跑台运动通过抑制小胶质细胞NAMPT表达并上调NAD+/SIRT1通路改善AD小鼠海马线粒体功能

目的:探讨12周有氧跑台运动对APP/PS1小鼠海马小胶质细胞NAMPT表达的影响及其在调节NAD^(+)/SIRT1/FOXO1/3a信号通路改善线粒体功能障碍中的作用。方法:3月龄野生型C57BL/6小鼠和APP/PS1小鼠随机分为野生型对照组(WT-sed)、野生型运动组(WT-exe)和APP/PS1对照组(AD-sed)、APP/PS1运动组(AD-exe)。运动组进行为期12周的有氧跑台运动干预。干预结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,免疫荧光检测小鼠海马Iba-1表达水平及NAMPT与Iba-1共定位水平,透射电镜检测小鼠海马线粒体超微结构,Western blot检测海马SIRT1、Ace-FOXO1/3a、PARP1、CD38蛋白表达水平,RT-PCR检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)、PARP1、CD38 mRNA表达水平,ELISA和试剂盒检测NAD^(+)、NADH、IL-1β、IL-6、TNF-α、ATP、H_(2)O_(2)的含量。结果:与WT-sed组相比,AD-sed组小鼠海马NAMPT与Iba-1共定位水平、PARP1、CD38、Ace-FOXO1/3a蛋白表达水平、IL-6、IL-1β、TNF-α、H_(2)O_(2)含量及受损线粒体数量均显著升高,NAD^(+)含量、NAD^(+)/NADH比值、SIRT1蛋白表达水平、mtDNA拷贝数、ATP含量及学习记忆能力均显著降低,而12周有氧跑台运动干预显著改善了APP/PS1小鼠海马上述异常变化。结论:12周有氧跑台运动可能通过抑制小胶质细胞NAMPT过度表达,降低神经炎症反应,减少PARP1、CD38对NAD^(+)的消耗,上调NAD^(+)/SIRT1/FOXO1/3a信号通路,改善线粒体功能障碍,最终起到缓解APP/PS1小鼠学习记忆衰退的作用。

Cag A阳性幽门螺杆菌对胃癌细胞lncRNA DLEU2表达及上皮间质转化的影响

目的探讨细胞毒素相关蛋白A(Cag A)阳性幽门螺杆菌(Hp)对胃癌细胞长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)表达及上皮间质转化的影响。方法体外培养胃癌细胞系HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞系GES1,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达,并选择DLEU2表达最高的胃癌细胞进行后续实验。将Hp NCTC标准菌株26695或11637分别与正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞共培养0、3、9、12 h,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达。采用Western blotting法检测与NCTC 26695或11637共培养3、9、12 h正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞Cag A表达以及共培养3、9、12 h神经钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达。同时,分析与NCTC 26695或NCTC 11637共培养的胃癌细胞DLEU2、Cag A表达与N-cadherin、Vimentin表达的关系。结果HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28细胞DLEU2相对表达量均高于GES1细胞(P均<0.05)。在胃癌细胞中,以HGC-27细胞DLEU2相对表达量最高。因此,选择胃癌细胞HGC-27进行后续实验。NCTC 11637感染3、9、12 h时GES1细胞DLEU2相对表达量均高于NCTC 11637感染0 h时(P均<0.05),NCTC 11637感染12 h时HGC-27细胞DLEU2相对表达量高于NCTC 11637感染0 h时(P<0.05)。NCTC 11637感染12 h时HGC-27细胞和GES1细胞Cag A、N-cadherin、Vimentin相对表达量均高于NCTC 26695感染12 h时相应细胞(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,NCTC 26695或11637感染的HGC-27细胞DLEU2、Cag A表达与N-cadherin、Vimentin表达均呈正相关关系(P均<0.05)。结论Cag A阳性Hp能够引起胃癌细胞长链非编码RNA DLEU2异常表达,而DLEU2异常表达可促进胃癌细胞上皮间质转化。

黄柏酮对肺癌细胞核糖体合成、增殖的影响及机制

目的探讨黄柏酮对非小细胞肺癌细胞(A549细胞)增殖的影响及潜在的作用机制。方法常规培养A549细胞,将对数生长期A549细胞随机分为对照组、黄柏酮组,分别加入DMSO溶剂、50μmol/L黄柏酮继续培养。用尿嘧啶核苷类似物(EU)标记法检测细胞核糖体RNA(rRNA)合成,用胸腺嘧啶核苷类似物(EdU)标记法检测细胞增殖能力,用实时荧光定量PCR检测细胞中rRNA(5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、45S pre-rRNA)表达,用West‑ern blotting法检测细胞中磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化的S6核糖体蛋白235/236[p-RPS6(235/236)]、p-RPS6(240/244)蛋白表达。结果黄柏酮组荧光信号强度与对照组荧光信号强度的比值为0.684±0.008(P<0.05)。与对照组比较,黄柏桐组EdU阳性细胞率低,5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、前体45S rRNA相对表达量低,p-mTOR、p-RPS6(235/236)、p-RPS6(240/244)蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论黄柏酮可抑制肺癌细胞核糖体合成及增殖,其作用机制可能与抑制mTOR/RPS6信号通路激活有关。

