β-葡聚糖酶高产菌株诱变选育

以木霉(Trichoderma sp.)为出发菌株,通过紫外诱变与光复活交替处理获得了1株高产β-葡聚糖酶突变株UN123。该菌株在摇瓶中的平均酶活大于10000 U/mL,最适反应温度是40℃,90℃条件下保温处理2 h,仍能保持80%以上酶活,最适反应pH是3.0,在pH 2.0~7.0的条件下处理2 h后,相对酶活力保持在80%以上且对胃蛋白酶、胰蛋白酶及凝乳蛋白酶具有良好的耐受性。

复合诱变筛选提高花生粕中AFB1降解率的菌株

选用产葡萄糖氧化酶(GOD)的黑曲霉菌株H-01为诱变出发菌株,经ARTP-NTG复合诱变后,筛选出1株酶活力提高46%的突变株HAN-40。在酶解条件:温度40℃,料液质量体积比1∶5,GOD添加量5 U/g,酶解时间24 h,突变株HAN-40较原始菌株所产GOD对花生粕中AFB1降解率提高了35%,达到92%。

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

选用玉米粉、豆饼粉、KH_2PO_4及Na_2HPO_4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的发酵培养基、培养条件、发酵条件进行优化。确定了优化的发酵培养基为:20g·L^(-1)甘油,30g·L^(-1)豆饼粉,2mmol·L^(-1)氯化钙,0.3g·L^(-1 )KH_2PO_4,4g·L^(-1 )Na_2HPO_4;优化的培养条件为:培养温度30℃,接种量5%。调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵24h酶活达到7 344U·mL^(-1)。进行流加甘油实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和通风量控制溶氧30%～35%,接种量5%,经过30h发酵,酶活达到10 654U·mL^(-1),较未补料提高了45%。

谷氨酰胺转氨酶发酵工艺优化及其酶学性质

[目的]研究茂源链霉菌LD195产TGase的最佳发酵工艺条件,并探讨TGase的酶学特性。[方法]采用L9(34)正交试验对产谷氨酰胺转氨酶的茂源链霉菌菌株培养基和培养条件进行优化。[结果]最佳无机盐配方为Na2HPO42.0 g/L,Mg SO4·7H2O 1.5 g/L,KH2PO42.5 g/L,Ca Cl23.0 g/L,最佳培养条件为培养温度30℃,装液量25 m L,摇床转速200 r/min,接种量10%。该谷氨酰胺转氨酶的最适反应温度为50℃,在40~60℃条件下保温30 min酶活基本没有损失;最适反应pH为6.0,在pH为5.0~7.0条件下保存30 min仍具有85%以上酶活;同时Fe3+、Cu2+、Zn2+会强烈抑制酶的活性。[结论]茂源链霉菌LD195产TGase具有良好的耐酸性和耐热性,在商业化生产中具有广阔前景。

枯草芽孢杆菌产碱性果胶酶发酵条件的优化

通过单因素实验对枯草芽孢杆菌菌株发酵产碱性果胶酶的培养基组分及培养条件进行优化。利用单因素实验确定了产酶的最优培养基:30 g/L豆饼粉、35 g/L马铃薯淀粉、20 g/L果胶、2.775 g/L氯化钙、4.025 g/L硫酸锌、113.6 g/L Na 2HPO 4。同时对温度、接种量、发酵pH进行优化,得到最优发酵条件:温度35℃、接种量3%、发酵过程控制pH=7.4,在此基础上进行补料流加实验,补料配方为350 g/L葡萄糖、10 g/L果胶,补料控制总糖浓度为20 ug/mL,并调整转速和风量控制溶氧30%~40%,最终酶活达到6120 U/mL,较初始酶活1061 U/mL提高了4.77倍。

