靶向Slug基因的腺相关腺病毒载体的构建及其抑制胃癌细胞BGC-823生长的体外研究

目的构建携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA载体。方法构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,扩增和回收EGFP-Slug-siRNA片段;酶切pSNAV2.0-lacz-oα载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定。制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定。将BGC-823转染rAAV-EGFP-Slug-siRNA和pSNAV2.0-EGFP;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验检测血管生成,MTT比色法检测细胞存活率。结果质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确。将构建成功的载体质粒与HSV1-rc/UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功。Slug-siRNA有效抑制BGC-823细胞内Slug表达后,肿瘤血管生成被抑制,细胞存活率明显降低。结论成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体。干扰Slug可抑制肿瘤血管生成,抑制胃癌细胞BGC-823的生长增殖。