高等医学院校线上教学调查与分析

目的探讨高等医学院校线上教学的现状及存在的问题,为应对新冠肺炎疫情等突发事件及深化教学改革提供依据。方法采用自制电子调查问卷,利用问卷星平台对山东省多所医学院校共计7 000余名医学生进行网络问卷调查,并对问卷进行分析。结果大部分学生对疫情下的线上教学资源和教学模式表示满意,以各校教师自行录制的SPOC视频资源为基础的教学方式取得的教学效果相对好于以直播和MOOC为基础的教学方式,但是总的教学效果不如传统课堂教学,其原因可能与教师准备不充分,学生压力过大、困难多及网络拥堵、卡顿等因素有关。结论各高等医学院校有必要从转变教学观念和提升教学能力、优化线上教学资源和教学实施方案、培养学生综合素质和能力等方面深化医学院校教学改革。

氢气生物医学效应的发现、研究与应用

氢气可通过抗炎、抗氧化、抗凋亡、调节能量代谢和生物酶活性等作用机制,在心血管、脑神经、肿瘤等疾病中发挥潜在的保护效应,并在初步的临床试验中取得良好的防治效果。氢气已经作为辅助治疗被列入新型冠状病毒肺炎诊疗方案,在生物医学领域展现出广阔的应用前景。如今,氢气的生物学作用已经得到了广泛的关注,其未知的作用机制也逐渐被发现,但氢气医学的广泛应用还面临许多挑战。本文围绕氢气生物医学效应的发现、多效性作用机制以及临床应用方面进行系统综述,并阐述了目前氢气生物医学研究面临的挑战和应对策略。

氧化磷脂与动脉粥样硬化

磷脂是构成生物膜和脂蛋白的重要成分,容易在自由基或非自由基以及酶促条件下发生氧化修饰,形成氧化磷脂(oxidizedphospholipids,OxPLs),并进一步产生具有不同生物活性的氧化产物。临床证据表明,OxPLs在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发展过程中不断生成和转化,并在病变处积累。OxPLs是一种高度异质性混合物,可通过多种相关受体或信号通路影响AS病变进程。本文综述了磷脂氧化过程、相关产物,以及OxPLs通过与内皮细胞、单核/巨噬细胞、平滑肌细胞、血小板和脂蛋白相互作用参与AS病变过程,并对近年来将OxPLs作为抑制AS靶点的研究进展进行了总结。

乔松素对内质网应激所致内皮细胞凋亡的抑制作用及机制

目的:探讨乔松素对内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,分别给予6. 25、12. 5和25 mg/L乔松素预处理1 h,再加入TM(10mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞活力和细胞凋亡情况;采用试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,并采用Hoechst 33342/PI双染法检测细胞膜损伤情况;采用Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ERS凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况,以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平;免疫荧光细胞化学法检测活化转录因子6(ATF6)的核转位情况。结果:乔松素(12. 5和25 mg/L)预处理显著抑制TM所诱导的细胞活力降低、LDH漏出、PI阳性细胞率和凋亡率增加(P<0. 05或P<0. 01)。TM显著上调GRP78和CHOP的蛋白表达水平,且促进其上游调控蛋白PERK和e IF2α磷酸化及ATF6核转位,而乔松素显著拮抗TM所致的上述变化,并呈剂量依赖性(P<0. 05或P<0. 01)。结论:乔松素可减轻ERS诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制ATF6/PERK-CHOP信号通路的活化有关。

Toll样受体4介导的自噬减轻糖基化高密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:探讨自噬对糖基化高密度脂蛋白(glycosylated high-density lipoprotein,gly-HDL)所致的血管内皮细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分别与100 mg/L HDL和不同浓度(25、50和100 mg/L)gly-HDL共同孵育24 h;另再培养HUVECs给予1μmol/L自噬诱导剂雷帕霉素或2 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理1 h,或5 mg/L抗Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)单克隆中和抗体预处理30 min,再与gly-HDL(100 mg/L)共同孵育24 h。采用MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用Western blot技术检测自噬标志分子beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、内质网应激凋亡途径关键分子caspase-12及TLR4的表达变化,采用激光共聚焦显微镜观测细胞内LC3的变化。结果:经gly-HDL处理的HUVECs活力下降,LDH漏出和细胞凋亡显著增加(P<0.01),且caspase-12被激活(P<0.05);雷帕霉素预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用减弱(P<0.05);而3-MA预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用则进一步加强(P<0.05)。gly-HDL显著上调TLR4的表达,并触发自噬反应,表现为beclin-1和LC3-Ⅱ表达上调及LC3显著颗粒化,且呈浓度依赖性(P<0.05);而抗TLR4单克隆中和抗体预处理可显著抑制gly-HDL所诱导的beclin-1上调和LC3颗粒化(P<0.01)。结论:TLR4介导gly-HDL对HUVECs自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制caspase-12活化减轻gly-HDL所诱导的HUVECs凋亡。

大鼠口腔常在菌的分离培养与鉴定

目的研究Wistar大鼠口腔常在菌的种类、形态,与人类口腔常在菌种比较,探讨Wistar大鼠和人类有关菌群的差异和相似性,寻找适合人类口腔微生物和疾病研究的模型动物。方法用60%高糖水饲喂法构建大鼠菌斑模型,提取菌斑在丰富营养培养基划线培养,革兰氏染色观察形态并进行16SrRNA基因扩增和测序。结果经分离培养和鉴定共筛选出粪肠球菌、发酵乳杆菌、唾液链球菌3种细菌。结论大鼠口腔微生物种类与人类相似,是较好的人类口腔微生物和疾病研究的模型动物。

