^(131)I-Herceptin联合高能X线对HER2高表达人乳腺癌细胞的协同杀伤及机制研究

目的研究131I-Herceptin联合高能X线对HER2高表达人乳腺癌SK-BR-3细胞的协同杀伤及机制。方法运用免疫组化法、荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测SK-BR-3细胞的人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)蛋白表达和基因扩增,采用Iodogen法制备131I-Herceptin,MTT法筛选131I-Herceptin杀伤SK-BR-3细胞的IC15浓度。根据是否应用131I-Herceptin分为对照组及加药组,分别给予高能X线(0、2、4、6 Gy),以克隆形成试验分析协同杀伤效应;将细胞分为空白对照组、药物组(131I-Herceptin)、高能X线组(2Gy)、联合组(131I-Herceptin+2Gy),以A0/EB法检测细胞凋亡率及死亡率,以流式细胞仪检测各组细胞周期。结果 SK-BR-3细胞为HER2高表达细胞。131I-Herceptin的标记率为86.8%,放射化学纯度为93.9%,放射性比活度为868.3μci/mg。131I-Herceptin的IC15为15.625μci/m L。发现131I-Herceptin(F=628.008,P<0.05)及高能X线(F=964.970,P<0.05)对SK-BR-3细胞均有显著的杀伤作用,可明显降低细胞的SF值,且2者具有交互作用(F=113.046,P<0.05),即2者协同降低SF值。空白组、外照射组、药物组及联合组细胞凋亡率与死亡率比较差异均有统计学意义(F=103.324,F=13.330,均P<0.05),且两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);经外照射及131I-Herceptin联合作用后,细胞周期均发生明显改变,由G1期向G2期和S期转移。结论131I-Herceptin联合高能X线对HER2高表达人乳腺癌SK-BR-3细胞具有协同杀伤作用。

阳离子磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸转染大鼠心肌成纤维细胞的研究

目的:探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体的反义寡核苷酸(AS-ODN)对离体培养的大鼠心肌成纤维细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法:MTT法检测MPC与心肌成纤维细胞的细胞相容性;应用激光扫描共聚焦显微镜(CLAM)检测复合物在细胞内的定位,流式细胞仪(FCM)检测转染效率及荧光强度,Western blot检测AT1受体蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:MPC浓度>40μg/mL时才出现明显细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围,少量分布于细胞核内。流式结果显示转染效率及荧光强度随N/P比增加而明显增大。Western blot结果显示,转染复合物后各组细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白的表达也相应减少。结论:MPC30-DEA70在安全浓度范围内就能够携带AT1R-ASODN以较高的转染率进入离体培养的大鼠心肌成纤维细胞,并成功靶向抑制AT1R及Ⅰ型胶原蛋白的表达。从而可以推断阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载反义寡核苷酸(AS-ODN),靶向性抑制基因的表达,为新型非病毒性基因载体的研究提供了一定的理论依据。