骨创伤外科患者伤口细菌感染检验结果探讨

目的:分析骨创伤外科患者伤口分泌物分离的感染细菌检验结果,为临床骨创伤感染的治疗提供理论支持。方法:回顾性分析2020年6月-2021年6月期间在山东第一医科大学第一附属医院(山东省千佛山医院)就诊的289例骨创伤外科伤口感染患者培养标本,通过细菌检验了解病菌类型,分析临床抗菌药物耐药性情况。结果:289例骨创伤外科伤口感染患者,分离出66.44%(192/289)病原菌,其中占比较大的几类分别为:假单胞菌属占15.10%,肠杆菌属占26.56%,葡萄球菌属占32.81%,肠球菌属占8.85%,克雷伯菌属占9.90%。耐药性分析时革兰阳性菌针对各种抗菌药物的抗菌性数据分别为替考拉宁耐药性的占比均为0.00%,万古霉素耐药性的占比均为0.00%,耐药性明显低。青霉素耐药率葡萄球菌属感染的患者100.00%,肠球菌属感染94.12%;红霉素耐药率葡萄球菌属感染的患者80.95%,肠球菌属感染82.35%;82.76%,庆大霉素耐药率葡萄球菌属感染的患者34.92%,肠球菌属感染35.29%;55.17%均较高。革兰阴性菌中氨苄西林耐药率肠杆菌为96.77%,克雷伯菌属为94.74%;头孢他啶耐药率肠杆菌为64.70%,克雷伯菌属为89.47%,假单胞菌属为65.52%;头孢吡肟耐药率肠杆菌为58.82%,克雷伯菌属为78.95%,假单胞菌属为65.52%;左氧氟沙星耐药率肠杆菌为39.21%,克雷伯菌属为52.63%,假单胞菌属为37.93%;头孢他啶耐药率肠杆菌为64.70%,克雷伯菌属为89.47%,假单胞菌属为65.52%;碳青霉烯类抗生素耐药率肠杆菌为9.80%,克雷伯菌属为15.79%,假单胞菌属为24.14%。结论:经验性用药可以及时控制污染伤口感染,但骨创伤外科伤口由于开放性伤口导致患者感染病原菌的多样性,应加强细菌感染检测,根据药敏结果及时调整药物种类、防控多重耐药细菌的产生,减轻患者痛苦缩短病程。

心力衰竭新型生物标志物的研究进展及应用

心力衰竭(简称“心衰”)的发病机制复杂,涉及多个病理生理学过程,发生时常伴随各种严重的并发症及不良预后,对其精确诊断和及时治疗非常重要。心衰生物标志物的检测可作为预测心衰发病、临床诊断、预后评估和指导治疗的重要辅助手段。近年来,新型心衰标志物不断出现,本文按照其所涉及的病理生理学过程对新型心衰标志物进行分类,并对支链氨基酸、心型脂肪酸结合蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白、黑色素瘤细胞粘附分子等具有类别代表性且有充分文献报道的新型标志物加以论述,探讨其在不同临床情境下的应用价值及与经典心衰标志物的联用价值,为心衰的诊疗和预后评估提供更多思路。

甲基转移酶样3抑制剂STM2457通过调节线粒体功能改善代谢相关脂肪性肝病

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)特异性抑制剂STM2457在代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的作用及机制。方法动物水平:15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为基础组(CD组,n=5,10%低脂饲料喂养16周)、高脂组(HFD组,n=5,60%高脂饲料喂养16周,建模MAFLD)、STM2457组(STM组,n=5,60%高脂饲料建模小鼠MAFLD后,给予STM245750 mg/kg腹腔注射2周)。斑点杂交实验(Dot-blot)检测小鼠肝组织m6A修饰水平,检测各组肝组织匀浆甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,HE染色观察小鼠肝组织形态,IPGTT和IPITT检验小鼠胰岛素抵抗程度,代谢笼实验检测代谢方式的改变,透射电镜(TEM)检测线粒体的形态。细胞生物学水平:油酸钠/棕榈酸钠作用48 h诱导建立人肝癌细胞株HepG2脂肪变性模型(FFA)。STM2457组在诱导脂肪变性的同时给予STM2457(1μmol/L)作用48 h,通过线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测线粒体功能。结果经高脂饮食诱导建立的MAFLD模型小鼠,其肝组织中m6A修饰水平升高,METT3的mRNA表达上调,与CD组比较,HFD组METT3的mRNA表达上调1.557±0.074倍(P<0.05),而在STM2457作用下,小鼠体质量显著下降且肝脏脂质沉积减少,肝组织m6A修饰水平下降,葡萄糖耐量和胰岛素敏感性升高,肝组织匀浆TG含量减少,(P<0.05),血清ALT、AST含量降低(P<0.05),。HFD组肝细胞线粒体肿胀明显,线粒体膜电位下降,STM2457作用后线粒体形态恢复正常,膜电位上升(P<0.05)。结论METTL3抑制剂STM2457能够通过减轻高脂饮食诱导的线粒体损伤改善MAFLD。

