两种丹酚酸的体外抗氧化活性比较研究

目的比较研究两种重要的丹酚酸化合物(丹酚酸A和丹酚酸B)的体外抗氧化活性。方法利用DPPH自由基清除、超氧阴离子清除、抗脂质过氧化、还原能力以及抑制脱氧核糖降解等体外实验,综合评价抗氧化能力。结果丹酚酸B(SAB)的电子传递和超氧阴离子清除能力强于丹酚酸A(SAA);SAA在DPPH自由基清除、抗脂质过氧化以及抑制脱氧核糖降解方面的活性均强于SAB,特别对于羟自由基定位介导的脱氧核糖降解具有显著的抑制作用,提示其为较强的金属离子络合剂。结论 SAA是一种极具开发价值的天然抗氧剂候选化合物,可能通过自由基清除、抗脂质过氧化、抑制脱氧核糖降解以及金属离子螯合发挥抗氧化作用。

注射用丹参酚酸A的含量测定方法研究

目的建立测定注射用丹参酚酸A高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.2%磷酸水溶液(30∶70)为流动相,流速:1mL·min^(-1),检测波长:285nm,柱温:30℃,峰面积外标法定量。结果丹参酚酸A在0.111～2.664μg范围内线性关系良好(r=0.9999,n=7),平均回收率为98.19%,RSD为1.5%。结论本法简便、灵敏、重现性好,适合注射用丹参酚酸A的含量测定和质量控制。

新疆紫草羟基萘醌有效部位制备工艺研究

目的以β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量为指标,研究新疆紫草抗炎有效部位的制备工艺。方法采用高效液相色谱法测定羟基萘醌中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,通过正交设计法优选提取工艺,再经硅胶柱色谱得到羟基萘醌有效部位。结果最佳提取工艺为55℃,15倍量石油醚浸提2h,浸提2次,得到的浸膏经10倍量硅胶柱色谱得到羟基萘醌有效部位。结论此工艺路线成本低,重复性较好,可用于工业化生产,获得较高纯度的羟基萘醌。

RP-HPLC测定苦木生物碱体外对磷酸二酯酶4的抑制活性

目的:建立使用高效液相色谱法体外测定磷酸二酯酶活性的方法,测定分离自中药苦木的单体生物碱体外对磷酸二酯4(PDE4)的抑制活性。方法:从猪血中性粒细胞中制备PDE4,以环腺苷酸(cAMP)为反应底物,使用高效液相色谱法,测定反应底物减少的量,从而测定受试药物对PDE4的抑制活性。阳性药物为Rolipram。色谱条件:Discovery C_(18)反相色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-pH 6.6磷酸缓冲液(10:90);流速为1.0mL·min^(-1);柱温30℃;检测波长254nm。结果:底物cAMP分离良好,无干扰,cAMP浓度在0.5～8.0μmol·L^(-1)时,与相应峰面积呈良好线性关系。PDE4酶样在10～60μL与活性呈良好的线性关系。方法的平均回收率95.7%。4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮、4,5-二甲氧基铁屎米酮、3-甲基铁屎米-2,6-二酮的IC_(50)分别为35.4,30.2,27.2μmol·L^(-1)。结论:苦木中分得的单体生物碱对自猪血中性粒细胞中分离的PDE4有明显的抑制作用。

新疆紫草羟基萘醌类成分对炎症细胞因子的抑制作用

目的研究新疆紫草羟基萘醌化合物对炎症细胞因子的抑制作用。方法采用酶联免疫法测定新疆紫草羟基萘醌化合物对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症细胞因子的抑制作用。采用Griess法测定分离纯化的6种不同羟基萘醌化合物(紫草素、去氧紫草素、乙酰紫草素、β’β-二甲基丙烯酰紫草素、α-甲基丁酰紫草素、异丁酰紫草素)对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放炎症细胞因子一氧化氮(NO)的抑制作用。结果新疆紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放TNF-α和IL-1β具有抑制作用;6种紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放NO具有抑制作用。结论新疆紫草羟基萘醌成分对炎症细胞因子均有不同程度的抑制作用,为进一步研发以炎症因子TNF-α抑制剂为靶向的类风湿关节炎治疗药物提供了一定的理论依据。

丹参酚酸B生产中去除胶体类杂质的工艺方法

胶体类杂质的去除是丹参酚酸B(salvianolic acid B,SB)纯化工艺的难点之一。实验中基于前沿色谱与置换色谱相结合的原则,改良常规大孔吸附树脂柱的操作方法,将树脂按一定的比例装入大小两支柱。小柱与大柱串联,上样至胶体类杂质在小柱上达到吸附饱和,用50%甲醇单独洗脱大柱上的SB部分,利用树脂吸附色谱法实现了SB与胶体类杂质的分离。结果表明,经过去胶体类杂质处理后,SB的加权平均纯度由59.6%提高到64.5%,收率由69.75%提高到80.0%,并且SB的洗脱条件降低。本工艺方法适合于规模化工业生产。

