氧化应激在动脉粥样硬化发生发展中作用的研究新进展

心脑血管疾病占西方发达国家发病率和死亡率的首位，近年来其发病率在发展中国家也不断增加。动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）作为心脑血管疾病的主要病理基础，其发生发展与氧化应激有着密切关系。正常情况下体内氧化与抗氧化处于动态平衡，过氧化氢酶（catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH．Px）等内源性抗氧化酶可清除活性氧，维持细胞氧化还原自稳态。然而，当活性氧生成过多、

磷脂转运蛋白与脂蛋白代谢和动脉粥样硬化

动脉粥样硬化性心脑血管疾病是困扰人类健康的首要慢性炎症性疾病。而脂蛋白代谢异常是公认的动脉粥样硬化主要危险因素。2001年哥伦比亚大学的研究人员发现磷脂转运蛋白可以通过影响脂蛋白代谢进而改变动脉粥样硬化的易感性,从而开启了长达十多年的磷脂转运蛋白热点研究。从动物实验到人群调查使得人们对磷脂转运蛋白在脂蛋白代谢和动脉粥样硬化中作用的认识不断深入。

内皮祖细胞在动脉粥样硬化发生发展不同阶段中的作用

动脉内皮损伤是动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）发生的首要环节（1）。而内皮祖细胞（Endothe-lial progenitor cells,EPCs）来源于骨髓,可增殖分化成为血管内皮,但尚未表达成熟的血管内皮表型。

载脂蛋白AI模拟肽D4F抑制动脉粥样硬化模型鼠斑块内细胞凋亡和内质网应激

目的研究载脂蛋白AI（ApoAI）模拟肽D4F对载脂蛋白E基因缺陷（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡影响的内质网应激机制。方法24只8周龄雄性ApoE-/-小鼠，饲喂高脂高胆固醇饮食，于2周后随机分为三纽（n=8），分别腹腔注射生理盐水（模型组）、紊乱模拟肽sD4F[1mg／（kg·d），sD4F组]和ApoAI模拟肽D4F[1mg／（kg·d），D4F组]。同周龄雄性C57BL／6J小鼠普通饮食且腹腔注射生理盐水作为正常对照。6周后处死，采用ELISA检测血清氧化型低密度脂蛋白（OX．LDL）水平，并切取小鼠主动脉根部制备冰冻切片，采用HE染色和油红0染色检测动脉粥样硬化病变及粥样斑块脂质含量，分别采用Masson染色和TUNEL法检测王证块内胶原纤维含量和细胞凋亡情况，以免疫荧光化学法检测斑块内巨噬细胞标志分子MAMO．2、内质网应激标志分子CHOP和GRP78水平，分别采用Westernblot和实时荧光定量PCR检测主动脉CHOP、

巨噬细胞内质网应激途径在动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化（atherosclerosis，As）是严重危害人类健康的常见病与多发病，易损斑块形成与破裂是造成As病变晚期临床急性症状的主要原因，而巨噬细胞泡沫化和凋亡是导致斑块形成和破裂的重要因素。干预巨噬细胞泡沫化和凋亡可能对阻止As进展、降低心脑血管病事件发生率具有重要意义。

高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的新机制：调节造血干/祖细胞的功能

高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)血浆水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心血管疾病呈负相关,成为抗AS的重要靶点和热点.然而,近年来多个临床试验未能证明升高血浆HDL的水平对心血管的保护作用,使得人们开始重新审视HDL抗AS功能生物学特性的复杂性.近5年来的研究发现,HDL可通过对造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的调节发挥抗AS的作用,本文就这一新机制进行综述,期待为HDL迄今尚不完全清楚的复杂心血管保护机制提供研究思路.