解淀粉芽抱杆菌产碱性蛋白酶发酵条件的优化

通过单因素试验对解淀粉芽孢杆菌菌株发酵产碱性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化。利用单因素实验确定了产酶的最优培养基:玉米淀粉30g/L,棉籽蛋白粉70g/L,氯化钙3.89g/L,硫酸镁4.21g/L,磷酸氢二钠85.18g/L,磷酸二氢钾81.65g/L;同时对控制工艺进行优化,得到最优发酵条件:接种量4%,温度38T,pH控制7.3,罐压0.05Mpa,通过调整转速和风量,使溶氧水平维持在10%-20%。采用连续补料的方式,补麦芽糖浆控制发酵液的还原糖含量在20g/100g左右;优化后的补料培养基配方为:40%浓度的麦芽糖浆。发酵产酶周期:100h左右。经过上述一系列的优化后,最终酶活达到65200U/mL,较初始配方酶活15680U/mL提高了3.16倍。

芽孢杆菌产碱性蛋白酶的研究进展

本文主要综述了微生物碱性蛋白酶在国内外的应用研究和现状,综述了碱性蛋白酶的结构与功能,产碱性蛋白酶的菌株以及相应碱性蛋白酶的应用及存在的问题,并对碱性蛋白酶应用前景进行了展望。

ARTP-NTG复合诱变选育高产中性蛋白酶菌株

以枯草芽孢杆菌A-06为出发菌株,利用ARTP-亚硝基胍(NTG)复合诱变方法对该菌株进行遗传改造。经过平板初筛,摇瓶复筛,最终筛选出一株酶活提高明显、遗传稳定的菌株N-36。其摇瓶发酵酶活达29 500 U/mL,较出发菌株酶活提高90%左右。

低温脂肪酶菌株的诱变筛选及酶学特性研究

以本公司菌种保藏室的产脂肪酶黑曲霉菌株AG007作为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)诱变筛选得到突变株A45-72,其产脂肪酶的活力较AG007提高了86%。再对A45-72进行亚硝基胍(NTG)复合诱变,得到突变菌株GH-73,其摇瓶发酵酶活达到2 350 U/m L,较出发菌株AG007提高了1.2倍,将GH-73传到第10代,其产酶较稳定。摇瓶中添加2.5%橄榄油作为诱导剂时,产酶能力达到2 875 U/m L。通过酶学特性研究发现,其最适作用温度为30℃,且在0℃左右保留30%的活性,是一种低温脂肪酶。

耐热植酸酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学特性

植酸酶能催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸盐，在食品、医药、饲料等方面有广泛应用。本研究通过PCR获得来源于地衣芽孢杆菌的耐热植酸酶基因P1，并在毕赤酵母中成功表达，得到重组菌BP-1。BP-1在BMMY表达培养基中植酸酶酶活459U／mL．该酶的最适作用pH5．0，最适作用温度为70％，且具有良好的耐热性和耐酸碱性，在80℃条件下保温70min，酶活仍剩余84％，80—95℃保温20min，酶活损失小于20％，在pH4．0—8．5条件下处理30min．酶活仍剩余80％以上。

β-甘露聚糖酶生产菌筛选及酶学特性

以黑曲霉(Aspergillus niger)HQM-2为出发菌株,通过亚硝基胍(NTG)诱变获得了一株高产0-甘露聚糖酶突变株HNTG322。该黑曲霉突变株HNTG322在摇瓶中的β-甘露聚糖酶酶活〉2500U/mL,且传代发酵稳定性良好。所产β-甘露聚糖酶对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有良好的耐受性;且该酶耐酸耐热性良好,在pH2.0-7.0条件下处理2h或90℃保温处理2h后,相对酶活>80%。

ARTP-UV复合诱变选育高产木聚糖酶菌株

以黑曲霉G-1为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)和紫外线(UV)复合诱变技术,筛选到1株酶活提高明显的菌株GAU10-18。经过多次摇瓶复筛验证,其遗传性质稳定,酶活提高明显,摇瓶发酵酶活达到25000 U/mL,较出发菌株提高95%左右。另外,该菌株所产的酸性木聚糖酶具有良好的耐热、耐酸性,在较低温度仍具有很高的酶活性。

UV-NTG复合诱变选育高产糖化酶菌株

以黑曲霉H-08为出发菌株,通过紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)复合诱变技术,筛选到1株酶活力提高明显的菌株UN3-36。经过多次复筛验证,证明其遗传性质稳定,酶活力显著提高,摇瓶的发酵酶活力可以达到19200 U/m L,较出发菌株提高了90%左右。