新疆紫草羟基萘醌类化学成分的研究及对PDE_4的抑制作用

目的:研究新疆紫草羟基萘醌的主要成分及对PDE4酶的抑制作用。方法:用硅胶柱层析、制备HPLC和制备TLC等方法分离纯化新疆紫草中羟基萘醌化合物,通过理化性质和光谱数据进行结构鉴定。HPLC方法测定主要羟基萘醌类化合物对PDE4酶的抑制活性。结果:分离鉴定了7个化合物,分别为去氧阿卡宁(1)、阿卡宁(2)、乙酰阿卡宁(3)、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁(4)、α-甲基丁酰阿卡宁(5)、异丁酰阿卡宁(6)和β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(7)。结论:化合物2,5,6为首次从新疆紫草中分离得到。首次评价了新疆紫草羟基萘醌类成分对PDE4酶的抑制作用。

两种紫杉醇注射剂在荷瘤小鼠体内药动学与组织分布的比较研究

目的比较以聚氧乙烯蓖麻油为增溶剂的紫杉醇注射液(Taxol)与以白蛋白为载体的紫杉醇纳米注射剂(ABI)在荷瘤小鼠体内药动学及组织分布的差异。方法 BALB/c小鼠经前肢腋下皮下接种鼠源乳腺癌EMT6细胞,待瘤体长到约1 g,按既定分组经尾静脉分别给予Taxol和ABI,给药剂量以紫杉醇计均为20 mg.kg-1。HPLC-UV测定血浆、瘤组织及心、肝、脾、肺、肾等主要组织器官中紫杉醇含量,并计算相应药动学参数。结果 ABI组动物瘤组织中的紫杉醇AUC高于Taxol组23.3%,而血浆中紫杉醇的AUC则显著低于Taxol组,并具有更大的Vd和CL(P<0.05)。两种不同制剂给药,紫杉醇在心、肝、脾、肾中的分布趋势基本一致,但ABI组动物肺中的紫杉醇分布显著低于Taxol组(P<0.05)。结论和传统紫杉醇注射液相比,白蛋白紫杉醇纳米粒制剂的瘤组织分布靶向性和药动学特性显著改善,应用前景广阔。

牛蒡苷元纳米乳在大鼠体内的药动学研究

目的建立测定牛蒡苷元在大鼠血浆中药物浓度的高效液相色谱法，研究牛蒡苷元纳米乳在大鼠体内的药动学特征。方法血浆样品经乙酸乙酯萃取处理，色谱柱为AgilentC18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-0．2％磷酸水（52：48，V／V），检测波长为280nm，以槲皮素为内标。以4mg·kg^-1的剂量给大鼠iv牛蒡苷元纳米乳，测定不同时间点的血药浓度，用DAS2．1软件计算药动学参数。结果牛蒡苷元在0．1～10mg·L^-1内线性关系良好（r=0．9992），定量下限为0．1mg·L^-1，最低检测限为0．03mg·L^-1,提取回收率在85％以上，日内、日间RSD均小于6％。牛蒡苷元在大鼠体内的过程符合二室模型，分布半衰期和消除半衰期分别为（0．134±0．085）、（1．471±0．164）h。结论本方法可用于测定牛蒡苷元在大鼠血浆中的药物浓度，牛蒡苷元纳米乳在大鼠体内迅速分布，而且消除较慢。

丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的:研究丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b5含量以及CYP1A2和CYP2E1活性的影响。方法:将大鼠分成溶剂对照组和丹参酚酸A给药组,每组10只,雌雄各半,丹参酚酸A给药组尾静脉注射给予丹参酚酸A20mg·kg-1.d-1,连续给药5d;溶剂对照组给予相同剂量的溶剂,紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b5含量;探针底物法评价CYP1A2和CYP2E1的活性。结果:丹参酚酸A尾静脉注射连续给药5d后,大鼠细胞色素P450和细胞色素b5含量与对照组比较均无显著性差异;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较也无显著性差异。结论:丹参酚酸A对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用,与经过CYP1A2和CYP2E1代谢的药物发生相互作用的可能性较小。

