浅谈实验诊断学课程实践的几点体会

实验诊断学是利用免疫学、生物化学、细胞遗传学等原理技术对各种人体标本,包括血液、尿液、浆膜腔积液、分泌物、粪便等进行分析,从而对疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及预后等做出评价。是医学生从基础理论迈向临床实践的桥梁课程,但是因其课时少,内容多,难掌握,使该课程的教学实施面临一些挑战。本文从实验诊断学的教学内容、教学师资及教学形式等方面进行了一些思考与探索,以期提高实验诊断学教学质量。

一种基于新型发光法的中枢神经特异性蛋白S100β检测试剂盒的性能评估

目的:对基于新型发光法的Pylon中枢神经特异性蛋白S100β检测试剂的性能进行评估。方法:依据美国临床和实验室标准委员会相关文件方案对S100β检测试剂盒的分析性能,包括精密度、线性范围、抗干扰能力、正常人群参考区间等性能进行评估,并与电化学发光法ElecsysS100β检测进行方法学比对。比较不同疾病与健康人群的S100β水平,以评估该方法的临床应用价值。结果:PylonS100β检测在低浓度(平均值0.250μg/L)重复性精密度和实验室内总不精密度均为6.30%,在高浓度(平均值2.96μg/L)重复性精密度和实验室内总不精密度分别为6.48%、6.53%。该方法在0.05~36.9μg/L之间呈线性。干扰物质(甘油三酯≤15mg/mL、血红蛋白≤10mg/mL、生物素≤50ng/mL、胆红素≤0.4mg/mL)对PylonS100β检测结果无影响。PylonS100β检测厂家说明书申明的参考区间(<0.105μg/L)适合本实验室检测人群。40例样本同时进行PylonS100β检测与罗氏电化学发光法检测,结果表明两种检测方法结果一致性良好。在体外循环心脏手术后、ICU昏迷、脑卒中、轻度和重度创伤性脑损伤患者的S100β显著升高(P<0.001)。结论:PylonS100β检测具有良好的精密度、线性范围、抗干扰能力,其与罗氏电化学发光法S100检测结果一致性好,符合于临床分析的要求,并且S100β在多种脑损伤相关疾病中显示出潜在的临床应用价值。

检验医师培养现状思考与探索

随着现代医学和循证医学的发展,检验医学在医疗中发挥着越来越重要的作用,医师型检验人才的需求变得更加迫切。目前,由于检验医师的培养还在初级阶段,尚存在亟待完善和改进的空间,我们从检验医师的培养模式、教学质量和岗位职责落实等方面积极探讨检验医师队伍建设中存在的问题及具体的应对措施,以期培养出优秀的检验医师,切实提高检验医师的岗位胜任力,充分发挥检验医师在医疗体系中的重要作用。

高毒力肺炎克雷伯菌的微生物学特征与毒力因子研究进展

高毒力肺炎克雷伯菌(hvKp)能够引起健康个体的社区获得性感染,比经典的肺炎克雷伯菌更具毒性。hvKp在亚洲首次被发现,是化脓性肝脓肿的主要原因。除肝脓肿外,hvKp与肺炎克雷伯菌的不同之处在于其具有很强的转移能力,包括肺、眼和中枢神经系统。由于导致高毒力的遗传决定因素通常在毒力质粒及染色体移动遗传元件上,该文对其与毒力相关的微生物学特征与毒力因子的研究进展进行综述,以期为高毒力肺炎克雷伯菌的早期识别、感染控制和新型治疗药物的研发提供线索。

肝细胞新生脂肪生成过程的全转录组表达谱分析

目的探讨体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型脂肪变性过程全转录组基因表达谱的变化。方法以人肝细胞株LO2(HL-7702)为实验材料,油酸(50μg/mL)作用48 h诱导建立肝细胞脂肪变性模型。围绕lncRNA、circRNA、mRNA进行真核生物全转录组测序分析。结果测序结果显示,脂肪变过程中大量的基因转录组水平发生显著变化,上调的基因包括1884个mRNA、351个lncRNA、564个circRNA;下调的基因包括1975个mRNA、297个lncRNA、540个circRNA。针对具有表达差异的mRNA进行GO及Pathway富集分析,发现脂肪酸代谢、脂肪酸降解及炎症等多个信号通路被富集。结论lncRNA、circRNA、mRNA作为人类基因转录组的重要组成部分在NAFLD的发生与发展中发挥重要作用,该研究为肝脏新生脂肪生成过程的基因调控机制提供理论指导。