粘液型溶血葡萄球菌表型及基因组特征分析

目的:对引起中枢神经系统感染的一株罕见粘液型溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)表型及基因组特征进行分析。方法:收集一株导致中枢神经系统感染粘液型溶血葡萄球菌,通过生物膜形成实验、药敏实验分析生物膜形成和耐药表型,全基因组测序分析其耐药等基因特征。结果:本例溶血葡萄球菌呈粘液型,可见拉丝现象,属于苯唑西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCoNS),同时对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星耐药,对万古霉素、利奈唑胺敏感,比普通非粘液型溶血葡萄球菌更易形成生物膜,MLST显示该菌为ST1型,携带mecA、aph(3′)-IIIa、aac(6′)-Ie、aph(2″)-Ia等8种耐药基因,mecA基因由类似Tn6191的转座子所携带。结论:呈粘液型菌落特征的溶血葡萄球菌在临床上极为罕见,该变异体比通常的非粘液型菌落更易形成生物膜且呈现出多重耐药现象。临床上应关注此类葡萄球菌的粘液变异体,这有助于其早期识别和感染防控。

CBA法检测成人血清sCD25浓度及正常参考值范围

目的应用流式微球分析(CBA)法测定表观健康成年人血清中可溶性白细胞介素2受体(sCD25)浓度,初步建立应用CBA法检测sCD25的正常参考值范围。方法按照《临床实验室检验项目参考区间的制定》和《临床化学检验血液标本的收集与处理》标准,筛选血常规和生化指标在正常参考区间内的健康体检成年人(24~65岁)血清样本204例。根据年龄和性别分成两组,其中青年组(24~40岁)、中年组(41~65岁)各102例,两组男性、女性各51例。应用CBA方法检测各标本血清中sCD25水平,采用x±1.96s方法计算双侧95%的正常参考值范围。结果青年组和中年组血清中sCD25浓度比较差异无统计学意义(P>0.05),相同年龄段不同性别健康成人血清中sCD25浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。204例健康成人血清中sCD25浓度呈正态分布,平均值为(812.93±214.32)ng/L;双侧95%正常参考值范围393.87~1233.00 ng/L。结论本研究应用CBA方法初步建立了人血清sCD25浓度正常参考值,为sCD25指标在临床相关疾病方面的应用奠定了基础。

外周血单个核细胞Tim-3及其配体HMGB1在HBV相关肝癌诊断中的意义

目的:检测Tim-3-HMGB1在HBV相关肝癌患者中的表达水平.方法:收集35例肝癌患者及40例健康对照外周血,采用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),分别提取血清病毒DNA及总RNA,普通聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA、Tim3表达水平;实时荧光定量PCR检测HMGB1表达水平.结果:HBV相关肝癌患者外周血单个核细胞Tim-3(P<0.01)-HMGB1(P=0.019)表达水平均增高.结论:HBV相关肝癌患者外周血单个核细胞Tim-3-HMGB1表达水平增高,可作为辅助诊断指标应用.

