潞党参口服液对慢性脑缺血小鼠气体信号分子和神经炎症因子的影响

目的研究潞党参口服液对慢性脑缺血(Chronic Cerebral Ischemia,CCI)小鼠气体信号分子和神经炎症因子的影响。方法将SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组和潞党参口服液低、中、高剂量(4.25、8.5、17 g·kg^(-1))组,每组12只。假手术组只分离相关血管,模型组和给药组复制双侧颈总动脉狭窄(Bilateral CCA Stenosis,BCAS)模型。假手术组和模型组灌胃生理盐水,给药组灌胃潞党参口服液,连续灌胃30 d。HE染色法观察海马CA1区病理变化;免疫荧光染色法检测脑组织基质金属蛋白酶2(MMP2)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达;Western Blot法检测脑组织血红素氧合酶1(HO-1)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和3-巯基丙酮酸转硫酶(3-MST)表达水平;相关检测试剂盒测定脑组织硫化氢(H2S)、一氧化碳(CO)、一氧化氮(NO)的含量和胱硫醚β合成酶(CBS)的表达水平。结果HE染色结果显示,与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元细胞数量明显减少,排列散乱,部分神经细胞核固缩甚至坏死,而不同浓度的潞党参口服液可改善上述病理变化。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组HIF-1α和MMP2蛋白表达增加(P<0.001);与模型组比,潞党参口服液低剂量组(P<0.01,P<0.05)和中、高剂量组(均P<0.001)能够降低HIF-1α、MMP2蛋白增加。Western Blot结果显示,与假手术组比较,模型组HO-1和3-MST蛋白表达明显降低(均P<0.001),iNOS蛋白表达明显升高(P<0.001);与模型组比,潞党参口服液低、中、高剂量组明显降低iNOS蛋白表达(P<0.01,P<0.001),潞党参口服液中、高剂量组明显升高HO-1和3-MST蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。试剂盒检测结果显示,与假手术组比较,模型组NO含量明显升高(P<0.001),H2S、CO含量及CBS蛋白表达明显降低(P<0.001);与模型组比,潞党参口服液低、中、高剂量组可升高H2S含量(P<0.05,P<0.001),潞党参口服液中、高剂量组升高CO含量和CBS蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001),潞党参口服液高剂量组明显降低NO含量(P<0.01)。结论潞党参口服液可能通过调节气体信号分子,抑制神经炎症因子实现对慢性脑缺血小鼠的保护作用。

潞党参通过PI3K/AKT/GSK3β通路缓解运动性疲劳的作用机制研究

目的:对潞党参缓解运动性疲劳的作用及机制进行初步研究。方法:将小鼠随机分为对照组、人参总皂苷(20 mg/kg)阳性对照组及潞党参低(4.25 g/kg)、中(8.5 g/kg)、高(17 g/kg)剂量组,采用转棒实验和负重游泳实验评价潞党参缓解运动性疲劳的作用;采用生化检测方法检测小鼠血清LA、BUN、肝糖原、肌糖原及肝脏中T-SOD、MDA水平;运用蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏和骨骼肌中p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β、GS蛋白表达。结果:与对照组比较,潞党参中、高剂量组小鼠转棒停留时间和负重游泳时间均显著延长,血清中BUN含量显著降低,肝糖原、肌糖原含量显著升高,肝脏中MDA含量显著降低,T-SOD活性显著升高,肝脏及骨骼肌中p-AKT、p-PI3K、p-GSK3β、GS蛋白表达显著升高,潞党参高剂量组血清LA水平显著降低(P<0.05~P<0.001)。结论:潞党参可能通过减少代谢产物堆积、促进抗氧化和升高糖原合成等途径起到缓解运动疲劳的作用,该作用机制可能与激活小鼠肝脏和骨骼肌中PI3K/AKT/GSK3β信号通路及相关蛋白GS有关。