41℃温浴对高效价冷凝集素样本血常规检测结果的影响

目的探讨41℃水浴30 min纠正血常规检测中冷凝集现象的可行性。方法选取工作中遇到的2例含有高效价冷凝集素的样本,分别在室温、37℃和41℃水浴不同时间后进行血常规分析,观察血常规各项检测参数的变化;同时对标本进行涂片染色镜检,观察红细胞分布情况。收集74例无冷凝素的血常规标本,将标本41℃水浴后检测结果与室温检测结果进行一致性和可比性验证。结果2例冷凝集标本在室温检测时红细胞计数(RBC)和红细胞压积(HCT)明显降低,平均血红蛋白含量(MCH)和平均血红蛋白浓度(MCHC)异常升高,血红蛋白(HGB)与RBC比例明显异常,涂片染色镜检见红细胞大量聚集成团。37℃水浴不同时间后,RBC、HCT、MCH和MCHC均得到明显改善,但镜检仍有红细胞聚集成团现象。41℃水浴30 min后,两例标本RBC明显升高,HCT、MCH和MCHC亦趋于正常,镜检可见红细胞均匀分布。74例标本在41℃水浴30、60 min后的检测结果分别与室温下检测结果相比,各项目相对偏差符合率均≥80%,结果具有可比性。结论对于含有高效价冷凝集素的标本可以考虑41℃水浴后再进行血常规检测,以获得准确的检测结果。

济南地区2015—2019年育龄女性TORCH感染状况分析

目的了解济南地区育龄女性TORCH感染状况及特点,为临床有效预防TORCH感染及做好优生优育工作提供参考依据。方法选取2015年1月至2019年12月就诊于山东第一医科大学第一附属医院进行TORCH血清学筛查的育龄女性作为回顾性分析的研究对象。用化学发光法检测其外周血TORCH IgM和IgG,采用χ^2检验进行统计学分析。结果8350例育龄女性中TORCH IgM总阳性率为4.22%,以HSV1+2 IgM阳性率最高(13.12%);IgG总阳性率为65.27%,其中巨细胞病毒(CMV)IgG阳性率最高(93.88%),刚地弓形虫(TOX)IgG阳性率最低(0.93%)。HSV1+2 IgM阳性率有逐年增高趋势。低龄组各病原体IgM阳性率普遍稍高于高龄组,其中HSV1+2 IgM阳性率差异有统计学意义;除风疹病毒(RV)IgG阳性率低龄组高于高龄组外,其他病原体IgG阳性率均呈现随年龄增大而升高的趋势,以HSV1+2、CMV感染最常见。RV IgM阳性率以冬春季较高,其他病原体IgM阳性率无明显季节差异。结论济南地区育龄女性TORCH感染以CMV、HSV1+2既往感染为主,而HSV1+2急性感染呈现逐年升高趋势,因此应加强对育龄女性TORCH筛查和宣教,特别要加强以性传播途径为主的病毒防控工作。

TAZ在肾透明细胞癌的表达变化及临床意义

目的:探讨Hippo通路效应分子TAZ在肾透明细胞癌及不同的种族、肿瘤分期、肿瘤分级的表达变化及其对预后的影响。方法:使用UALAN数据库分析TAZ肾透明细胞癌患者肿瘤组织中的表达,并且以癌旁作为对照。对纳入数据库的患者进一步根据种族、肿瘤分期、肿瘤亚型和肿瘤分级进行分组,比较TAZ在不同分组与对照组中表达变化。使用UALAN数据库和OncoLnc数据库分析TAZ的肾透明细胞癌患者预后的影响。结果:与对照组相比,TAZ肾透明细胞癌患者肿瘤组织中的表达显著升高(P=1.62E-12),不同肿瘤分期患者中TAZ表达显著高于对照组(P<0.05),不同种族患者中TAZ表达显著高于对照组(P<0.05),不同肿瘤分级患者中TAZ表达显著高于对照组,不同肾透明细胞癌患者中TAZ表达显著高于对照组。与低表达组相比,高表达TAZ的肾透明细胞癌患者预后较差。结论:在肾透明细胞癌中TAZ是一个潜在的预后和生物标志物。