丹酚酸B热解产物化学成分的分离与鉴定

目的更好地开发利用丹酚酸B(salvianolic acid B)。方法对质量分数95%丹酚酸B进行热解,热解产物经大孔树脂柱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备液相和重结晶等方法进行分离;根据理化性质、TLC、波谱数据以及MS鉴定产物结构。结果分得8个化合物,分别鉴定为丹参素(1)、咖啡酸(2)、原儿茶醛(3)、紫草酸(4)、迷迭香酸(5)、丹酚酸A(6)、丹酚酸F甲酯(7)、丹酚酸C(8)。结论首次报道丹酚酸B裂解产物的结构。

丹酚酸A中有关物质含量的测定方法

目的:建立一种测定丹酚酸A中有关物质含量的方法。方法:用外标法测定丹酚酸C的含量,采用Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.2%磷酸水溶液(30∶70)为流动相,流速1 mL.min-1,检测波长285 nm,柱温30℃,以主成分自身对照法控制其他杂质的总含量。结果:丹酚酸C的含量均<1.0%,其他杂质峰面积和<3.0%。结论:该方法专属性强,灵敏度高,简单准确,能有效控制丹酚酸A中有关物质的含量。

丹酚酸A中树脂残留溶剂的测定

目的建立丹酚酸A中树脂残留溶剂正己烷、甲基环己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的测定方法。方法采用顶空毛细管气相色谱法进行测定,色谱柱为HP–1701毛细管柱;程序升温,初始温度为40℃,保持3 min后,以8℃.min-1升温至140℃;FID检测器。结果线性关系良好（r〉0.999）,回收率在96.53%-99.32%之间。结论本法简便、准确,适用于丹酚酸A中树脂残留溶剂的测定。

雷公藤红素衍生物的合成与评价

目的以蛋白酶抑制剂雷公藤红素为先导化合物进行结构修饰,以期得到脂溶性的前体药物。方法经常规提取分离得到雷公藤红素(Ⅰ),通过脱水缩合方法和先成盐后酯化方法合成雷公藤红素衍生物;采用MTT法研究了5个衍生物的细胞毒活性。结果合成的5个衍生物经结构确证为雷公藤红素甲酯(Ⅱ)、雷公藤红素苄酯(Ⅲ)、雷公藤红素正十六醇酯(Ⅳ)、雷公藤红素环氧丙酯(Ⅴ)和雷公藤红素酰胺(Ⅵ);5个衍生物除雷公藤红素酰胺外,其余4个衍生物的细胞毒活性与母体相当,均比阳性对照药顺铂的细胞毒活性强。结论首次合成了雷公藤红素酯类衍生物,且具有较强细胞毒活性。

冬凌草甲素衍生物的制备和评价

目的为研究冬凌草甲素的构效关系,对冬凌草甲素进行结构修饰,合成其衍生物,并评价其细胞毒活性。方法经常规提取分离得到冬凌草甲素(Ⅰ);通过氧化和酰基化,制备冬凌草甲素衍生物,所获产物采用NMR和MS确证结构;采用MTT法观察衍生物的细胞毒活性。结果制备了6个冬凌草甲素的衍生物,分别为14-乙酰基冬凌草甲素(Ⅱ)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(Ⅲ)、14-对甲苯磺酰基冬凌草甲素(Ⅳ)、1-氧代冬凌草甲素(Ⅴ)、14-乙酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅵ)、14-对甲苯磺酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅶ),其中化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为3个新化合物。初步药理实验表明部分衍生物细胞毒活性高于冬凌草甲素。结论首次评价了1-氧代冬凌草甲素衍生物的细胞毒活性,其活性高于冬凌草甲素。

紫草羟基萘醌对大鼠肝微粒体CYP2D6的影响

目的研究紫草羟基萘醌(HNA)对大鼠肝微粒体CYP2D6的影响。方法 Wistar大鼠,♂,口服给予不同剂量的HNA(5,60 mg.kg-1.d-1)或等量的空白溶媒,连续给药2周后制备肝微粒体。以体外探针药物右美沙芬的代谢物右啡烷的生成速率来反映CYP2D6的活性,通过比较给药组与空白溶媒组酶活性的差异来评价HNA对大鼠肝微粒体CYP2D6的影响。结果建立了一种以右美沙芬为探针底物评价大鼠肝微粒体CYP2D6活性的方法。口服给予HNA两周后,两个剂量组大鼠的肝微粒体蛋白含量、细胞色素P450总量、b5含量以及CYP2D6的活性与空白溶媒组相比差异均无统计学意义。结论 5 mg.kg-1.d-1和60 mg.kg-1.d-1剂量的紫草羟基萘醌口服2周对Wistar大鼠肝微粒体CYP2D6的活性均无显著影响,没有明显的诱导或抑制作用。