黄芩苷对心肌梗死模型大鼠心肌细胞及其免疫功能的影响

目的研究黄芩苷对心肌梗死模型大鼠心肌细胞及其免疫功能的影响。方法随机将24只SD大鼠分为假手术组、模型组与黄芩苷组,每组8只。假手术组采用丝线穿至左前降支根部,但不进行结扎;模型组和黄芩苷组采用丝线结扎左前降支。造模当天开始灌胃,1次/d,持续30 d,其中假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,黄芩苷组给予100 mg/kg黄芩苷。比较三组大鼠的心功能指标心率(HR)、左心室舒张末压(LVEDP)及左心室收缩压(LVSP)、心肌组织形态学、细胞凋亡率、蛋白酶激活受体2(PAR-2)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白的表达水平、免疫功能指标T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))变化情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠心功能指标LVSP、Bcl-2水平降低(P<0.05),LVEDP、心肌组织蛋白Bax、PAR-2水平升高(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷组大鼠心功能指标LVSP、Bcl-2水平升高(P<0.05),LVEDP、Bax、PAR-2水平降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)均明显提高(P<0.05),而CD4^(+)/CD8^(+)明显降低(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷组CD3^(+)、CD8^(+)降低(P<0.05),CD4/CD8提高(P<0.05),CD4^(+)无明显变化(P>0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠鼠心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论黄芩苷有助于改善心肌梗死大鼠心功能,改善心肌组织的免疫功能,降低心肌细胞凋亡率,可能机制为上调Bcl-2、PAR-2蛋白水平,下调Bax蛋白表达。

黄芩苷对老年人骨髓间充质干细胞增殖能力和凋亡水平的影响及机制

目的:探讨黄芩苷对老年人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)增殖能力和凋亡水平的影响及机制。方法:采用全骨髓贴壁法体外分离、培养老年hBM-MSCs。将老年hBM-MSCs用不同浓度的黄芩苷(0、0.5、1、10、50、100、500、1000μM/L)处理3 d,用CCK-8法检测黄芩苷对老年hBM-MSCs的细胞毒性作用,筛选适合的黄芩苷浓度;在适合的浓度范围内(0.5、1、10μM/L),用细胞计数法检测黄芩苷对老年hBM-MSCs增殖能力的影响,并筛选出最适药物浓度。将老年hBM-MSCs分为对照组和黄芩苷组,用Annexin-V和PI染色法检测黄芩苷对老年hBM-MSCs凋亡水平的影响;用Westernblot印迹法检测凋亡相关蛋白caspase 3、bcl-2、Bax蛋白水平的表达,ELISA法检测SOD、MDA的含量。结果:0.5、1、10μM/L黄芩苷对老年hBM-MSCs具有最小毒性,浓度大于50μM/L时,呈现明显细胞毒性表现;与对照组比较,0.5、1μM/L和10μM/L黄芩苷处理的老年hBM-MSCs增殖能力显著提高(P<0.01),1μM/L和10μM/L黄芩苷处理的老年hBM-MSCs增殖能力更强;黄芩苷组细胞Bax、caspase 3的表达水平显著下降,Bcl-2表达升高,MDA含量下降,SOD含量升高(P<0.05)。结论:黄芩苷可提高老年hBM-MSCs的增殖能力,降低凋亡水平,而这些可能是通过抗氧化应激反应实现的。

SIRT6对老年人皮肤成纤维细胞迁移能力和增殖能力的影响及机制研究

目的探讨沉默信息调节因子2同源类似物6(SIRT6)对老年人皮肤成纤维细胞迁移能力和增殖能力的影响及机制。方法在山西医科大学第二附属医院泌尿外科取不同年龄患者包皮环切术切取的包皮组织,其中老年组8例,青年组8例。用胶原酶消化法提取人皮肤成纤维细胞,Western印迹法检测不同年龄组人皮肤成纤维细胞中SIRT6和磷酸化p65蛋白(p-p65)的表达,划痕实验检测细胞迁移活性,CCK8法检测细胞增殖活性。将老年组皮肤成纤维细胞分成两组,一组用SIRT6慢病毒感染使其SIRT6表达增高作为SIRT6组,另一组以空病毒感染作为对照组,用上述方法分别检测SIRT6组和对照组细胞迁移活性、增殖活性和p-p65蛋白表达水平,实时PCR检测两组Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白、整合素亚基α3、α5和β1 mRNA的表达。采用GraphPad Prism 5软件进行统计学分析,t检验分析两组之间数据的差异。结果老年组皮肤成纤维细胞SIRT6表达水平(0.434±0.179)显著低于青年组(1.000±0.067,t=3.040,P=0.012),p-p65表达水平(1.694±0.148)显著高于青年组(1.000±0.093,t=2.949,P=0.015),迁移率(43.81%±18.84%)显著低于青年组(94.63%±12.32%,t=5.903,P=0.003),24、48 h增殖活性也较青年组显著下降(P<0.05)。老年组成纤维细胞过表达SIRT6后,与对照组相比,p-p65表达显著下降(P<0.05),迁移能力和增殖能力显著提高(P<0.05),同时Ⅲ胶原蛋白和整合素亚基α3、α5和β1的mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论SIRT6可提高老年人成纤维细胞的迁移能力和增殖能力,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。

黄芩苷对老年人骨髓间充质干细胞血管新生能力的影响

目的 观察黄芩苷对老年人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)血管新生能力的影响。方法 (1)将收集和培养的hBM-MSCs细胞分为青年对照组、老年对照组和老年用药组,用成管实验检测三组细胞的血管新生能力;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测三组细胞分泌促血管生成因子的能力。(2)用结扎左冠状动脉前降支的方法将小鼠制备心肌梗死(MI)模型后,将小鼠分为空白对照组、青年移植组、老年移植组和老年移植用药组。干细胞移植后用B超观察大鼠心脏功能。结果 青年对照组、老年对照组和老年用药组三组hBM-MSCs细胞的相对成管数量分别为19.56±3.86,8.67±2.49, 13.78±2.30;内皮细胞生长因子A的相对表达水平为1.00±0.16,0.27±0.03,0.39±0.06;成纤维细胞生长因子2的相对表达水平为1.00±0.08, 0.48±0.12, 0.79±0.17。以上指标,老年对照组与青年对照组相比,或老年用药组细胞与老年对照组相比,差异均有统计学差异(均P<0.05)。体内实验中,空白对照组、青年移植组、老年移植组和老年移植用药组4组小鼠的左心室射血分数造模前分别为(83.40±7.45)%,(85.80±9.33)%,(86.72±6.29)%,(87.56±7.61)%;细胞移植后21 d 4组小鼠左心室射血分数分别为(54.56±4.43)%,(75.83±2.61)%,(63.32±1.56)%,(67.41±3.22)%;老年移植用药组与老年移植组相比,移植干细胞21 d左心室射血分数显著提高(P<0.05)。结论 黄芩苷可促进老年hBM-MSCs的血管新生能力,从而改善老年hBM-MSCs移植治疗小鼠MI模型的心脏功能。