中医药类硕士研究生细胞培养实验技术课程教学改革探索

如何使中医药类硕士研究生熟练掌握细胞培养技术,并能灵活应用于中医药研究中是中医药高等院校开展细胞培养实验技术课程的首要任务。针对山西中医药大学开展细胞培养实验技术课程的教学现状,我们从优化实验内容,调整教学模式;强调细节,夯实基本功;优化教学资源,注重教师队伍建设;重视教学效果评价,构建合理的考核评定体系等4个方面进行了教学改革探索,以期提升课程的教学质量,增强中医药类硕士研究生的科研创新能力。

高等中医药院校制药工程专业英语词汇教学策略探讨

制药工程作为一门交叉学科,其专业英语词汇数量巨大、覆盖面广,如何在有限学时里让学生掌握大量词汇是课程的难点之一。文章结合制药工程专业英语词汇特点及实际教学经验,对树状发散式和系统归纳式词汇教学方法进行探讨,以提高制药工程专业学生专业英语词汇的学习效率。

实验室基本技术和中医学综合实验指导课程调查问卷分析

为了更好地了解实验室基本技术和中医学综合实验指导课程的教学情况,采用问卷的方式对修完本课程的研究生进行了调查,力求探讨一种更符合中医药院校研究生需求的实验课程教学模式。问卷的统计和分析结果显示,学生对课程内容、教师教学、考核、教学效果等方面都较为满意,并对课程提出了中肯的建议。这为该课程的发展、改革和探索提供了一定的依据。

念珠藻类(蓝藻)psb A基因的进化分析

蓝藻psbA基因家族编码不同形式的D1蛋白,该蛋白是光系统II反应中心的重要组成部分.以39条念珠藻属(Nostoc)及与其同源性较高的psbA基因序列为研究对象,构建最大似然树进行系统发育分析,然后运行PAML4.9软件,使用分支模型、位点模型和分支-位点模型估测氨基酸位点ω值,进一步探讨psbA基因所受到的选择压力.结果表明:(1)系统发育树呈现出内类群中念珠藻分为2个大分支.(2)在分支-位点模型和位点模型下检测出13S,42V,75S,152R和255K为统计学上显著的正选择位点,绝大多数为负选择位点.揭示了念珠藻psbA基因所经历的正选择可能在其适应极端环境中起着重要作用.

防治病毒性肺炎中连花清瘟胶囊重要靶点DPP4的生物信息学分析

目的通过生物信息学的方法对DPP4基因与蛋白进行系统的分析,为DPP4在病毒侵入宿主细胞和连花清瘟胶囊等药物防治等方面的研究打下生物信息学基础。方法首先分析DPP4蛋白的亲疏水性、信号肽结构、跨膜结构等基本性质,再通过SOPMA、SWISS-MODEL、STRING、MEGA-X等软件分析蛋白质的结构、相互作用关系、进化关系等高级属性进行分析,并通过其性质和属性分析DPP4在病毒侵入和药物治疗原理方面的作用。结果DPP4是一个亲水性非经典分泌蛋白,具有一个跨膜结构,并在小肠中表达较为丰富,在细胞中主要分布在内质网。DPP4的翻译后修饰位点较多,三级结构呈较为特殊的哑铃形,蛋白主要涉及糖代谢调控、炎性反应以及病毒侵入宿主细胞等生物过程。人类DPP4蛋白与啮齿类动物DPP4蛋白的亲缘性较差。结论连花清瘟胶囊对DPP4具有明确的靶向作用,并且DPP4蛋白与病毒侵入人体密切相关,因此其对病毒性肺炎的防治效果是可靠且明确的。

基于血清代谢组学与网络药理学探究复方苦参注射液治疗肺癌的作用机制

目的:运用血清代谢组学、网络药理学及分子对接技术探讨复方苦参注射液(CKI)中生物碱类成分在治疗肺癌时的作用机制。方法:采用Lewis小鼠肺癌瘤株接种于C57小鼠建立肺癌模型,将雄性小鼠随机分为正常组、模型组和CKI组。尾静脉注射给药,每日1次,连续17 d。通过超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS)代谢组学技术对小鼠血清进行检测,采用主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析,结合人类代谢数据库(HMDB)等数据库和相关文献指认、鉴定差异代谢物,通过MetaboAnalyst在线工具寻找相关的代谢途径。采用网络药理学,构建CKI治疗肺癌的“成分-靶点-疾病”网络。采用分子对接法验证潜在活性成分与核心靶点的相互作用。将血清代谢组学与网络药理学联合分析构建“代谢物-反应-酶-基因”网络。结果:通过代谢组学技术,从血清中筛选出与肺癌相关的16种差异代谢物,与模型组相比,CKI能回调这些差异代谢物水平。代谢通路主要涉及视黄醇代谢、色氨酸代谢、甘油磷脂代谢等代谢途径。网络药理学分析表明CKI治疗肺癌主要作用于STAT3、MAPK3、MAPK1等靶点蛋白,与肿瘤中的蛋白聚糖、细胞衰老、HIF-1信号通路密切相关。结论:本研究从代谢组学与网络药理学的角度阐释了CKI在治疗肺癌时的作用机制,为进一步研究CKI提供基础。

