靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究

目的探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株Twist基因的表达、促进凋亡并逆转其阿霉素耐药的可行性。方法体外构建Twist小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/ADM细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Twist mRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测Twist蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果 Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA的表达与其他两组相比明显减弱,Twist蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.01);阿霉素敏感性比正常对照组提高了约2.5倍;流式细胞仪显示阿霉素作用24 h后,特异性转染组细胞周期分布发生明显改变,G_0/G_1期细胞比例增多,而S期细胞比例减少,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对TWIST合成的siRNA能够有效地抑制TWIST mRNA和蛋白的表达,促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对阿霉素的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。