星童Pylon3D全自动循环免疫荧光分析仪血清β-HCG检测项目的性能验证及评价

目的:对星童Pylon 3D全自动循环免疫荧光分析仪检测血清β-HCG的性能指标进行验证及评价.方法:对仪器Pylon 3D进行重复性和中间精密度、正确度、线性区间、可报告范围、参考区间验证等性能进行验证及评价,并与罗氏CobasE602电化学发光免疫分析仪检测结果进行对比性试验,各项评价结果与行业标准进行比较.结果:精密度评价结果显示:β-HCG项目低、高值样本的重复性变异系数CV分别为7.09%和4.86%,均小于1/4最大允许误差(7.5%);低、高水平样本的中间精密度变异系数CV分别为5.05%和5.43%,均小于1/3最大允许误差(10%),评价结果符合卫生行业标准要求;正确度评价结果显示:低、高值标准品检测结果分别与靶值的相对偏倚为2.58%,-2.11%,以偏倚≤20%评价,符合要求;线性范围评价结果显示:高、低值样本按照一定比例稀释后,检测值与理论值具有良好的相关性,r≥0.975,线性回归斜率b在0.9~1.1之间,满足要求;参考区间验证所有标本检测结果均在在初始采纳的参考范围(1IU/L)界限以内,该项目的生物参考区间适用于本实验室;Pylon 3D仪器循环免疫荧光法和罗氏电化学发光法两种方法对血清β-HCG检测结果具有良好的相关性.结论:星童Pylon3D全自动循环免疫荧光分析仪精密度、正确性、线性范围、临床可报告范围、方法学对比及设置的生物参考区间均符合质量目标要求,检测系统可以满足临床样本血清β-HCG进行定量检测的性能要求,可以为临床诊疗和预后检测提供快速、可靠的检测结果..

基底节区高血压脑出血患者预后模型的构建

目的:探讨基底节区高血压脑出血患者预后结局的影响因素,并构建预测模型。方法:选择2020年1月~2021年9月山东省某三级甲等医院基底节区高血压脑出血患者262例,按照格拉斯哥预后分级分为预后良好组(78例)和预后不良组(184例),并对两组资料进行单因素分析和Logistic回归分析,探讨基底节区高血压脑出血患者预后结局的影响因素并建立预测模型,采用ROC曲线下面积及Hosmer-Lemeshow检验评估模型预测效果。结果:年龄、合并糖尿病、脑出血量、D-二聚体水平是基底节区高血压脑出血患者预后不良的影响因素,预测模型验证结果显示,ROC曲线下面积为0.908(P<0.001),Hosmer-Lemeshow检验结果显示P值为0.717。结论:年龄≥60岁、合并糖尿病、脑出血量、D-二聚体水平为基底节区高血压脑出血患者预后不良的预测指标。

基于二代测序的口咽癌HPV-16病毒整合位点检测新方法的建立与应用

目的:构建一个基于二代测序的口咽癌HPV-16病毒整合位点检测新方法,明确建库条件和流程,评估测序结果和质量,为口咽癌临床诊疗提供技术手段和理论支持。方法:对HPV-16阳性的口咽癌细胞UM-SCC-47以及5对临床标本利用多重PCR方法进行DNA建库和测序,评估测序深度及偏倚性,对测序数据进行分析,找出HPV-16整合位点所在基因。结果:成功构建了测序体系,可在96孔板中批量实现并于12小时内完成。石蜡包埋组织与新鲜组织测序质量并无差异。分析得到HPV-16整合位点所在的19个基因。结论:一个基于二代测序的口咽癌HPV-16整合位点检测新方法已成功构建。该方法建库时间短,成本低,测序深度有保证,方便应用和推广。

新生儿先天性甲状腺功能低下症筛查研究

目的:了解2016-2017年东营市新生儿先天性甲状腺功能减低症(Congenital Hypothyroidism,CH)筛查情况,为预防和早期诊断CH提供科学依据。方法:新生儿出生721h充分哺乳6次后进行足跟采血,滴在Whatman S&S 19031滤纸上,且在规定时间内进行新生儿促甲状腺激素测定。对筛检阳性者使用化学发光法检测血清中的T4、FT4、T3、FT3及TSH。结果:东营市2016年-2017年共筛查新生儿79267例,其中健康新生儿79213例,确诊CH患儿54例,发病率1/1468。结论:东营市新生儿CH发病率高于全国平均水平,新生儿疾病加强筛查,对降低儿童智力障碍性疾病的发生具有重要意义。