响应面法优化黄芪蛋白水解工艺及其抗氧化活性研究

目的优化黄芪蛋白水解液工艺条件,并考察其体外抗氧化活性。方法在单因素试验的基础上,选择温度、pH、酶用量、酶解时间为影响因素,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,采用中心组合Box-Benhnken法建立数学模型,进行响应面分析。结果黄芪水解蛋白的最佳酶解条件为酶解温度50℃、pH值3、酶用量800 U/g、酶解时间8 h,该条件下水解度为52.96%,DPPH自由基清除率为80.64%,O_(2)^(-)×清除率为98.93%,·OH清除率为74.83%,还原能力为2.3。结论黄芪蛋白水解液具有较强的抗氧化活性,可作为一种天然食品抗氧化剂或抗衰老、抗氧化饮品。

蛇床子搽剂的质量标准研究

目的:初步拟定蛇床子搽剂(简称为"搽剂")的质量标准。方法:观察搽剂的性状,采用薄层色谱法对搽剂中蛇床子素进行定性鉴别并对搽剂的相对密度、含醇量和p H值等进行测定,采用高效液相色谱法对搽剂中蛇床子素和欧前胡素进行定量分析。结果:3批样品均为红棕色液体,气香。在供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显现出相同颜色的荧光斑点。蛇床子素和欧前胡素检测质量浓度的线性范围分别为0.101 2~0.910 8、0.006 2~0.124 4 mg/L(r均为0.999 6),精密度试验的RSD分别为1.38%、0.79%(n=6),稳定性试验的RSD分别为0.33%、0.41%(n=6),重复性试验的RSD分别为0.83%、1.98%(n=6),平均加样回收率分别为98.73%、99.25%(RSD分别为1.29%、1.22%,n=6);含量测定结果显示,3批样品中蛇床子素含量为2.20~2.35 mg/m L,欧前胡素为0.310~0.340 mg/m L。结论:建立的方法操作简单、快速、准确,可用于蛇床子搽剂的质量控制。

燃料乙醇产业发展现状及推广建议

介绍了燃料乙醇的发展现状,综述了石油基乙烯、煤基合成气和生物质三类原料制备乙醇的工艺技术,并对我国乙醇生产企业的产业发展现状进行分析,进而对绿色生产燃料乙醇的技术研发和产业化提出一些建议。

芩倍合剂提取工艺研究

芩倍合剂由黄芩、五倍子、黄连、骨碎补、儿茶五味药组方,通过水提取工艺制成合剂,具有清热解毒,消肿止痛的功效,本品经牙周袋给药可以提高慢性牙周炎的疗效。方中君药黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根,现代药理研究^[1]表明:黄芩具有较好的抗炎和成骨活性,其中黄芩苷是活性成分,且黄芩对牙周炎常见厌氧菌也有一定的体外抗菌活性。另有文献报道[2-5],五倍子、黄连、骨碎补、儿茶具有抗病原微生物、抗菌、抗炎等作用。因此选择黄芩所含有效成分黄芩苷含量及干浸膏率为考察指标,按正交试验设计表设计L9(34)试验优选最佳工艺。报告如下。

基于谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4轴探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的作用机制

目的观察雷公藤甲素对铁代谢和脂质过氧化的影响,探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的可能机制。方法利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞HL7702和C57BL/6J小鼠,或利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和雷公藤甲素共同处理HL7702细胞,CCK-8法检测细胞存活率;普鲁士蓝染色观察铁沉积;试剂盒检测铁离子、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;qRT-PCR或Western blotting检测转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)的表达。结果雷公藤甲素显著降低细胞存活率(P<0.05),引起铁沉积,升高血清中ALT、AST活性(P<0.05),增加HL7702细胞和小鼠肝组织中铁离子、MDA含量(P<0.05),降低GSH含量、SOD活性和GPX4表达(P<0.05),上调TFR1、PTGS2及ACSL4表达(P<0.05)。Fer-1显著上调细胞存活率和GPX4表达量(P<0.05),显著下调铁离子含量、TFR1、PTGS2及ACSL4表达(P<0.05)。结论雷公藤甲素可能通过GSH/GPX4轴引起铁代谢异常和脂质过氧化,诱导肝细胞铁死亡。

基于肠道代谢组的中药药效物质基础和作用机制研究

中药药效物质是中药作用机制和质量控制研究的基础,也是中医药传承和创新发展的关键科学问题。然而中药多组分、多靶点、整体性的复杂特点,以及现代科学研究技术方法的限制,为中药药效物质研究带来了极大挑战。中药与肠道菌群的相互作用提供了一种新思路。基于肠道代谢组的中药药效物质基础与作用机制研究,多以中药的有效作用以及肠道菌群与疾病的相关性假设为基础,探究微生物群和宿主表型之间的关系,逐步深入,最终聚焦肠道菌株和肠道代谢物在分子水平的联系。本文对该模式的研究策略及关键技术进行了归纳总结,以期为本模式的应用提供参考。

