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蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学特性分析
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作者 武雪龙 杨晓慧 +1 位作者 汪俊卿 王瑞明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期28-35,共8页
10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中的主要脂肪酸成分,具有抗菌、抗癌、延缓衰老等多种生理活性,但目前关于10-HDA生物合成的分子机制还不清楚。通过克隆蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶(EC 1.6.2.4,NADPH-cytochrome P450 reductase,CP... 10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中的主要脂肪酸成分,具有抗菌、抗癌、延缓衰老等多种生理活性,但目前关于10-HDA生物合成的分子机制还不清楚。通过克隆蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶(EC 1.6.2.4,NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR),在大肠杆菌中异源表达,并对其酶学特性进行分析。结果表明重组菌经IPTG诱导后表达蛋白的分子量与预期一致,为86.29 kDa,Ni-NTA亲和纯化后测得其比活性为77.33(EU of CPR)/μg。酶学性质分析结果表明蜜蜂CPR酶最适温度与pH分别为40℃和8.0,并对一些金属离子及有机溶剂具有不同程度的耐受性。其对底物细胞色素C的动力学参数Km和kcat分别为76μM和268/min。以上研究为探究CPR在10-HDA生物合成途径中的功能奠定理论基础。 展开更多
关键词 NADPH-细胞色素P450还原酶 大肠杆菌 异源表达 酶学特性
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