吉非替尼耐药A549细胞系ABC转运泵基因表达的检测

目的:检测吉非替尼耐药A549细胞系ABC转运泵基因表达,进一步明确肺癌细胞吉非替尼耐药的机制。方法:培养肺癌A549细胞株,使用吉非替尼诱导耐药株的产生,提取细胞RNA,采用定量PCR的方法检测ABC转运泵家族基因的表达。结果:成功诱导A549吉非替尼耐药株,检测耐药株ABC转运泵家族基因表达结果显示ABCB1、ABCC1、ABCG2、ABCA2、ABCC3表达较亲本A549系显著升高,ABCC2基因表达无明显变化。结论:吉非替尼耐药的A549细胞株会出现ABC转运泵相关基因表达升高,提示ABC转运泵相关基因参与了继发性肿瘤耐药的产生,靶向EGFR激酶抑制剂吉非替尼也是ABC转运泵家族的转运底物。

分析批长度Westgard西格玛规则在临床化学室内质量控制中的应用

目的运用分析批长度Westgard西格玛规则为临床化学项目选择合适的室内质量控制(简称质控)策略,降低患者风险。方法收集临沂市中医院实验室参加2019年国家卫生健康委员会临床检验中心室间质评(EQA)的数据及室内质控数据作为偏倚(Bias)和不精密度(以CV表示)的估计,采用国家卫生行业标准WS/T 403-2012规定的允许总误差(TEa)作为质量规范,计算σ值,根据分析批长度Westgard西格玛规则流程图选择相应的质控策略,计算质量目标指数(QGI),评价检测系统的分析性能。结果选取的20个项目中,2个项目σ≥6,采用单规则13s,分析批长度为1000;2个项目5≤σ<6,采用多规则13s/22s/R 4s,分析批长度为450;2个项目4≤σ<5,采用多规则13s/22s/R 4s/41s,分析批长度为200;5个项目3≤σ<4,采用多规则13s/22s/R 4 s/41s/6 x,分析批长度为45;9个项目σ<3,需提高检测系统的分析性能。σ<6的检测项目中,17个项目QGI≤0.8,需优先改进精密度;1个项目0.8<QGI<1.2,需同时改进精密度和正确度。结论分析批长度Westgard西格玛规则作为一种新的基于风险的统计质控(SQC)策略工具,能简单直观地帮助实验室选择合适的质控策略,实现以降低患者风险为基础的质控目标;依据QGI可以查找性能不佳的具体原因,制订解决方案,指导检验质量改进。

糖尿病足患者病原菌分布及血清炎性因子与病情及预后的相关性分析

目的:分析糖尿病足患者病原菌分布及血清炎性因子与病情及预后的相关性。方法:选择济南市中心医院2018年1月至2019年5月收治的86例糖尿病足患者的临床资料,依据糖尿病足感染程度分为轻度感染组30例、中度感染组33例和重度感染组23例;依据糖尿病足转归情况分为治愈28例、好转44例及无效14例;同期选择78例本院健康体检者作为对照组。分析糖尿病足患者病原菌分布情况,比较各组血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和白介素-6(IL-6)水平。结果:86例糖尿病足患者共分离102例株病原菌,以革兰阴性菌为主,主要为铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌,其次为革兰阳性菌,主要为金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。糖尿病足不同感染程度组血清炎性因子水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病足重度感染组血清炎性因子水平显著高于中度感染组及轻度感染组(P<0.05)。糖尿病足无效者血清炎性因子水平显著高于治愈和好转组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖尿病足患者病原菌分布以革兰阴性菌为主,随着感染程度的加重血清炎性因子水平显著上升,此外血清炎性因子水平能够反映糖尿病足患者的临床效果。

RNA m^(6)A甲基化修饰在代谢综合征中的研究进展

代谢综合征是以肥胖、糖尿病、高血压以及心脑血管疾病聚集发病的临床症候群。近年来,随着人民生活水平的逐渐提高,代谢综合征的发病人数也在逐年增长,寻找新的诊断和治疗代谢综合征的方法已成为医学研究领域亟待解决的问题之一。N6-甲基腺嘌呤甲基化(m^(6)A)作为常见的表观遗传修饰,其动态化的可逆修饰影响着被修饰基因的表达,与机体代谢调控关系密切。该文总结了RNA m^(6)A修饰在代谢综合征中的作用及调控机制的研究进展,为m^(6)A修饰及相关的甲基化酶、去甲基化酶成为诊断和治疗代谢综合征的新靶点提供理论依据。