泛素-蛋白酶体系统对Aβ生成与代谢调控作用的研究进展

阿尔茨海默症(AD)是中枢神经系统退行性疾病,目前其确切发病机制未明,也无有效的治疗手段。淀粉样蛋白级联假说认为,β淀粉样蛋白(Aβ)是AD形成的关键因素。泛素-蛋白酶体系统(UPS)是胞内主要蛋白质质量控制系统,最近研究发现其可调控Aβ的生成和代谢,进而参与AD的发生。UPS可通过调控泛素化APP、β-分泌酶及γ-分泌酶各成分的代谢参与Aβ生成;同时UPS也是Aβ主要降解途径之一;而Aβ也可抑制UPS系统蛋白酶体活性。本文对此进行了综述。

MG132对SHSY-5Y细胞Aβ代谢的影响及机制研究

目的近年研究发现泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasomes system,UPS）在阿尔茨海默症（Alzhei-mer’sdisease,AD）发病中起重要作用,但其详细机制还未明确.本课题组通过培养人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y,观察不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对细胞凋亡及β淀粉样蛋白（βamyloid,Aβ）代谢的影响,以期为阐明UPS在AD中的作用及机制提供依据.方法培养SHSY-5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol·L^-1、5μmol·L^-1、10μmol·L^-1,24后检测各项指标.流式细胞术检测细胞凋亡;Elisa法检测细胞Aβ40、Aβ42水平;Westernblot检测β淀粉样蛋白前体蛋白（APP）,β-分泌酶（BACE1）,γ-分泌酶相关组分早老蛋白1（presenilins1,PS1）、早老蛋白2（presenilins2,PS2）、Nicastrin（NCT）,α-分泌酶（ADAM10）等蛋白表达.结果细胞经MG132处理后,细胞活力下降,明显诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为3697%、462%、505%;经MG132处理后,细胞Aβ42、Aβ40蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显.结论MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而干扰其代谢,说明蛋白酶体活性下降,可能通过促进Aβ的产生进而参与AD发生.

天目琼花化学成分与药理作用研究进展

天目琼花（ Viburnum sargentii）系忍冬科（ Capri-foliaceae）荚蒾属（ Viburnum ）植物，又名鸡树条荚蒾，糯米条［1］，临床应用始载于唐《新修本草》，为落叶灌木，原产中国，发现于浙江天目山地区。天目琼花山野自生，天然分布于内蒙古、河北、辽宁、甘肃、、吉林、山东、湖北、四川及黑龙江等地区，国外分布于朝鲜、日本、俄罗斯，其天然资源极为丰富［2］。天目琼花耐寒耐旱，根系发达，易移栽成活。天目琼花的树态清秀，叶形美丽，花开似雪，果赤如丹。宜在建筑物四周、草坪边缘配植，也可在道路边、假山旁孤植、丛植或片植。天目琼花的复伞形花序很特别，边花（周围一圈的花）白色很大，非常漂亮但却不能结实，心花（中央的小花）貌不惊人却能结出累累红果，两种类型的花使其春可观花、秋可观果，在园林中广为应用。天目琼花味甘、苦，性平，入肺、肝、脾、肾四经，在民间作“鸡树条”药用，有通经活络、活血消肿、祛风杀虫之功效［3］。种子可榨油，供制肥皂和润滑油。叶、嫩枝及果实均可入药，叶外用主治疮疖、疥癣、皮肤瘙痒［4］；嫩枝主治风湿性关节炎、腰酸腿痛、跌打损伤［5］；果实有止咳的功用，主治急、慢性气管炎、咳嗽［6］。现代药理研究表明天目琼花能收缩子宫、增强子宫的紧张度，有治疗子宫出血的作用，果实的配剂具有利尿作用。目前，对于天目琼花的研究多侧重于栽培技术，对其药用成分及其药理作用的研究还不深入。