葡萄糖氧化酶菌株的诱变筛选及酶学特性

以黑曲霉(Aspergillus niger)HG为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)诱变筛选出一株酶活提高的菌株RW8-23,该黑曲霉突变菌株RW8-23在摇瓶中的酶活>210U/mL,比出发菌株HG提高了1.6倍,且传代稳定性较好。所产葡萄糖氧化酶对过氧化氢有良好的耐受性,在过氧化氢浓度为150mmol/L条件下相对酶活为95%;该酶的最适作用温度为35℃,在20~40℃范围酶活较稳定。

适用于饲料行业的产酸性纤维素酶的黑曲霉诱变菌株

针对饲料工业对纤维素酶酶学特性的特殊要求,为得到一株适用于饲料工业且高产酸性纤维素酶的黑曲霉菌种。用0.1%浓度的硫酸二乙酯对一株产酸性纤维素酶的黑曲霉菌种诱变15min,经诱变筛选培养基上透明圈大小的初筛,再将初筛得到的诱变种子,经种子斜面培养基分离活化,摇瓶种子培养基扩培,摇瓶筛选培养基培养后,测定摇瓶发酵液的酶活,复筛高产菌株,最终得到一株酶活水平最高的黑曲霉诱变菌株YB-5628。对该菌株进行种子斜面培养基分离活化,摇瓶种子培养基扩培,种子罐培养基扩培,发酵罐培养基发酵,测定发酵罐最高酶活水平为2062U/mL,较出发菌株提高了1.2倍。对发酵所得的酸性纤维素酶进行酶学特性研究,该诱变菌株所产酸性纤维素酶,在40℃-65℃范围内保持80%以上的酶活。在pH3.8-4.8范围内,能保持80%以上的酶活。该酶学特性符合饲料酶制剂的要求,高发酵酶活水平可使发酵成本进一步降低,能广泛的应用于畜牧及食品行业,提高这些行业的产品竞争力,促进高效绿色的可持续发展。

一株高产木聚糖酶菌株的诱变筛选

以米曲霉(Aspergillus oryzae)HF-201为出发菌株,通过亚硝基胍(NTG)诱变筛选出一株酶活提高的菌株NTG13-86,该米曲霉突变菌株NTG13-86在摇瓶中的酶活达到3500U/ml。再对该菌株进行常温常压等离子体(ARTP)复合诱变,结合抗高浓度葡萄糖阻遏效应,最终筛选出一株抗2-脱氧-D-葡萄糖的高产突变株GAR3-107,该菌株酶活达到5200u/ml,比出发菌株HF-201提高了1.3倍,且传代稳定性较好。

Bacillus sp.LD912碱性木聚糖酶分离纯化及酶学性质研究

从Bacillus sp.LD912发酵液中粗提的碱性木聚糖酶经硫酸铵分级盐析,DEAE Sepharose Fast Flow和sephadexG-100柱层析以及SDS-PAGE电泳检测。Bacillus sp.LD912碱性木聚糖酶分子量约为28.2kDa;LD912碱性木聚糖酶的最适作用温度和pH分别是75℃和pH9.0,在pH 6.5~9.5范围内和温度60~80℃范围内酶活稳定性好。Ca^2+对其有激活作用;Mn^2+、Zn^2+、Fe^3+、Cu^2+等对其具有不同程度抑制作用。在饲料酶制剂、烘焙食品以及纸浆生物物漂白中具有较大潜力和前景。

水解毛桃果酒中花色素苷的β-葡萄糖苷酶酶学特性

花色素苷广泛存在于植物细胞中,是植物花和果实的主要呈色物质。毛桃果酒酿造过程中添加β-葡萄糖苷酶处理后,花色素苷被分解,提升了果酒品质和风味。选取果酒中花色素苷含量最大的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为样品,对β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的特性进行了研究。结果显示:β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的最佳条件为35℃、pH4.0、最佳添加酶量为30 U/mL,Na^+及Fe^(3+)能促进反应进行,适当乙醇浓度对酶活有促进作用,β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的米氏常数Km和Vmax分别为1.175 mg/L和0.221 mg/h·L。