凝血功能在预防肺癌患者DVT中应用的研究

目的:研究肺癌患者的各种凝血指标在其治疗过程中的改变进而预防血栓并发症的发生。方法:对在2018~2020年间确诊为肺癌的265例住院患者在治疗期间,对其进行凝血常规、TEG及静脉血管超声等检查,根据血栓形成情况对其进行分组,分为:血栓组、对照组;其中正常体检人员20名设为正常组,比较3组间各项指标的差异情况。结果:TEG检测结果显示,血栓组患者R值较对照组、正常组缩短;血栓组D-二聚体、FIB结果较对照组、正常组增高,其他检测项目与正常组相比较无统计学意义(P>0.05)。结论:肺癌合并DVT患者D-二聚体、FDP结果升高、TGE检测R值降低,患者凝血结果异常,血液高凝状态较正常人发生血栓的风险的几率高。

恒温扩增芯片法与痰培养法在ICU患者下呼吸道病原体检测中的应用评估

目的:评估恒温扩增芯片法与痰培养在ICU患者下呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法:收集2019年3月~2020年3月山东省千佛山医院ICU下呼吸道感染患者的痰液标本,分别通过恒温扩增芯片法与痰培养检测病原体。对同时采用两种方法检测的466例标本检出率进行分析,对537例ICU下呼吸道感染患者病原体感染情况进行统计。结果:在466例同时检测的标本中,恒温扩增芯片法与痰培养检测阳性率并无统计学差异(76.39%,74.03%),但阳性标本中恒温扩增芯片法病原体检出量较痰培养多。恒温扩增芯片法对耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的检出率高于痰培养法,差异具有统计学意义。我院ICU患者下呼吸道病原体感染以铜绿假单胞菌(20.8%)、鲍曼不动杆菌(19.9%)、嗜麦芽窄食单胞菌(17.4%)、甲氧西林葡萄球菌(15.3%)和肺炎克雷伯菌(14.2%)为主。结论:在ICU患者下呼吸道病原体检测中,恒温扩增芯片法与痰培养法虽然阳性检出率无差异,但是恒温扩增芯片法较痰培养法可以检出更多的病原体,更适合下呼吸道病原体检测。

致关节感染皮疽诺卡菌的耐药表型及全基因组测序分析

目的对临床分离的致关节感染的两株皮疽诺卡菌(Nocardia farcinica)进行全基因组测序并分析其耐药性。方法2020年1月收集两株导致老年患者膝关节感染的皮疽诺卡菌菌株,采用全基因组测序对细菌进行鉴定,根据CLSI M24推荐的微量肉汤稀释法和E‑test法进行药物敏感性分析,通过ABRicate工具比对获得性耐药和毒力基因,Snippy等生物信息学工具进行同源性等基因特征分析。结果本研究的临床分离株均为皮疽诺卡菌,对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑(TMP/SMX)耐药,对亚胺培南、利奈唑胺和含有酶抑制剂类抗生素阿莫西林/克拉维酸敏感。携带A类β内酰胺酶基因far‑1、RNA聚合酶结合蛋白基因RbpA、多耐药外排泵转录激活因子基因MtrA和调节转录因子基因vanR‑O,分别介导对β内酰胺抗生素、利福平、大环内酯类药物和万古霉素的耐药性。不含有获得性TMP/SMX耐药基因,二氢叶酸还原酶家族基因存在多个错义突变,均携带与结核分枝杆菌同源的icl、mbtH、phoP、relA毒力基因,SNP同源分析表明两株皮疽诺卡菌具有很近的亲缘关系,两株菌仅存在10个SNP位点、6个复合基因和1段基因缺失变异。结论全基因测序技术有助于研究诺卡菌的分子特征和耐药机制;皮疽诺卡菌对TMP/SMX耐药现象需要重视,参与二氢叶酸代谢途径的酶基因突变有可能是TMP/SMX耐药的原因之一。

