食管癌患者免疫联合放射治疗症状群与生活质量相关性探讨

目的评估食管癌患者接受放射治疗(放疗)联合免疫治疗期间的症状,探索患者症状群及与生活质量之间的相关性。方法采用横断面调查,便利抽样法选取山东省肿瘤医院2021-06-01-2021-12-31接受放疗联合免疫治疗的120例食管癌患者作为研究对象。参考安德森症状评估表(MDASI)评估患者的症状,针对胃肠症状患者,在MDASI基础上补充特异性模块,采取中文版安德森症状评估量表胃肠道版(MDASI-GI)评估患者症状严重程度,应用癌症治疗功能评价系统量表(FACT)中的一般量表FACT-G评估患者生活质量。采用探索性因子分析患者的症状群,logistic回归和Pearson相关分析症状群与生活质量的相关性。结果120例患者中,出现频次最高的3种症状为疼痛(50.00%)、食欲减退(47.50%)和味觉障碍(47.50%),症状得分最高的3种症状为食欲减退(1.34±1.81)分、呕吐(0.95±1.42)分和健忘(0.93±1.63)分。症状相关性困扰中,走路相关性困扰发生频次(43.33%)最高;工作受影响的严重程度最高,得分为(1.19±1.87)分。汇总分析后提取出4个症状群,分别为胃肠道相关症状群(特征值5.424,解释变异量38.746%)、治疗不良反应症状群(特征值2.548,解释变异量18.197%)、神经-心理症状群(特征值1.843,解释变异量13.161%)、疲乏-睡眠症状群(特征值1.652,解释变异量11.799%),累计解释变异量为81.903%。症状群与患者的总体生活质量、身体健康、情绪健康、功能健康呈负相关,与社会/家庭幸福感无相关性。进一步分析,与患者生活质量相关性最强的是胃肠道相关症状群,其次为治疗不良反应症状群,神经-心理症状群和疲乏-睡眠症状群同样对患者的生活质量呈现出较强的相关性。结论食管癌患者在放疗联合免疫治疗中症状多样,这些症状既相互独立又互相关联,即症状群越显著,患者生活质量越差。

肺腺癌患者预后风险免疫信号识别TCGA数据资料分析

目的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)在肿瘤的发生、发展乃至转移过程中起着不可或缺的作用,影响肿瘤的治疗效果。因此,必须寻找一系列与免疫相关的基因来评估TME的免疫状态,并具有判断肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)预后的能力。由于目前已有高通量表达数据,本研究利用全球基因表达数据分析免疫相关基因表达与LUAD患者临床结局的关系。方法使用来自癌症基因组图谱(The cancer genomic maps,TCGA)的RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)数据和微阵列数据研究由LUAD免疫相关基因组成的免疫相关风险信号。结果单变量Cox回归分析结果显示,24个与生存相关转录因子(trans-acting factor,TFs)表达与10个免疫相关基因存在关联。在10个免疫相关基因中,有IGKV4-1、BTK、NRATC1、IL3RA、ADRB2和VIPR1 6个基因与高总生存率(overall survival,OS)相关,FUR2N、FIRL1、GP1和BIRC5 4个基因与低OS相关。总生存分析结果显示,高危组比低危组存在更差的预后,P<0.01。通过受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线发现,免疫相关基因模型可以作为LUAD发病的早期预测因子,ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.711。Kaplan-Meier plotter结果发现,与临床因素相关免疫基因ANGPTL4 (P=0.001)、CX3CR1(P<0.001)、INHA(P<0.001)、S100A16(P<0.001)和VIPR1(P=0.001)的表达在LUAD队列中与OS有关联。结论 LUAD组织存在免疫相关基因表达,免疫相关基因对预后有正/负相关影响,需要进一步甄别研究。

应用CRISPR/Cas9技术敲除NFE2L2对食管鳞癌KYSE150细胞增殖的影响

目的采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建NFE2L2缺失的食管鳞癌KYSE150(KYSE150 NFE2L2-KO)细胞株,观察NFE2L2敲除对食管鳞癌KYSE150细胞增殖的影响。方法应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组NFE2L2_KO_three_gRNA_Cas9表达载体,将表达载体经转化、扩增、质粒抽提、验证和测序。采用Lipofectamine 2000将重组NFE2L2_KO_three_gRNA_Cas9表达载体转入食管鳞癌KYSE150细胞,经Sanger测序验证转染效率后,培养并筛选单克隆细胞株,获得NFE2L2纯合缺失的食管鳞癌KYSE150单克隆细胞株,并通过Sanger测序、逆转录定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法实验验证。将NFE2L2缺失的KYSE150单克隆细胞株设为KYSE150 NFE2L2-KO组,KYSE150单克隆细胞株设为KYSE150组。采用细胞计数试剂法(CCK-8)和克隆形成实验观察NFE2L2敲除对食管鳞癌KYSE150细胞增殖的影响。结果Sanger测序验证结果表明NFE2L2_KO_three_gRNA_Cas9表达载体构建成功以及NFE2L2基因第二外显子上37 kb碱基纯合缺失KYSE150单克隆细胞株成功获得。KYSE150 NFE2L2-KO组,蛋白印迹法未检测到NFE2L2蛋白表达。KYSE150 NFE2L2-KO组中NFE2L2 mRNA表达水平为0.36±0.03,低于KYSE150组的1.04±0.12,t=10.660,P<0.001;CCK-8实验结果显示,48 h时KYSE150 NFE2L2-KO组的细胞增殖活力为4.38±0.31,低于KYSE150组的5.62±0.27,t=4.290,P=0.013;72 h时KYSE150 NFE2L2-KO组的细胞增殖活力为8.77±0.51,低于KYSE150组的12.39±1.50,t=3.231,P=0.032;EdU掺入实验结果显示,KYSE150 NFE2L2-KO组细胞增殖能力为(39.96±2.53)%,低于KYSE150组的(55.60±3.60)%,t=5.019,P=0.007。KYSE150 NFE2L2-KO组细胞克隆形成率为(38.26±2.56)%,低于KYSE150组的(68.93±1.76)%,t=13.950,P<0.001。结论应用CRISPR/Cas9基因编辑技术可成功获得NFE2L2敲除的食管鳞癌KYSE150单克隆细胞系,敲除NFE2L2可抑制KYSE150细胞增殖。