多药耐药相关蛋白基因和P-糖蛋白在恶性淋巴瘤中的表达与意义

目的：探讨多药耐药相关蛋白 (multidrug resistance- associated protein， MRP)基因及 P-糖蛋白 (P- glycoprotein, P- gp)在恶性淋巴瘤 (malignant lymphomas， ML)中的表达与化疗疗效、临床耐药的关系。方法：应用半定量逆转录多聚酶链反应 (reverse transcriptase polymerase chain reaction， RT- PCR)和流式细胞术（ flow cytometry, FCM）检测了 46例 ML患者 MRP和 P- gp的表达水平。结果：复发患者 P- gp表达水平与阳性率均高于初治患者（ P< 0.001） ,而 MRP基因表达水平与阳性率在复发与初治患者间无显著性差异 (P >0.05)。 P- gp表达阳性患者的化疗有效率 (26.67％ )明显低于 P- gp表达阴性患者 (83.87％ )(P< 0.001)，而 MRP基因表达阳性患者与阴性患者的化疗有效率无差异 (P >0.05)。相关分析显示， MRP基因表达与 P- gp表达之间无明显相关性（ r=0.0818,P >0.05）。结论： P- gp表达与恶性淋巴瘤多药耐药相关，是其临床耐药的主要机制，而 MRP基因表达与化疗疗效未见相关。

RNA干扰HIF-1α增强人肺腺癌SPCA-1细胞放射敏感性的研究

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子1(HIF-1)增强人肺腺癌SPCA-1细胞的放射敏感性。方法构建干扰HIF-1α质粒pSUPER-HIF-1α,采用荧光定量RT-PCR、Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α的变化,用成克隆实验观察乏氧时RNA干扰HIF-1α对放射的增敏作用。结果在常氧和乏氧的状态下,RNA干扰HIF-1α引起mRNA的表达水平分别下降64%和76%;在乏氧的状态下,蛋白的表达下降。转染pSUPER-HIF-1α后的细胞存活曲线的D0值为2.5 Gy,转染空白质粒细胞和空白对照细胞的D0值分别为5.0 Gy和5.1 Gy,增敏比为2.1。结论RNA干扰HIF-1α可以增加SPCA-1细胞对放射的敏感性。

下调DNA拓扑异构酶Ⅰ基因提高小细胞肺癌细胞株对足叶乙甙的敏感性

目的检测DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopⅠ)在小细胞肺癌细胞株中的表达与TopⅡ抑制剂(足叶乙甙)敏感性的关系,为临床个体化治疗提供依据。方法Western-blot检测TopⅠ在小细胞肺癌细胞株H446蛋白水平的表达;应用人工合成并荧光标记的siRNA通过脂质体瞬时转染H446细胞,流式细胞仪检测转染效率,分别应用定量RT-PCR及Western-blot检测各干扰序列在mRNA及蛋白水平的干扰效果,筛选最佳干扰序列;并对转染后的细胞株进行足叶乙甙(VP16)药物敏感性试验,观察TopⅠ的表达水平与VP16敏感性的关系。结果TopⅠ基因在H446中有较高表达。siRNA干扰效果满意,流式细胞仪显示转染效率可达86.67%左右,RT-PCR显示干扰序列在mRNA水平干扰效率可达(96.33±1.87)%,Western-blot显示在蛋白水平也有明显的干扰效果。MTT结果显示,相同浓度的VP16对TopⅠ下调后H446细胞的抑制率明显高于转染前的H446细胞(P<0.01),IC50值分别为66.94μmol/L(1.97×PPC)及338.79μmol/L(9.97×PPC)。结论脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TopⅠ表达;TopⅠ表达下调明显提高了对VP16的敏感性,为临床个体化治疗提供实验依据。

RNA干扰下调拓扑异构酶Ⅰ在小细胞肺癌细胞株的表达及其与拓扑替康敏感性的关系

目的检测拓扑异构酶Ⅰ（TopⅠ）在小细胞肺癌（SCLC）细胞株中的表达，并探讨其表达水平对拓扑替康（TPT）敏感性的影响。方法采用Western blot检测TopⅠ在SCLC细胞株H446蛋自水平的表达；应用人工合成并荧光标记的小干扰RNA（siRNA），通过脂质体瞬时转染H446细胞，流式细胞仪检测转染效率；应用定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测各干扰序列对TopⅠ在mRNA及蛋白水平的干扰效果，筛选最佳干扰序列；对转染后的细胞株进行药物敏感性实验，观察TopⅠ的表达对TPT敏感性的影响。结果TopⅠ基因在H446中有较高表达；siRNA干扰效果满意，转染效率可达86．7％左右；siRNA oligo TopⅠ-892、siRNA oligo TopⅠ-1152、siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397等4个于扰序列均抑制H446细胞TopⅠ mRNA的表达，抑制率分别为（95．7±1．6）％、（90．8±1．6）％、（96．1±2．7）％和（96．3±1．8）％。序列siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397干扰后，H446细胞TopⅠ蛋白表达明显降低。药物敏感性实验结果显示，相同浓度的TPT对实验组H446细胞的抑制率明显低于转染前及阴性对照的H446细胞（P〈0．01）。结论脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TopⅠ表达，明显降低细胞对TPT的敏感性。