基于Oncomine和TCGA数据库分析CHRNA5在肺鳞癌中的表达及临床意义

为了分析烟碱型胆碱能受体5(cholinergic receptor nicotinic alpha 5 subunit,CHRNA5)在肺鳞癌中的表达及其临床意义,利用Oncomine数据库信息分析CHRNA5基因在肿瘤及肺鳞癌组织中的表达情况;利用TCGA数据库信息分析CHRNA5基因在肺鳞癌患者中的表达及与临床参数的相关性;利用免疫组化方法检测52例临床肺鳞癌组织样本和52例癌旁组织样本中CHRNA5编码蛋白α5-nAchR的表达情况,探讨α5-nAchR表达与患者临床病理特征的关系。结果表明:Oncomine数据库中共有402项关于CHRNA5在不同肿瘤表达水平的相关研究,CHRNA5表达存在统计学差异有27项,其中有4项研究显示,CHRNA5在肺癌组织与正常组织中的表达有显著差异,且2项表明CHRNA5在肺鳞癌中的表达量显著高于正常组织.TCGA数据库结果显示,α5-nAchR表达水平与肺鳞癌患者的年龄、性别、吸烟史以及吸烟量密切相关.52例肺鳞癌组织样本免疫组织化学结果显示,α5-nAchR蛋白在肺鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且在肺鳞癌样本中α5-nAchR的表达和患者吸烟史密切相关.本研究表明CHRNA5基因在吸烟相关性肺鳞癌发生发展中可能发挥重要作用,CHRNA5有望成为肺癌治疗的靶点之一,为进一步阐明其在吸烟相关性肿瘤发生中的作用提供理论基础.

α5-nAChR与MHC-I在肺腺癌中的表达及相关性

目的 探讨α5-烟碱型乙酰胆碱受体(alpha5-nicotinic acetylcholine receptor, α5-nAChR)与主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex class I molecule, MHC-I)在肺腺癌中的表达及相关性。方法 TCGA数据库分析CHRNA5(编码α5-nAChR基因)与HLA-B(编码MHC-I基因)在肺腺癌中的表达、相关性及其临床意义。运用免疫组织化学技术检测人肺腺癌临床样本、裸鼠肺腺癌异种移植瘤组织中α5-nAChR与MHC-I的表达及相关性。在人A549细胞、小鼠LLC细胞中,Western blotting检测在α5-nAChR不同表达水平下的FHIT与MHC-I表达及相关性。结果 数据库分析表明,CHRNA5高表达或HLA-B低表达肺腺癌患者的生存率降低,CHRNA5与HLA-B的表达呈负相关(P<0.05)。α5-nAChR与MHC-I在人肺腺癌、裸鼠肺腺癌异种移植物中的表达呈负相关(P<0.05)。在肺腺癌细胞中,α5-nAChR的表达分别与FHIT、MHC-I的表达呈负相关(P<0.05),FHIT和MHC-I在肺腺癌细胞中的表达呈正相关(P<0.05)。结论 α5-nAChR与MHC-I的表达呈负相关,并参与肺腺癌的发生。

乙酰胆碱信号通路在肺癌中的作用

肺癌作为当今世界最为致命的疾病之一,严重地威胁着人类的生命健康。神经递质乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)作为肺癌的自分泌和旁分泌生长因子,可与肺癌细胞上的烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs)和毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptors,mAChRs)结合,促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。近年来,全基因组数据研究表明,nAChRs与吸烟相关肺癌风险密切相关,因此其在肺癌发生发展中的作用机制的研究对肺癌药物的研发具有重要意义。本文对乙酰胆碱信号通路在肺癌进展中的作用机制进行综述,为其成为肺癌治疗新分子靶点和药物的开发提供依据。

NOX4在幽门螺旋杆菌诱导胃癌细胞ROS中的作用

目的研究NOX4在幽门螺旋杆菌(H.pylori)诱导胃癌细胞氧化应激中的作用。方法将胃癌细胞株MKN-45分别与幽门螺旋杆菌菌株NCTC 26695、NCTC 11637共培养6 h,实验设未感染组与幽门螺旋杆菌感染组;用25 mmol/L的活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理MKN-45细胞30 min,实验设NAC未处理组与NAC处理组。用Western blotting检测细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)蛋白表达水平;采用活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,荧光显微镜观察幽门螺旋杆菌感染后ROS水平的变化,荧光酶标仪检测荧光强度。结果与未感染组相比较,幽门螺旋杆菌感染组细胞内ROS生成增多;感染NCTC 26695后NOX4蛋白的表达增加(t=11.67,P<0.001),感染NCTC 11637后,NOX4蛋白的表达增加(t=17.29,P<0.001);无论是NCTC 26695还是NCTC 11637菌株,NOX4蛋白表达上调的差异均有统计学意义(P<0.05)。NAC预处理后再用幽门螺旋杆菌感染,细胞中NOX4的表达显著降低[NCTC 26695(P<0.001);NCTC 11637(P<0.001)]。结论NOX4/ROS途径可能参与幽门螺旋杆菌对胃癌细胞氧化还原信号的激活。