过表达磷脂转运蛋白对小鼠脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量的影响

目的:探讨血浆脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和磷脂转运蛋白(PLTP)的相互作用及机制。方法:检测雄性10周龄PLTP转基因(PLTP-Tg)及野生型(WT)小鼠血浆S1P和脂蛋白上S1P含量,转运实验检测PLTP对S1P的转运作用,免疫印迹检测S1P载体载脂蛋白M(apoM)含量。结果:PLTP-Tg小鼠血浆S1P含量较WT小鼠下降21.1%(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)组分上S1P含量下降约35.1%,而低密度脂蛋白(LDL)组分上S1P比例则增加了127.4%。转运实验表明,在37℃时D-Hanks缓冲液中PLTP能够促进S1P从红细胞转运至重组脂质体。PLTP-Tg小鼠血浆中apoM含量与WT小鼠比较无变化。结论:生理水平PLTP对保持HDL上S1P含量有重要意义,过表达PLTP可显著降低HDL上S1P,同时升高LDL上S1P,其机制可能与PLTP介导S1P转运有关。

氢氧混合气对健康人皮肤血流灌注的影响

目的 测试健康人吸入高浓度氢氧混合气对皮肤循环血流量的影响。方法 应用Moor FLPI-2激光散斑血流实时成像系统,检测12名健康成人志愿者吸入高浓度氢氧混合气(66.7%氢+33.3%氧)前后面部和手部皮肤循环血流量。结果 吸入氢氧混合气半小时后,面部皮肤血流量较吸气前增加9.7%(P<0.05),手背部皮肤血流量较吸气前增加27.1%(P<0.01),对指尖等部位血流量增加作用尤其明显。结论 短时吸入氢氧混合气能显著增加健康人面部和手部皮肤血流灌注量。

MG132对SH-SY5Y细胞Aβ水平的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH-SY5Y细胞凋亡及调节β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)生成的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养SH-SY5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,24 h后检测各项指标。MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β-分泌酶(BACE1)、早老蛋白1(presenilins 1,PS1)、早老蛋白2(presenilins 2,PS2)、nicastrin(NCT)和α-分泌酶(ADAM10)蛋白表达。结果:经MG132处理后,细胞活力明显下降,诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为36.97%、46.20%、50.50%;细胞Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显。结论:MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生,说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。

酶育牛黄对血脂异常小鼠高密度脂蛋白功能的改善作用

目的探讨酶育牛黄(CBCG)对高脂食物诱导的血脂异常小鼠高密度脂蛋白(HDL)功能的影响。方法7~8周龄雄性C57BL/6J小鼠41只,随机分三组:对照组(溶媒组,n=14)、CBCG高剂量组[2.25 g/(kg·d),n=14]、CBCG中剂量组[0.75 g/(kg·d),n=13]。高脂(15.8%)高胆固醇(1.25%)饮食,自由饮水。连续灌胃12周后,禁食12 h,麻醉,小鼠内眦静脉取血,通过超速离心法获得低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。通过胆固醇逆向转运(RCT)功能实验检测HDL对巨噬细胞源性泡沫细胞的胆固醇溢出的影响;通过HDL对Cu2+诱导的LDL氧化程度的保护作用,检测HDL的抗氧化功能;通过MTT比色法检测内皮细胞存活率,检测HDL抗内皮细胞凋亡功能;通过单核细胞黏附实验检测HDL抗炎功能。另外,40只7~8周龄雄性Apo E-/-小鼠随机分为四组:对照组(溶媒组,n=10)、CBCG低、中及高剂量组[0.25 g/(kg·d)、0.75 g/(kg·d)、2.25 g/(kg·d),n=10]。给予高脂(15.8%)高胆固醇(1.25%)饮食,自由饮水。连续灌胃8周末,禁食12 h,麻醉,小鼠内眦静脉取血,取材。ELISA检测血浆炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,分光光度计法检测血浆丙二醛(MDA)和对氧磷酶1(PON-1)水平;ELISA测定CBCG血浆活性成分胆红素和牛磺酸水平;酶法测定血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。结果 CBCG可显著改善C57BL/6J小鼠血浆HDL功能,主要表现在促进巨噬细胞内3H标记胆固醇的溢出;抑制Cu2+诱导的LDL氧化作用;抑制单核细胞黏附作用和改善内皮细胞保护作用。另外,血浆IL-6和TNF-α水平显著降低;血浆氧化生物指标MDA显著降低,PON-1显著升高;CBCG高剂量组血浆胆红素水平显著高于对照组,血浆牛磺酸水平呈升高趋势,但差异无统计学意义。CBCG治疗组TC和非高密度脂蛋白胆固醇(non-HDLC)水平变化无统计学意义,HDLC水平显著升高。结论 CBCG能改善C57BL/6J小鼠HDL功能,包括促进胆固醇溢出、抗氧化、抗凋亡、抗黏附和内皮保护作用。这种对HDL功能的改善作用可能与CBCG的血浆抗氧化作用有关。