干扰小RNA沉默α1抗胰蛋白酶对类风湿关节炎成纤维细胞的作用探讨

目的探讨干扰小RNA(siRNA)沉默α1抗胰蛋白酶(α1-AT)基因对类风湿关节炎成纤维样滑膜(RA-SFs)生物学行为的影响。方法取5例RA患者的膝关节滑膜组织原代培养,采用人工合成的沉默α1-AT siRNA,特异性抑制α1-AT在RA-SFs中的表达;瞬时转染24、36 h后,采用RT-qPCR法检测抑制效率,同时检测α1-AT基因沉默后各相关基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、Transwell小室、细胞划痕、ELISA等方法检测干扰α1-AT表达后对细胞增殖、侵袭、迁移的影响和IL-17,TNF-α,IL-1α,IL-1β等相关炎性因子分泌的表达;观察通路抑制剂[ERK抑制剂、信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂、NF-κB抑制剂]刺激细胞时,对α1-AT的影响变化。多组间比较采用单因素方差分析,LSD-t检验及χ^2检验。结果与阴性对照组相比,siRNA α1-AT组转染24 h时,α1-AT mRNA水平抑制效果显著(P<0.05),且RA SFs的增殖速率未受影响(P>0.05),细胞的侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05);IL-17、IL-1β分泌略微降低(P>0.05),TNF-α和IL-1α分泌略微增加(P>0.05);α1-AT下游基因MMP-2-169、Hu-Bax1、MMP-9、Hu Bax和Hu Bcl-xl表达均明显下降(P<0.05)。信号通路抑制剂ERK抑制剂(PD98059)和NF-κB抑制剂(PDTC)对α1-AT均有显著性影响(P<0.05)。结论α1-AT基因沉默对RA-SFs的生物学行为具有一定潜在作用,进一步研究该机制有利于为RA的治疗提供证据支持。

口腔感染非O1、非O139群霍乱弧菌一例

非O1、非O139群霍乱弧菌(non-O1 non-O139Vibrio cholerae,NOVC)感染常与腹泻、肠道外感染有关,如菌血症、中耳炎、皮肤和软组织感染,口腔感染NOVC的病例极少被报道。现报道1例食管癌术后化学治疗患者口腔出现NOVC感染。患者以腹泻、腹痛伴发热起病,口唇和脸颊出现血疱,上下唇内侧和上腭黏膜出现广泛糜烂,舌底出现较大溃疡创面,经过抗菌药物治疗后腹泻好转,口腔感染症状消失。

PAD4在抗β2GP1/β2GP1复合物促进中性粒细胞胞外诱捕网形成中的作用

目的探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)在抗β2GP1/β2GP1复合物诱导中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成中的作用。方法分离健康人外周血中性粒细胞与抗β2GP1/β2GP1复合物(100μg/ml)共孵育一定时间,Western blot检测细胞PAD4表达;进一步采用PAD4抑制剂Cl-amidine(10μmol/L)预处理中性粒细胞,Western blot检测细胞瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)蛋白质表达,ELISA检测细胞培养上清中髓过氧化物酶(MPO)-DNA相对含量。下腔静脉狭窄法建立APS小鼠血栓模型,并通过腹腔注射Cl-amidine(50 mg/kg)进行干预,Western blot检测血浆中CitH3蛋白质表达,荧光染色法检测血浆中循环游离DNA(cf-DNA)浓度,取下腔静脉血栓称其重量,观察Cl-amidine能否抑制APS-IgG诱导的NETs和血栓形成。组间差异采用t检验或单因素方差分析。结果抗β2GP1/β2GP1复合物能够显著下调细胞质中PAD4蛋白质表达水平[(3.67±0.32)vs(1.47±0.19),t=10.22,P<0.05],并使细胞核内PAD4蛋白质含量升高[(0.57±0.19)vs(2.97±0.31),t=11.49,P<0.05];Cl-amidine能显著抑制抗β2GP1/β2GP1复合物诱导的中性粒细胞CitH3蛋白质表达[(2.46±0.47)vs(0.46±0.13),t=12.24,P<0.01],明显减少培养上清中MPO-DNA含量[(4.09±0.94)vs(2.80±0.57),t=4.23,P<0.05]。在体内试验中,Cl-amidine能显著抑制APS小鼠血浆中CitH3蛋白质表达[(3.97±0.56)vs(1.09±0.45),t=11.83,P<0.01],明显降低APS小鼠血浆中cf-DNA浓度[(2685.0±735.8)vs(1784.0±577.0),t=3.93,P<0.05];与对照组EAPS小鼠相比,经Cl-amidine预处理的APS小鼠血栓形成明显减小[(8.22±3.06)vs(4.89±1.90),t=2.27,P<0.05]。结论PAD4参与了抗β2GP1/β2GP1复合物诱导的NETs形成,其可能在APS血栓形成中发挥重要作用。