海参共附生微生物HS-1 Epicoccum spp.次级代谢产物的研究

目的:通过海参共附生微生物的研究获得活性次级代谢产物。方法:本研究通过对黄海海域海参的共生微生物分离、纯化,并进行分子鉴定,确定该菌株的属。利用GYP培养基对该菌进行发酵培养,通过现代波谱手段,确定了次级代谢产物的结构。结果:确定该菌株为附球孢菌。确定4个代谢产物,分别为:3,4-二氢-8-甲氧基-3,5-二甲基-1H-2-苯吡喃(1)、3,4-二氢-8-羟基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮(2)、过氧麦角甾醇(3)和丁二酸(4)。结论:附球孢菌首次从海参中得到。本文为深入研究开发海参资源提供了新思路。

黄药子体外抗氧化活性研究

目的:研究黄药子不同提取物的体外抗氧化活性。方法:在体外化学模拟的条件下,采用比色法测定了黄药子水提物和醇提物对DPPH.自由基和羟基自由基的清除能力、抗脂质过氧化能力、还原能力以及总体抗氧化能力。同时测定了黄药子水提物和醇提物的总酚酸和总黄酮的含量。结果:黄药子醇提物的抗氧化活性强于水提物,其醇提物对DPPH.自由基和羟基自由基显示强的清除能力,具有较强的抗脂质过氧化能力和一定的还原能力,其总体抗氧化能力也较强。黄药子水提取物和醇提取物的总酚酸和总黄酮含量分别为49.12、210.05μg/mg和27.25、117.93μg/mg。结论:黄药子具有强的抗氧化活性可能与其含有的酚酸和黄酮类成分有关。

芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆、序列分析及其在伯克氏菌B418中的表达

采用PCR技术扩增到枯草芽孢杆菌几丁质酶基因的编码序列。片段共2227bp,含有一个具有1788个核苷酸的开放阅读框架,起始密码子位于211bp,终止密码子位于1998bp,共编码氨基酸605个。序列比较发现同已发表的枯草芽孢杆菌几丁质酶核苷酸具有99.39%的同源性。将该基因与大肠杆菌-伯克氏菌穿梭质粒pRK415连接,获得重组质粒pRChi113。重组质粒电击转入伯克氏菌B418中,获得工程菌株B418-9、B418-13。与野生菌株B418相比,平板拮抗试验表明,工程菌株B418-9、B418-13对大丽花轮枝孢、立枯丝核菌、麦根腐长蠕孢、禾谷丝核菌抑菌效果明显提高。

女贞子体外抗氧化活性研究

目的:研究女贞子的体外抗氧化活性。方法:在体外化学模拟的条件下,采用比色法测定了女贞子提取物对二苯代苦味酰基(DPPH)自由基和羟基自由基的清除能力,抗脂质过氧化能力,还原能力以及总体抗氧化能力。结果:女贞子醇提物对DPPH自由基和羟基自由基显示出较强的清除能力,具有一定的抗脂质过氧化能力和还原能力,其总体抗氧化能力也较强。结论:女贞子具有较强的抗氧化活性,可以作为潜在的天然抗氧化剂开发利用。

木霉AFLP分子标记技术体系的建立

以摇床培养的木霉菌丝为材料,采用液氮研磨等方法提取到高质量的基因组DNA,能够用于AFLP实验分析,探索和优化酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素,建立了适合木霉AFLP的最佳试验体系和反应条件。利用该技术体系对不同时期保存的菌株及融合子进行AFLP指纹分析,发现不同时期保存的同一菌株指纹相同,融合子指纹兼有亲本菌株的特性。通过对木霉AFLP条件的探索和研究,建立了木霉基因组AFLP反应体系,得到的扩增多态性条带完全能够用于木霉遗传稳定性和多样性分析。

越南伯克霍尔德氏菌B418杀线虫活性产物的稳定性研究

研究越南伯克霍尔德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）B418产生的杀线虫活性代谢产物,采用根结线虫（Meloidogyne spp.）2龄幼虫生物测定法对B418发酵液上清液的热稳定性、酸碱稳定性及有机溶剂的稳定性进行了研究。结果表明,B418代谢产物的处理温度最高不应超过60℃;pH稳定范围为7.0～10.0,其中pH为7.0时B418代谢产物活性最高,B418代谢产物处理后8 h试虫最高校正致死率为76.63%;以乙酸乙酯、石油醚、丙酮、正丁醇均降低了B418代谢产物的杀线虫活性,氯仿不影响代谢产物活性,氯仿处理后的代谢产物线虫死亡率稳定在74%以上。