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除对小鼠血清高密度脂蛋白3功能的影响

背景和目的已有报道显示，神经鞘磷脂合成酶2基因缺失（sphingomyelinsynthase2knockout，SMS2。一）有抗动脉粥样硬化及抗炎作用。本文以SMS2I／一小鼠为研究对象，旨在探讨神经鞘磷脂（sphingomyelin，sM）代谢与血清高密度脂蛋白（high—den—sitylipoprotein，HDL）抗氧化、抗炎症、保护内皮能力之间的关系。方法雄性28周龄SMS2-/-小鼠16只为实验组，同性别同周龄C57BL／6J（wild—type，wT）小鼠16只为对照组。禁食12h后眼球取血，酶学方法检测血脂，超速离心法提取血清HDL3，测定HDl3抗铜离子诱导脂蛋白氧化的能力（以生成TBARS含量表示）、

ApoAI模拟肽D4F通过下调内质网应激抑制OX—LDL介导的CD36上调作用

目的研究载脂蛋白AI（ApoAI）模拟肽D4F是否可通过内质网应激反应途径调节氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlow—densitylipoprotein，OX-LDL）介导的清道夫受体CD36上调作用，以探讨D4F对巨噬细胞泡沫化抑制作用的分子机制。

载脂蛋白E缺陷增加小鼠血浆鞘氨醇-1-磷酸含量

目的循环中鞘磷脂信号分子鞘氨醇．1．磷酸（SIP）主要富集于高密度脂蛋白（HDL）颗粒并对HDL的内皮保护功能产生重要影响。动脉粥样硬化性疾病时，血浆S1P含量在极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）等非HDL（non—HDL）上增高，其机制未明。本研究以C57BL／6小鼠（WT）和相同遗传背景下能自发动脉粥样硬化的载脂蛋白E缺陷（ApoE-）小鼠为模型，检测血浆S1P含量，并尝试分析其发生改变的机制。方法选取20周龄雄性WT和ApoE-/-小鼠继续普通饲料喂养12周后，超速离心法分离non．HDL、HDL与乏脂血浆（LDP），采用液相一串联质谱（LC-MS／MS）方法对血浆、脂蛋白和LDP进行SIP定量。酶学法检测血脂水平，Westernblot检测血浆、肝脏和肾脏SIP特异性载体载脂蛋白M（ApoM）的表达。

