海参共附生微生物HS-1 Epicoccum spp.次级代谢产物的研究

目的:通过海参共附生微生物的研究获得活性次级代谢产物。方法:本研究通过对黄海海域海参的共生微生物分离、纯化,并进行分子鉴定,确定该菌株的属。利用GYP培养基对该菌进行发酵培养,通过现代波谱手段,确定了次级代谢产物的结构。结果:确定该菌株为附球孢菌。确定4个代谢产物,分别为:3,4-二氢-8-甲氧基-3,5-二甲基-1H-2-苯吡喃(1)、3,4-二氢-8-羟基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮(2)、过氧麦角甾醇(3)和丁二酸(4)。结论:附球孢菌首次从海参中得到。本文为深入研究开发海参资源提供了新思路。

生物炭固定化石油降解菌剂的制备

以前期筛选的高效石油烃降解菌多食鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium multivorum）为目标微生物,选择多种生物质材料（松针、玉米芯、草）为前体物制备生物炭载体,采用吸附法制备固定化石油降解菌剂,探索获得较高除油效果菌剂的制备条件。结果表明：以松针及其生物炭为载体的菌剂除油效果优于玉米芯系列和草系列;以生物炭为载体的菌剂除油效果优于以其前体物为载体的菌剂。由于玉米芯易在当地大量低成本获得,考察了玉米芯炭固定化菌剂的制备条件：300℃热解玉米芯4 h,以粒径〉200目的玉米芯炭为载体,投加量为1 g/100 m L的固定化培养基,菌接种量为5%,固定时间为18 h,转速160 r/min,温度30℃,离心后沉淀用无菌生理盐水清洗2次获得菌剂。该菌剂对5 g/L原油培养基的周除油率是47.6%～50.7%;菌剂含降解菌5.8×109CFU/g,吸附法对菌的固定效率为80.7%,降解菌主要附着区域为玉米芯炭表面及孔。该菌剂可为进一步修复油田石油污染土壤提供技术支撑。

产碱性纤维素酶芽孢杆菌ZA-05的分离及功能基因克隆

从造纸污泥中分离到一株芽孢杆菌ZA-05,该菌可产生内切β-1,4-葡聚糖酶酶活性,且在碱性条件下酶活较高,经生理生化和分子生物学鉴定,该菌株为淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);根据GenBank登录的内切-β-1,4-葡聚糖酶基因(DQ782954.1,M28332.1,AY859492.1)的同源性序列,利用PCR方法克隆到该菌株的功能基因,并对其进行测序。测序结果显示其全长为1 500 bp,推测其含499个氨基酸。

玉米19 kD醇溶蛋白启动子克隆与植物表达载体构建

从玉米自交系9801基因组DNA中克隆了玉米19 kD醇溶蛋白基因(ze19)启动子,将其连接到pMD18-T载体上。测序结果表明该序列与已报道序列同源性为94%,包含TATAbox、CAATbox启动子基本元件以及GCN4、skn-1、prolamin box、-300 element等参与调节玉米醇溶蛋白表达及活性的顺式元件。将克隆的ze19启动子取代质粒pBI121中的35 S启动子,成功构建了由ze19启动子驱动gus报告基因的植物表达载体pBIze19。利用土壤杆菌介导法将构建好的重组质粒pBIze19转入烟草中,为进一步研究该启动子组织特异性表达奠定了基础。

玉米醇溶蛋白ze19基因启动子克隆与功能分析

从玉米自交系9801基因组DNA中克隆玉米醇溶蛋白基因ze19启动子,将其克隆到pMD18-T载体上。该序列与发表序列同源性为94%,包括TATAbox、CAATbox启动子基本元件以及多种参与调节醇溶蛋白表达的顺式元件。将ze19启动子取代质粒PBI121-gus中的CaMV35S启动子,构建由ze19启动子驱动GUS的植物表达载体pBIze19-gus,利用土壤杆菌介导法将重组载体pBIze19-gus转入烟草中。对转基因烟草植株GUS活性的定性与定量分析结果表明,ze19启动子驱动GUS基因在转基因烟草种子中表达活性最高,在叶片中活性很弱,在茎中没有活性。所克隆的ze19启动子具有种子特异表达特性,为玉米种子生物反应器的研究提供借鉴。