC法的最低检测浓度分别为0.1 mg.L-1和0.02 mg.L-1。

盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定

从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudomonas),黄杆菌属(Flavobacterium),盐单胞菌属(Halomonas),微球菌属(Micrococcus)和芽孢杆菌(Bacillus)。各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。

根癌农杆菌介导的木霉插入转化及其应用

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)已广泛地应用于真菌的转化研究,该方法具有操作简单、转化效率高和转化子遗传稳定等特点。木霉作为土传植物病原菌的重要生防真菌,对其生防分子作用机制方面的研究也越来越受到关注,目前所面临的问题是如何基因突变和基因替换。ATMT法为木霉(Trichodermaspp.)的分子生物学研究提供了一个强有力的工具,在木霉的插入突变、遗传转化以及基因标记和克隆方面起着重要的作用。本文综述了根癌农杆菌介导木霉遗传转化的原理、特点、转化方法和应用,并且对有关发展趋势进行了展望。

天蚕抗菌肽B基因在毕赤酵母中多拷贝表达载体的构建

根据BglII和BamHI同尾酶的特点,通过对pPIC9K/CB进行改造,获得了不含BamHI位点的CecropinB表达框,并在此基础上构建了含三拷贝Cecropin B表达框的毕赤酵母表达载体,为Cecropin B的进一步开发与应用打下了基础。

绿色木霉菌LTR-2孢子提取物的抑菌活性及化学成分分析

通过研究绿色木霉菌LTR-2分生孢子提取物的抑菌活性及化学成分,为进一步提取纯化新型抗生素提供依据。采用固体麸皮培养基培养绿色木霉菌LTR-2,以二氯甲烷浸提法提取分生孢子中的抗菌物质,采用菌丝生长法测定提取物的抑菌活性,并用气相色谱-质谱联用仪进行分析,峰面积归一法计算有关成分的相对含量。绿色木霉菌LTR-2分生孢子的提取物抑菌谱广,对供试11种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用;抑制效果好,对禾谷丝核菌的抑制率为89.3%。从提取物中分离鉴定出60多种化学成分,其中烷烃类成分数量最多,为43种,其他成分有酮类、有机酸类、醇类、烯类等,主要成分是麦角固醇,含量为41.90%。结论:绿色木霉菌LTR-2分生孢子提取物具有抑菌作用。通过化学成分分析,提取物中含有化合物5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮,含量为2.35%,结合文献报道,推测5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮是提取物中起抑菌作用的物质。

NaCl胁迫对三叶草种子萌发的影响

研究了不同浓度NaCl溶液胁迫对从澳大利亚引进的3种三叶草(大花三叶草Trifolium michelianum,草莓三叶草Trifolium fragiferum和波斯三叶草Trifolium resupinatum)种子萌发及幼苗生长等相关生理生化特性的影响。研究结果表明NaCl胁迫对三叶草种子萌发和幼苗生长有一定的抑制作用,且抑制程度随着浓度的提高而增加。综合萌发率、芽长、根长、发芽指数、活力指数和种子膜透性等指标,草莓三叶草(Trifolium fragiferum?)表现出较其他2种三叶草更好的耐盐性,具有可推广潜力。

一株虫生真菌杀线虫活性代谢产物的分离与结构鉴定

以生物活性为导向,利用硅胶、凝胶柱层析法以及高效液相色谱等技术对一株虫生真菌拟青霉菌Paecilomycessp.的活性次生代谢产物进行了研究。从其活性组份中共分离得到2个杀线虫活性次生代谢产物,经质谱和核磁共振等波谱分析方法鉴定其结构分别为脑苷酯类化合物Cerebroside A(1)和Cerebroside B(2)。活性测定结果显示,这2个化合物均具有杀松材线虫Bursaphelenchus xylophilus活性,其中化合物1在质量浓度分别为1000,100和10μg/mL下对松材线虫的致死率分别为100%,100%和11.1%。

土壤杀菌剂对木霉根际竞争的影响及木霉对玉米生长作用的初步研究

利用木霉对五氯硝基苯的天然抗性，在土壤中施用4-12μg·g^-1土五氯硝基苯。结果表明，哈茨木霉T7在用4μg·g^-1土五氯硝基苯处理的玉米根际土中的根际竞争指数为4．332，明显高于对照（RC=3．758）。表明适量浓度的土壤杀菌剂，能提高其在玉米根际土中的种群密度，从而提高其根际竞争；但在6-12μg·g^-1土五氯硝基苯处理的玉米根际土中均低于对照，表明过高浓度的杀菌剂会因影响木霉的生长而降低其在根际的竞争能力。盆栽试验表明，用哈茨木霉T7处理土壤，对玉米的出苗无明显作用，但对玉米植株后期的生长有明显的促进作用。

多菌灵降解菌的分离、鉴定及其降解特性研究

从长期施用多菌灵的葡萄园土壤中分离纯化得到一株对多茵灵降解较好的茵株djl-11，经生理生化鉴定和16SrDNA序列比对分析，鉴定该菌株为红平红球菌（Rhodococcus erythropolis）。试验研究表明，添加少量氮源可促进菌株dj1—11对多菌灵的降解作用。该菌能够v7,多茵灵为唯一碳源，在多菌灵浓度达到1000Ixg／mL的无机盐培养基中，28℃摇床培养48h降解率达到了99．15％。在pH值4-9之间均能降解多菌灵，最适温度在20～30℃。