耐盐薄荷的离体培养与植株再生的研究

为研究耐盐薄荷的快速繁育技术,以耐盐的椒样薄荷茎段为外植体,采用正交试验L4(23)筛选其愈伤诱导培养基。研究结果表明,NAA是影响耐盐薄荷诱导愈伤能力的重要因素,其最适浓度为0.2 mg/L,愈伤诱导率达92%以上。在此基础上,通过扩大培养基中6-BA浓度进行不定芽增殖培养基筛选,最终确定增殖培养基为2/3 MS+5.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+4 g/L琼脂,pH值6.0(灭菌前);此培养基下培养,增殖系数达19.23。在诱导生根培养基的筛选中,综合分析植株生长量(株高)、生根数量(根数)及根生长量(根长),确定生根培养基为1/2 MS+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+4 g/L琼脂,pH值6.0。

一株拟青霉菌(Paecilomyces sp.)的次生代谢产物研究

目的:通过对一株拟青霉菌(Paecilomyces sp.)的研究获得活性次生代谢产物。方法:利用固体大米培养基对该株拟青霉菌(Paecilomyces sp.)进行发酵培养,利用硅胶、凝胶柱层析法以及高效液相色谱等技术对该株真菌的次生代谢产物进行研究。通过质谱和核磁共振等现代波谱分析方法对其结构进行了鉴定。结果:共分离得到4个次生代谢产物,分别为:Cerebroside C(1)、Cerebroside D(2)、2-Hydroxybenzyl alcohol(3)、2-(4-Hydroxyphenyl)ethanol(4)。结论:以上4个化合物均为首次从该株真菌中分离得到。

BtR05悬浮剂制备及其对南方根结线虫卵孵化的影响

通过对表面活性剂、防腐剂、悬浮剂的筛选和组合优化,制备了苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis BtR05悬浮剂。室温条件下储存12个月后,BtR05悬浮剂的活菌存活率为74.74%。本试验测定了室内条件下BtR05悬浮剂对南方根结线虫Meloidogyne incognita卵孵化的抑制作用;结果表明对南方根结线虫卵孵化的抑制率随悬浮剂浓度的增大以及处理时间的延长而提高;BtR05悬浮剂稀释25倍液处理2d和4d后,对南方根结线虫卵孵化的抑制率分别为85.67%和97.97%。

多功能芽孢杆菌的分离、筛选及活性测定

从小麦、禾本科杂草根际取样,分离固氮芽孢杆菌,并测定各菌株的抑菌活性及降解有机磷农药的能力,筛选多功能芽孢杆菌菌株。结果表明,分离筛选的11株固氮芽孢杆菌主要包括胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus);其中7株菌株对立枯丝核菌和禾谷丝核菌两种病原菌具有明显的抑菌活性;5株菌株能有效降解甲胺磷和甲基对硫磷两种有机磷农药。巨大芽孢杆菌BM3和地衣芽孢杆菌BL6具有明显的固氮、抑菌和降解有机磷农药等多种功能活性。

菌株TLB15发酵培养基的优化及其发酵液的杀虫活性

采用正交试验对菌株TLB15的摇瓶发酵培养基进行了优化,结果表明:优化后的培养基为玉米粉3%、豆粉2%、蔗糖1%、硫酸铵0.1%、磷酸氢二钾0.3%、磷酸二氢钾0.2%、七水硫酸镁0.04%。采用10L小型发酵罐发酵48h后活菌数达4.52×109 cfu·mL-1,产芽孢率为90%。室内生物测定结果表明,菌株TLB15发酵液在药后72h对小菜蛾2龄幼虫和甜菜夜蛾2龄幼虫的校正死亡率为66.93%和69.07%。

TL_2的鉴定及其对植物病原菌的抑制作用

对枯草芽孢杆菌TL2进行了16SrDNA序列分析,结合菌落形态、生理生化特征研究,将其鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。通过对峙培养法测定TL2对10种植物病原菌的抑制作用,结果表明,对峙培养5d后,TL2对10种病原菌均有不同程度的抑制作用,其中枯草芽孢杆菌TL2对辣椒疫霉菌的平均抑制率最高(65.12%),对苹果轮纹病菌的平均抑制率最低(24.14%)。

哈茨木霉LTR-2双价基因重组菌株的构建及其防治效果

本文利用限制性内切酶介导法转化哈茨木霉LTR-2,获得具有双价基因(glu14、chi42)的重组生防菌株。试验得到的木霉转化子具有遗传稳定性,于无药PDA平板上连续转接6次后,在Hyg 200μg/m L的PDA平板上仍可继续生长。PCR扩增及Southern杂交证实目的基因已随机插入木霉基因组DNA上,本试验转化子均为单拷贝插入。转化子的β-1,4-葡聚糖酶和几丁质酶水解活性较出发菌株LTR-2显著提高(P<0.01),其中转化子L-15的两种水解酶活性均最高。转化子在温室条件下对番茄晚疫病、茄子猝倒病和黄瓜灰霉病均有较好的防治作用,但不同处理间存在显著性差异(P<0.01),其中转化子L-15最高,对3种病害的防治效果分别达到了91.5%、94.9%和83.8%,较出发菌株LTR-2处理分别提高了53.5%、55.9%和33.5%。结果表明,利用REMI技术,将β-1,4-葡聚糖酶基因glu14和几丁质酶基因chi42重组到木霉染色体DNA上,是获得高效重组菌株的有效手段。

