基于TGF-β2/Smad2信号通路探讨长链非编码RNA NEAT1对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控TGF-β2/Smad2信号通路对膀胱癌(BC)T24细胞上皮间质转化(EMT)和生物学行为的影响及潜在分子机制。方法:收集2015年3月~2018年5月于我院接受手术治疗的128例BC患者癌组织及距离癌组织超过2cm处的正常组织,qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在BC及相应的正常组织、不同BC细胞系中的表达情况;以T24为空白对照,构建lncRNA NEAT1沉默细胞系T24-siNEAT1及阴性对照T24-NC,分别采用MTT、平板克隆实验及Transwell实验检测lncRNA NEAT1对T24细胞增殖和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin、Vimentin表达;生物信息学网站starBase预测可与lncRNA NEAT1互补结合的miRNA,根据Targetscan网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;Western blot检测TGF-β2/Smad2信号通路蛋白和E-cadherin、Vimentin表达情况。结果:qRT-PCR结果显示,BC组织和癌细胞中lncRNA NEAT1表达水平明显高于正常组织和正常细胞(P<0.05);与空白对照组和T24-NC组相比,T24-siNEAT1组细胞OD 492值明显下降,细胞克隆数、通过matrigel基质胶的数量明显减少,E-cadherin表达明显升高、Vimentin明显降低(P<0.05);starBase网站预测结果显示,lncRNA NEAT1可与miR-200a-3p互补结合,Targetscan网站预测分析显示,miR-200a-3p与TGF-β2存在靶向结合位点;qRT-PCR和Western blot结果显示T24-siNEAT1组中miR-200a-3p、TGF-β2及p-Smad2表达明显低于空白对照组与T24-NC阴性对照组(P<0.05);空白对照组和T24-NC组中上述指标的表达量无统计学意义(P>0.05)。结论:lncRNA NEAT1在BC组织及细胞中高表达,高表达lncRNA NEAT1可能通过上调miR-200a-3p水平强化TGF-β2/Smad2信号通路,促进EMT过程,影响BC进展。