非小细胞肺癌的靶向治疗耐药机制研究进展

近年来,针对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)的研究,发现存在可诱导肿瘤发生的基因突变,这一发现促进了信号通路靶向抑制剂的发展与临床应用,极大地提高了患者的缓解率。然而,尽管对NSCLC的分子机制研究取得了很大进展,由于治疗性耐药的发生,晚期NSCLC依然难以治愈。本文主要介绍NSCLC靶向治疗中,靶点癌基因突变、下游信号通路及旁路信号通路的异常活化、肿瘤微环境等因素导致耐药的机制及应对策略。

评价EDTA-PTCP患者3种抗凝标本血小板结果的准确性

目的:对EDTA依赖性假性血小板减少症患者进行抗凝采集,并对其血小板结果的准确性进行评价。方法:对2019年4月至11月50例血常规涂片镜检结果为EDTA依赖性假性血小板减少的患者同时采集3份标本,分别用EDTA-K2、肝素钠、枸橼酸钠抗凝。采用Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪对3份标本进行检测,并涂片镜检观察镜下PLT聚集情况。结果:用EDTA-K2抗凝的标本在采集后15min内检测PLT结果的平均值为66×109/L,血涂片镜检结果均显示PLT聚集;用肝素钠抗凝的标本在采集后15min内检测PLT结果的平均值为172×109/L,有5例标本血涂片镜检结果出现PLT聚集;用枸橼酸钠抗凝的标本在采集后15min内检测PLT结果的平均值为185×109/L,仅有1例标本血涂片镜检结果出现PLT微聚集。结论:对于EDTA-PTCP患者应引起重视,对其进行血常规采集时,可用枸橼酸钠进行抗凝,并保证15min内检测完毕,以免放置时间过长引起PLT聚集,影响PLT结果的准确性。

儿童EB病毒感染异型淋巴细胞的研究

目的:通过观察EB病毒感染的儿童外周血中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量及形态变化,探讨儿童EB病毒感染与异型淋巴细胞的相关性。方法:选取2019年3~8月在本院就诊的50例EB病毒感染阳性的儿童患者作为实验组,随机抽取同时间段的50例健康查体的儿童作为对照,两组均行实时荧光定量PCR检测EB病毒、血细胞分析及镜检外周血涂片,记录结果并进行比对。结果:实验组和对照组行实时荧光定量PCR法检测EB病毒DNA含量,结果分别为阳性和阴性;两组血细胞分析结果显示:实验组白细胞(WBC)计数和中性粒细胞计数均低于对照组,实验组淋巴细胞计数高于对照组,差异有统计学意义;两组镜检异型淋巴细胞比值分别为7.63%±3.40%、1.11%±0.88%,实验组异型淋巴细胞比值高于对照组(P<0.05)。结论:与健康儿童相比,EB病毒感染阳性的儿童外周血中异型淋巴细胞比例增高,故外周血镜检计数异型淋巴细胞可辅助EB病毒感染的诊断。

不同浓度DMSO作为药物溶剂对肥胖和非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的影响

目的:观察不同体积分数的二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)对高脂饲料诱导的肥胖及非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠模型的影响,为选择合理浓度的DMSO作为药物溶剂提供参考。方法:以60%的高脂饲料诱导16周建立小鼠肥胖及NAFLD模型。用20%的β-环糊精将DMSO稀释成5%,10%,12.5%三种浓度梯度,以腹腔注射的方式连续注射高脂小鼠14天,每天注射一次,期间动态监测小鼠体重的变化,并在终点时收集血清,检测谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和肌酐(creatinine,Cr)指标的变化,并进行肝脏组织切片和组织匀浆检测肝脂肪变程度和甘油三酯(riglyceride,TG)含量。结果:当DMSO浓度为5%时,注射组和对照组小鼠体重、脂肪肝程度组间均无显著差异。当DMSO浓度为10%和12.5%时,与对照组比较,注射组小鼠体重下降显著(P<0.05),ALT显著升高(P<0.05),但是DMSO浓度为10%时肝TG含量和脂肪变程度无显著变化,12.5%时,肝TG含量以及脂肪变程度均显著下降(P<0.05)。结论:在高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型实验中,DMSO作为药物溶剂,建议将DMSO体积分数控制在5%;在NAFLD小鼠模型实验中,建议DMSO浓度控制在10%。