高效絮凝剂产生菌的筛选及絮凝活性研究

从污泥中分离筛选出1株具有高絮凝活性的细菌菌株F78,对其进行了分子鉴定,测得该菌16SrDNA长度为1501 bp,在GenBank中的登录号为EU443097,序列比对结果显示,该菌与粪产碱杆菌（Alcaligenes faecalis）的16S rDNA碱基序列相似性为99%。絮凝活性物质可由F78菌株分泌到胞外,通过对絮凝活性影响因素的研究,发现Ca^2＋的助凝效果比Fe^3＋、Fe^2＋、K^＋、Na^＋好;在高岭土悬液pH 3.0-12.0范围内,能保持较高的絮凝活性;菌株F78产生的絮凝活性物质具有良好的热稳定性。

生防菌剂YKT41及B418防治茄子根结线虫病的田间试验

为了验证褐球固氮菌YKT41和越南伯克霍尔德氏菌B418对茄子根结线虫病的防治作用,进行了田间防治效果试验。结果表明,在使用30.0 kg/hm2微生物制剂(活菌数≥20×108 cfu/g)的情况下,YKT41及B418活菌制剂的防治效果分别达到了72.8%和75.6%,增产效果分别达到了14.6%和12.7%,具有良好的推广使用价值。试验还表明,该微生物菌剂主要以活体微生物起作用,灭活后使用效果较差,因此一定要在保质期内使用。

生姜茎尖的组织培养及试管苗快繁体系的研究

以莱芜生姜的茎尖生长点(<1 mm)为外植体,采用不同激素和浓度对生姜的分化进行研究。结果表明:6-苄氨基嘌呤(BA)对姜芽分化最为有效,培养基MS+BA 5.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1最有利于芽的分化;快繁采用液体浅层静止培养,试管苗增殖速度显著提高,增殖系数比固体培养基提高了31%,根系发达,有利于试管苗的移栽成活。

澄清型石榴山楂复合果汁饮料加工工艺的研究

本文对澄清型石榴山楂复合果汁饮料的加工工艺进行了研究.单因素试验结果表明,利用石榴汁与山楂汁质量比为4：1的混合果汁作为石榴山楂复合果汁饮料加工原料,可以使复合果汁感官品质最好.以透光率为指标,比较硅藻土、果胶酶和壳聚糖三种澄清方式对复合果汁的澄清效果,结果表明,果胶酶澄清方式效果最好,壳聚糖次之,硅藻土最差,且果胶酶澄清后的复合果汁稳定性最好,壳聚糖和硅藻土澄清后的复合果汁稳定性较差.通过正交试验优化复合果汁澄清工艺,结果表明,添加质量分数为0.08％的果胶酶,酶解温度为45℃,酶解时间为1.5～2.0 h,复合果汁澄清效果最好.

巨大芽孢杆菌AP25内切葡聚糖酶基因的克隆及序列测定

从土壤中分离到一株产纤维素酶的巨大芽孢杆菌AP25,经羧甲基纤维素平板检测,该菌可产生葡聚糖内切酶。根据GenBank登录的-β1,4内切葡聚糖酶基因(DQ782954.1,M28332.1,AY859492.1)的同源性序列,利用PCR方法克隆到该酶的基因,并对其进行测序。测序结果显示其全长为1500bp,推测其含499个氨基酸。与GenBank中的已知葡聚糖内切酶相比较,发现该酶的氨基酸序列与Bacillus subtilis的β-1,4内切葡聚糖酶基因同源性达到达94%。

麦麸米糠混合发酵生产红曲色素条件的研究

以廉价农产品废弃物麦麸和米糠为原料,通过单因素试验,正交试验和附加碳、氮源及微量元素试验,研究了接种量、发酵温度和发酵时间对红曲SM01色素产量的影响。确定了红曲SM01的最佳发酵条件为接种量13%,发酵温度30℃,发酵时间10 d;最佳附加方案为葡萄糖+硝酸铵+甘油+KH2PO4+Mg SO4。在上述培养条件下,以低成本的麦麸、米糠、葡萄糖、硝酸铵、甘油及微量元素混合物来代替大米培养红曲霉,色价高达3 789 U/g,降低了约30%的生产成本。

木霉拮抗灰霉菌对环境pH的影响

灰霉菌Botrytis cinerea引起的果蔬花卉灰霉病,易发难防。灰霉菌侵染寄主植物初期分泌的草酸是重要的致病因子,草酸主要通过降低环境pH等作用对寄主植物产生较强致病力。木霉是防治灰霉病的重要生防菌,且有研究表明木霉具有消除草酸的作用,但这种作用是否参与了灰霉病的防治仍未知。本研究探讨哈茨木霉(Trichoderma harzianum)LTR-2消除草酸并改变环境pH的水平,并进一步分析LTR-2拮抗灰霉菌在PDA和植物组织中对峙培养对环境pH的影响,同时统计分析多株木霉抑制灰霉菌与环境pH改变的相关性,以及LTR-2对峙灰霉菌对草酸的消除作用。结果表明,LTR-2在<50 mmol·L-1草酸浓度下可有效提高环境pH。LTR-2与灰霉菌在PDA和植物组织中的共培养均可有效缓解灰霉菌造成的环境酸化。Pearson相关性分析表明,木霉对灰霉的抑制率与环境pH之间呈线性正相关。另外,本研究验证了LTR-2有效防治黄瓜叶片上灰霉病时,能够消除叶组织环境中的草酸。本研究结果暗示消除草酸对环境的酸化作用是木霉防治灰霉病的机制之一。

褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究

为了利用原生质体融合技术获得同时具备固氮、解磷、抑病等活性的多功能菌株,本文对褐球固氮菌A41和荧光假单胞菌P32原生质体的制备条件进行了研究。通过对菌龄、酶解温度、酶浓度、酶解时间等影响因素的正交实验确定了褐球固氮菌A41和假单胞菌P32原生质体制备的最佳条件。实验结果表明,固氮菌A41最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度3mg/mL、酶解时间45min;假单胞菌P32最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度2mg/mL、酶解时间30min。