越南伯克霍尔德氏工程菌株B418-37的温室防病增产效果

越南伯克霍尔德氏菌B418-37为含有外源几丁质酶基因的工程菌株,该菌株具有固氮、解磷、解钾、促进植物生长、防治植物多种病害等作用。本试验验证在温室条件下B418-37工程菌株对两种植物病害的防治效果及其对植物幼苗的促生效果。结果表明:B418-37工程菌株对黄瓜立枯病的防治效果达87.0%,较出发菌株B418提高36.8%;B418-37处理后黄瓜幼苗的生物量比空白对照增加19.7%,较出发菌株B418提高4.0%。B418-37对小麦纹枯病的防治效果达94.5%,较出发菌株B418提高39.8%;B418-37处理后小麦幼苗的生物量比空白对照增加28.6%,较出发菌株B418提高5%。

无致病性双核丝核菌BNR-1的抑菌作用及温室防病效果

通过平板对峙培养试验和温室防病试验,测定了双核丝核菌BNR-1的抑菌作用及对植物真菌病害的防治效果。结果表明,在PDA培养基上BNR-1对供试7种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对苹果拟茎点霉的抑制作用最强,抑制率为83.9%。温室试验表明,BNR-1对小麦幼苗无致病性,对小麦纹枯病的防治效果达73.7%,较对照药剂井冈霉素提高13.2个百分点,处理间差异极显著(P<0.01)。

伯克氏菌双价转化载体的构建及结构鉴定

通过PCR技术分别在已有的几丁质酶基因和内切葡聚糖酶基因前端加入了SD序列,通过酶切、连接将上述两个基因串连,构建了自杀性转座重组质粒,为进一步构建转双价基因生防菌奠定了基础。

天蚕素AD和BuforinⅡ表达载体的改良和融合蛋白表达条件优化

为提高重组大肠杆菌表达天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白的表达效率,研究表达菌株、质粒稳定性和诱导条件对天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE分析目的蛋白占全菌总蛋白的含量,确定大肠杆菌BER2566为表达菌株;利用基因工程技术,构建卡那霉素抗性的表达质粒pET(K)-Trx-CADBuforinII,提高质粒稳定性和蛋白表达效率;优化了IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等诱导条件,确定菌体浓度为OD600=0.8时,IPTG浓度为0.8mmol·L-1,诱导时间为5h,目的蛋白表达量最高,可达到全菌总蛋白含量的50%以上。

通过染色体整合几丁质酶基因提高伯克氏菌生防能力

为了提高伯克氏菌Burkholderia vietnamiensis的生防能力,通过Tn5转座子介导,将其携带的来自枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的几丁质酶基因整合到野生伯克氏菌B418染色体DNA上,获得工程菌株B418-37。对获得的转化子进行Southern杂交和几丁质酶活性检测,结果证实几丁质酶编码基因已整合到伯克氏菌B418-37染色体DNA上并能表达几丁质酶。生物学特性研究发现几丁质酶基因整合到伯克氏菌染色体中,没有影响野生菌的解磷、解钾、固氮及其在植物根际的定殖能力。平板抑菌试验和温室盆栽试验显示,与野生型相比,该工程菌株对多种病原真菌的抑菌效果增强,说明几丁质酶在植物病害的防治中具有重要作用。上述结果说明通过染色体整合几丁质酶基因是获得多功能生防工程菌的有效途径之一。

几种杀虫剂对保护地烟粉虱的田间防效试验

进行了几种杀虫剂防治保护地烟粉虱的田间防效试验。试验结果表明,24%噻嗪酮.啶虫脒微乳剂、6%啶虫脒.联苯菊酯微乳剂、3%啶虫脒微乳剂高效、低毒、安全,是当前防治烟粉虱的首选药剂;施用时于早晨露水干后喷雾,重点喷施叶片的背面,药剂使用时需要连续喷药3～4次。

海蜇ACE抑制肽水解用酶的筛选

采用肽含量、ACE抑制率和肽的比例等多个指标对六种蛋白酶的水解效果进行评价筛选海蜇ACE抑制肽的酶法制备用酶。试验结果表明,不同的蛋白酶对海蜇的水解效果不同,综合考虑三项指标。