肝硬化患者血常规指标变化的临床诊断价值

目的:探讨肝硬化患者血常规指标变化的临床诊断价值.方法:随机抽取2019年1月~6月我院100例肝硬化患者作为研究对象,行血常规检测,并与100例健康查体者(对照组)进行RBC、 WBC、 PLT、 Hb、红细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、血小板分布宽度(PDW)比较.结果:检测结果与对照组比较,肝硬化患者RBC、 WBC、 PLT、 Hb、 HCT明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);肝硬化患者MCV、 PDW显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:血常规指标可反映肝硬化的肝损害程度,及时进行血常规检测对肝硬化的早期诊断有重要临床价值,对肝硬化患者病情变化、临床治疗及预后的判断有一定临床意义.

癫痫患者血浆外泌体miR-197-5p的表达水平及临床意义

目的:检测癫痫患者血浆外泌体miR-197-5p的表达水平并探讨其临床价值。方法:收集40例癲痫患者(实验组)和40例健康查体人员(对照组)的外周静脉血,提取血浆外泌体,采用RT-PCR的方法检测miR-197-5p的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果:癲痫患者血浆外泌体miR-197-5p的表达量低于健康对照组,两者比较差异具有统计学意义;不同病程癫痫患者血浆外泌体miR-197-5p含量具有显著性差异,病程时间越长,其血浆外泌体miR-197-5p的含量则越低,血浆外泌体miR-197-5p的表达水平与患者癩痫严重程度呈负相关。结论:血浆外泌体miR-197-5p有望成为评价癫痫疾病严重程度的潜在生物标志物。

脑胶质瘤患者血清periostin的表达及临床意义

目的:探讨脑胶质瘤患者血清periostin的表达及其临床意义。方法:选取在我院就诊的90例脑胶质瘤患者和90例健康查体人员血清样本,采用ELISA法检测两组样本中periostin的表达,并分析了术前不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位及级别间的表达差异及其在术前、术后的动态变化,最后分析与血清VEGF水平的关系。结果:与健康对照组相比较,脑胶质瘤患者血清periostin的表达量显著增高;脑胶质瘤患者术后血清periostin表达量较术前降低,血清periostin表达与患者年龄、性别及肿瘤位置无关,与胶质瘤大小及病理分级相关,并与血清VEGF表达量高低呈正相关。结论:periostin在脑胶质瘤患者血清中呈高表达状态,其大小与胶质瘤大小、病理分级及血清中VEGF表达量密切相关,提示了periostin为脑胶质瘤发生发展的促癌因子,有望成为胶质瘤恶性程度评估指标。

2018—2023年杭州市儿童呼吸道合胞病毒感染流行特征

目的 了解新型冠状病毒感染(COVID-19)流行前后,2018年1月—2023年6月浙江省杭州市儿童呼吸道合胞病毒(RSV)感染和流行病学特征。方法 选择2018年1月—2023年6月浙江省人民医院门诊及住院收治的21 453例儿童患者为研究对象,对病例信息进行统计学分析。患者标本通过聚合酶链式反应(PCR)荧光探针法检测RSV病毒RNA。结果 2018—2022全年和2023年1~6月分别检测样本3 970例、4 109例、2 134例、5 845例、4 198例、1 197例,阳性率分别为20.30%、9.17%、17.15%、26.30%、11.58%、11.19%。2018-2022年不同年份患儿的RSV阳性率比较有统计学意义(P<0.05)。与2019年相比,2020、2021和2022年RSV阳性率上升(P<0.05)。阳性率存在季节差异,冬季较高,但在2021年夏季和2023年春季出现反季节性升高。12 479例男性患儿中RSV阳性率16.93%(2 113/1 2479),8 974例女性患儿中RSV阳性率16.64%(1 493/8 974),不同性别患儿的RSV阳性率比较,无统计学差异。在年龄方面,最容易感染的年龄组是婴儿期。结论 本研究揭示了2018年1月—2023年6月杭州地区儿童患者RSV感染情况及流行病学特征;RSV的流行与季节和年龄有关,此外,公共卫生措施或策略是影响RSV流行病学变化的重要原因。