抑制细胞自噬加剧雷公藤甲素所致小鼠肝毒性的研究

目的探讨细胞自噬与雷公藤甲素所致小鼠肝毒性之间的联系。方法将小鼠随机分为空白组、模型组、对照组和实验组,每组10只。模型组给予腹腔注射0.8 mg·kg^(-1)雷公藤甲素(40 mg·mL^(-1));对照组给予腹腔注射50 mg·kg^(-1)氯喹(3 mg·mL^(-1));实验组给予腹腔注射0.8 mg·kg^(-1)雷公藤甲素(40 mg·mL^(-1))+50 mg·kg^(-1)氯喹(3 mg·mL^(-1));空白组给予腹腔注射等量0.9%NaCl;4组小鼠每2 d给药1次,连续给药3次。用蛋白质印迹法检测肝组织中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物西罗莫司靶蛋白(p-mTOR)的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)和Caspase-9的表达情况。结果模型组和空白组的LC3Ⅱ蛋白相对表达水平分别为1.18±0.07和0.69±0.04,p-Akt蛋白相对表达水平分别为0.60±0.19和1.46±0.08,p-mTOR蛋白相对表达水平分别为0.69±0.09和1.09±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组、对照组、模型组和空白组的Caspase-3含量分别为(0.30±0.01)、(0.12±0.01)、(0.19±0.03)和(0.11±0.01)pmol·g^(-1),Caspase-9含量分别为(0.33±0.02)、(0.21±0.02)、(0.27±0.02)和(0.21±0.02)pmol·g^(-1);模型组的上述指标与实验组和空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论雷公藤甲素可能通过抑制Akt/mTOR信号通路上调肝组织中细胞自噬活性,而抑制细胞自噬会加剧雷公藤甲素肝毒性。

黑玉米菠萝复合饮料的研制及其抗氧化作用

以黑玉米、菠萝为主要原料研制黑玉米菠萝复合饮料,并评价复合饮料品质及抗氧化活性。以感官评分为评价指标,基于单因素试验,采用模糊数学感官评价结合响应面法优化复合饮料配方;以离心沉淀率为评价指标,通过单因素和正交试验得到复合稳定剂最佳配比;测定最佳条件下黑玉米菠萝饮料总固形物含量、菌落总数、大肠菌群数及其对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基的清除能力。结果表明,复合饮料最优配方为:黑玉米汁和菠萝汁体积比为3.5:1,白砂糖、柠檬酸添加量分别为4.80%、0.08%;复合稳定剂最佳配比为:黄原胶、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠添加量分别为0.09%、0.15%、0.25%;在此最佳配方条件下,复合饮料感官评分为94.14分,离心沉淀率为3.98%。复合饮料总固形物含量为11.40%,细菌总数小于100 cfu/mL,大肠菌群未检出,均符合相关国家标准及规定;复合饮料对DPPH自由基、ABTS自由基及羟自由基清除率分别为86.27%、94.42%和64.71%,表明其具有良好的抗氧化能力。

基于PSD-95-NMDAR-nNOS通路研究针刺对单眼形觉剥夺大鼠视皮质神经细胞突触可塑性

目的:研究针刺对单眼形觉剥夺大鼠视皮质神经细胞突触可塑性以及对NMDAR1表达调节的影响。方法:14日龄SD初生幼鼠30只,随机分为空白组、模型组、治疗组,各10只。除空白组外其余各组均右侧眼睑缝合制作形觉剥夺弱视模型。针刺治疗组大鼠右侧睛明、风池,大椎,隔日1次,每次10min,治疗30d。采用实时定量PCR技术,检测各组幼鼠视皮质NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA表达显著降低(P<0.01),治疗组NMDR1 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:针刺可以提高形觉剥夺性弱视大鼠视皮质NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA的表达,增加神经细胞突触后信号传导。

红花注射液对肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:探讨红花注射液对肺纤维化小鼠的影响及其机制是否与转化生长因子(TGF)-β1/Smad3信号通路有关。方法:60只雌性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组(3mg·kg^(-1)·d^(-1),地米组)及红花注射液组(50mg·kg^(-1)·d^(-1),红花组),每组15只。除空白组外,其余3组经鼻腔滴注博来霉素建立肺纤维化模型。造模后第1天起,各组腹腔注射相应的药物连续治疗28d。给药后的第28天取材,对肺组织行HE染色观察肺泡炎改变,ELISA测定肺组织TNF-α和IL-1β含量变化;Masson染色来评价肺纤维化程度;免疫组化和Western Blot法检测肺组织TGF-β1、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠的肺泡炎和肺纤维化程度显著加重;肺组织中TNF-α和IL-1β含量显著增多(P<0.01);TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达显著增多(P<0.01)。与模型组比较,红花组和地米组小鼠的肺泡炎、肺纤维化程度明显减轻;肺组织中TNF-α和IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01),且红花组上述各项指标改善优于地米组(P<0.05,P<0.01)。结论:红花注射液可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,下调α-SMA表达,来减轻博来霉素致小鼠肺纤维化。