肿瘤抗原负载的DC-CIK细胞增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性研究

目的观察肿瘤抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后的增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。方法采用液氮反复冻融法制备肝癌细胞HepG2抗原。应用血细胞分离机采集健康供血者单个核细胞,诱导并分离出DC、CIK,用肿瘤抗原冲击DC获得Ag-DC,将CIK分为3组,一组为单纯CIK,二组以DC∶CIK=1∶5比例混合,三组以Ag-DC∶CIK=1∶5比例混合。3组细胞分别记作:CIK组、DC-CIK组和Ag-DC-CIK组。观察3组细胞的增殖能力和细胞表型,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。结果3组细胞随着培养时间的延长增殖速度逐渐增快,在共同培养的第9天、第12天和第15天时Ag-DC-CIK的增殖倍数(61.32±1.72、190.83±3.53、399.09±5.60)均明显高于同时间CIK的增殖倍数(22.47±2.07、55.91±1.81、83.20±2.34)和DC-CIK的增殖倍数(40.26±2.49、125.03±4.16、251.55±3.25),3组间差异有统计学意义(F=185.78,P=0.033;F=297.35,P=0.018;F=455.37,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Ag-DC-CIK对HepG2细胞的杀伤活性在效靶比为5∶1、10∶1和20∶1时分别为31.71%±0.29%、42.43%±1.86%和57.69%±1.11%,均显著高于CIK组(12.11%±1.14%、21.30%±0.52%和30.71%±1.26%)和DC-CIK组(20.06%±0.67%、29.89%±1.37%和39.11%±0.92%),3组间差异有统计学意义(F=159.64,P=0.037;F=199.36,P=0.025;F=302.08,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。CIK、DC-CIK和Ag-DC-CIK 3组细胞培养至第15天,流式细胞仪分析表明3组细胞均表达CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+双阳性细胞,且Ag-DC-CIK组CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+双阳性细胞的含量(88.12%±1.24%、61.35%±2.63%)明显高于CIK组(54.37%±3.08%、18.22%±1.83%)和DC-CIK组(69.80%±1.46%、39.51%±2.17%),3组间差异有统计学意义(F=414.32,P<0.001;F=378.60,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。结论肿瘤抗原负载DC后与CIK共培养获得的Ag-DC-CIK细胞的增殖能力和对肝癌细胞HepG2的杀伤活性显著高于CIK细胞和DC-CIK细胞。