新冠肺炎疫情期间病理生理学在线教学实践探索

目的探讨以学生为中心、教师为主导的教学模式在病理生理学在线教学中的应用,以评价该教学模式在疫情期间及后疫情时代提高病理生理学教学质量中的可行性。方法以山东第一医科大学2018级医学影像本科生为研究对象(n=109),开展以学生为中心、教师为主导的病理生理学在线教学。通过教学平台数据分析和问卷星APP问卷调查,评价该在线教学模式的教学效果和学生满意情况。结果该在线教学模式不仅加深了学生对所学理论知识的理解和掌握,而且提高了其归纳总结、自主学习能力,强化了分析、解决实际问题和临床思维能力,提升了职业素养。结论该在线教学真正实现了“学生为中心、教师为主导”的理念,提高了病理生理学教学质量。

大蒜素减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞焦亡

目的研究大蒜素对氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensitylipoproein,ox-LDL)触发的巨噬细胞焦亡的抑制作用,并探究其可能的分子机制。方法RAW 264.7巨噬细胞,给予大蒜素(12.5、25、50和100 mg/L)和二亚苯基碘鎓(DPI)5μmol/L预处理1 h,再加入100 mg/L ox-LDL继续孵育24 h。分别采用TUNEL、MTT、ELISA法和相应的试剂盒检测细胞死亡情况和细胞活力、培养基IL-1β和IL-18浓度以及培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。随后,应用Western blotting法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达变化。结果和DPI氧化应激抑制剂相似,大蒜素可以显著抑制ox-LDL触发的巨噬细胞焦亡作用,增加细胞活力,减少ox-LDL刺激引起的TUNEL阳性细胞率以及巨噬细胞LDH漏出,并可减少白介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)和白介素⁃18(interleukin⁃18,IL⁃18)的分泌,且呈浓度依赖性;与DPI相似,大蒜素能够显著抑制ox-LDL触发的NLRP3上调和caspase-1活化,并明显抑制ox-LDL介导的氧化应激反应,表现为SOD活性增加、ROS和MDA生成减少。结论大蒜素可减轻ox-LDL所触发的巨噬细胞焦亡,该作用主要与减弱氧化应激反应从而抑制NLRP3-caspase-1信号通路的活化有关。

晚期糖基化白蛋白通过上调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3诱导巨噬细胞焦亡

本研究旨在探讨晚期糖基化白蛋白(advanced glycated albumin, AGE-alb)对巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)-caspase-1途径的影响,以阐明AGE-alb对巨噬细胞焦亡的影响及机制。体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予AGE-alb (1、2、4和6 g/L)、对照白蛋白(C-alb,4 g/L)处理24h或以NLRP3抑制剂MCC950 (1μmol/L)预处理细胞,1h后以AGE-alb(4g/L)处理24h。MTT法检测细胞活力,试剂盒测定caspase-1和培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性以及白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-18浓度,TUNEL法和Hoechst 33342/PI双染法检测细胞死亡情况,Westernblot分析NLRP3、procaspase-1和cleavedcaspase-1表达变化。结果显示:AGE-alb显著诱导RAW264.7巨噬细胞损伤,表现为细胞活力降低,LDH漏出、TUNEL阳性和PI阳性细胞率显著增加,且呈浓度依赖性,并可促进IL-1β和IL-18分泌。AGE-alb显著上调NLRP3表达和caspase-1活性,尤其在4和6 g/L浓度时更为明显。然而,MCC950预处理可抑制AGE-alb所诱导的RAW264.7巨噬细胞活力降低、LDH漏出、TUNEL阳性和PI阳性细胞率增加以及IL-1β和IL-18分泌,并可抑制AGE-alb所致的caspase-1活化。以上结果表明,AGE-alb可诱导RAW264.7巨噬细胞焦亡,其机制至少部分是通过激活NLRP3-caspase-1信号途径实现的。

大蒜素通过抑制凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的研究大蒜素对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予大蒜素(12.5、25和50 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA,4 mmol/L)或抗凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)单克隆抗体(4 mg/L)预处理lh,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养24h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和细胞凋亡;说剂盒检测培养基乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。Western blot法测定LOX-1及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)关键分子双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(double-stranded RNA-activated protein kinase-like ER kinase,PERK)磷酸化水平和促凋亡蛋白caspase-12表达变化。结果与ERS抑制剂PBA相似,大蒜素显著减轻ox-LDL所诱导的HIUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P<0.05或P<0.01),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P<0.05或P<0.01)。大蒜素明显抑制ox-LDL所致的LOX-1上调(P<0.05或P<0.01)。另外,与PBA相似,大蒜素明显抑制ox-LDL所诱导的PERK磷酸化和caspase-12活化(P<0.05或P<0.01)。抗LOX-1单抗可抑制ox-LDL所致的caspase-12活化(P<0.05)。结论大蒜素可减轻ox-LDL所致的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制LOX-1上调继而减轻ERS-caspase-12途径活化有关。