重组HDL—S1P颗粒对巨噬细胞胆固醇转运子表达的影响

目的循环中鞘磷脂信号分子鞘氨醇-1-磷酸（S1P）主要富集于高密度脂蛋白（HDL）颗粒并对HDL的内皮保护功能产生重要影响。重组HDL颗粒是研究与治疗动脉粥样硬化性疾病的重要手段，其成分和含量决定其功能。以载脂蛋白AI（ApoAl）和S1P为主要成分的重组HDL对内皮细胞保护功能已有报道。但对胆固醇流出机制作用如何尚未见报道，本研究采用含有不同比例S1P的重组HDL，观察其对巨噬细胞胆固醇流出重要的转运子的作用。方法将含有重组ApoAI、合成磷脂（POPC）和不同含量的S1P混匀，氮气吹干后通过胆酸钠透析法得到重组HDL．S1P颗粒。制备得到的5种重组HDL颗粒内成分最终摩尔浓度比为POPC：S1P：ApoAI=100／0／0、99／0／1、94／6／1、88／12／1、76／24／1。非变性条件下凝胶电泳检测重组HDL颗粒大小以判断效果。透析后于72h内用于干预巨噬细胞系RAW264．7，观察其胆固醇转运子的表达变化。结果给予重组HDL分别干预0、6、12及24h后，ATP结合盒转运子A1（ABCAl）、G1（ABCGl）和清道夫受体BI（sR．BI）mRNA表达无明显变化，Westernblot结果进一步证实各组间ABCAl、ABCGl和sR-BI表达无明显差异。结论含有不同S1P比例的重组HDL对RAW264．7的胆固醇转运子ABCAl、ABCGl和SR．BI表达无明显作用。

磷脂转运蛋白基因缺陷对50周龄小鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的阿尔茨海默病（AD）是一种中枢神经系统退行性疾病，其确切的发病机制不明。本研究探讨了磷脂转运蛋白基因缺陷（PLTP-／-）后小鼠学习记忆能力的改变及其可能的机制。方法选取50周龄的PLTP-／-及具有相同遗传背景的C57BL／6J小鼠，通过水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力，ELISA检测皮质及海马Ap40、A1342水平；刚果红及银染色检测p淀粉样蛋白的沉积及老年斑；Westernblot检测皮质及海马B淀粉样蛋白前体蛋白（APP）、β-分泌酶（BACEl）、早老素蛋白（Ps）的表达；荧光法检测皮质和海马BACEI活性。

磷脂转运蛋白缺乏降低小鼠血浆及高密度脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量

目的循环中鞘磷脂信号分子鞘氨醇-1-磷酸（s1P）主要富集于高密度脂蛋白（HDL）颗粒并对HDL功能产生重要影响。HDL上S1P来自何处并通过何种途径富集于HDL上对分析HDL功能具有重要意义。磷脂转运蛋白（PLTP）通过介导磷脂转运引起HDL重构及功能改变的分子机制很可能与S1P的转运有关。本研究采用液相-串联质谱（LC-Ms／MS）检测C57BL／6小鼠（WT）和相同遗传背景下PIJTP缺陷（PLTP-/-）小鼠脂蛋白上的S1P含量，分析PI胛对血浆S1P分布的影响，并通过体外转运实验分析PLTP介导S1P在红细胞与脂蛋白之间的转运作用。方法选用普通饲料喂养下的wT和PLTP-/-小鼠，收集血浆并采用超速离心法分离脂蛋白，抽提脂质，采用LC—Ms／MS方法进行S1P定量。

南蛇藤及其活性成分促胆固醇逆转运的作用机制

目的探讨南蛇藤对高脂饮食喂饲小鼠胆固醇逆转运（RCT）的影响，明确南蛇藤促RCT的活性成分及其分子机制。方法8周龄雄性C57BL／6J小鼠随机分为普通饮食对照组、高脂饮食组、南蛇藤用药组[10．0g／（kg·d）]。连续药物干预6周后，每组取6只小鼠腹腔注射经氧化型低密度脂蛋白及’H一胆固醇处理过的小鼠巨噬细胞悬液。分别于12、24及48h取血浆，收集48h小鼠胆汁、肝脏、小肠及24、48h粪便，闪烁计数仪测定上述组织中的放射活性。剩余各组6只小鼠测定血浆总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）和非高密度脂蛋白胆固醇（non．H．DLC）含量。采用RT．PCR分析肝脏RCT相关基因清道夫受体BI（SR—BI）、低密度脂蛋白受体（LDLR）、肝X受体仪（LXRc~）和胆固醇7仅．羟化酶（CYP7A1）、三磷酸腺苷结合转运蛋白G5／G8（ABCG5／G8）的表达，Westemblot检测肝脏中相关基因蛋白的表达。