六经头痛片治疗脑缺血作用机制的网络药理学和分子对接研究

目的利用网络药理学方法预测六经头痛片治疗脑缺血的核心成分和靶点,并通过分子对接初步验证。方法在TCMSP、CRD、HERB数据库查询六经头痛片9味组成药物的化学成分,在PubChem和Swiss ADME平台获取化学成分SMILES结构并进行标准化,利用化合物SMILES结构在SEA数据库进行靶点预测;在OMIM、Drugbank、CTD数据库获得脑缺血疾病靶点,利用Venny 2.0获得药物和疾病的共同靶点,把共同靶点放入STRING 11.5数据库进行PPI分析,利用Cytoscape 3.7.2绘制PPI网络以及六经头痛片治疗脑缺血“药物-化学成分-靶点-通路”网络图;利用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接。结果共得到六经头痛片63个有效化学成分和200个作用靶点,药物和疾病共同靶点27个,筛选得到核心化学成分β-石竹烯(Beta-Caryophyllene,BCP)、6-去氢姜二酮(6-Dehydrogingerdione,6-DG)、薄荷酮(Menthone)、落叶松脂醇(Lariciresinol),以及关键靶点白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、转录因子AP-1(Transcription factor AP-1,JUN)、半胱天冬酶3(Caspases3,CASP3)。结论六经头痛片中的β-石竹烯、6-去氢姜辣二酮、薄荷酮、落叶松脂醇可能通过作用于IL-6、TNF-α、JUN、CASP3从而发挥治疗脑缺血疾病的疗效。

肝宁胶囊的质量标准研究

目的:对肝宁胶囊质量标准进行研究。方法:采用薄层色谱法对处方中的紫草进行定性鉴别;采用气相色谱法对处方中的斑蝥素进行含量测定。结果:在薄层色谱中可检出紫草的特征斑点;斑蝥素在0.013 8μg^0.124 2μg(r=0.999 9)范围内线性关系良好,回收率为98.466%(RSD=1.92%,n=5)。结论:本方法简便可行、重复性好,能有效控制该制剂的质量。

潞党参口服液对慢性脑缺血小鼠脑血流量及认知功能的影响

目的观察潞党参口服液对慢性脑缺血(chronic cerebral ischemia,CCI)小鼠脑血流量(cerebral blood flow,CBF)及认知功能的影响。方法将SPF级C57 BL/6 J雄性小鼠按随机数表法分为5组,分别为假手术组、模型组和潞党参口服液4.25 g·kg^(-1)组、潞党参口服液8.5 g·kg^(-1)组、潞党参口服液17 g·kg^(-1)组,每组12只,假手术组只分离相关血管,模型组和给药组复制双侧颈总动脉狭窄(bilateral CCA stenosis,BCAS)模型,假手术组和模型组灌胃生理盐水,给药组灌胃潞党参口服液,连续灌胃30 d。采用激光散斑血流成像系统观察小鼠术前及术后多个时间点(2 h、2 d、4 d、7 d、14 d、30 d)前额叶局部CBF,应用旷场实验、新物体识别实验和Morris水迷宫实验等行为学方法评价认知功能。结果术后小鼠前额叶CBF骤降,以术后2 h最明显,至术后30 d仍低于正常水平,同时小鼠出现认知功能障碍。旷场实验观察到各组之间自主行为差异无统计学意义,相较于假手术组,模型组新物体识别指数降低,差异有统计学意义(P<0.05),逃避潜伏期显著增长,差异有统计学意义(P<0.05),穿过平台次数减少,差异有统计学意义(P<0.05),第Ⅲ象限的时间及路程百分比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相较于模型组,潞党参口服液高剂量组新物体识别指数显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),潞党参口服液中、高剂量组穿越平台的次数增加,差异有统计学意义(P<0.05),逃避潜伏期降低,差异有统计学意义(P<0.05);潞党参口服液低、中、高剂量组在第Ⅲ象限停留时间及路程百分比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双侧颈总动脉狭窄法可造成小鼠出现慢性CBF下降进而导致小鼠出现持续性认知功能障碍;潞党参口服液能够增加CCI小鼠局部CBF,改善认知功能,且具有量效关系。

桑杞胶囊中总蒽醌含量测定的研究

目的建立桑杞胶囊中总蒽醌的含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法采用紫外分光光度法,检测波长为523 nm,0.5%醋酸镁甲醇显色。结果总蒽醌含量在0.001 3~0.026 mg范围内与吸收度线性关系良好,回归方程为:A=29.761C+0.157 9,r=0.999,加样回收率为89.97%,R SD=4.67%。结论该方法准确、灵敏、高效,可为桑杞胶囊总蒽醌的含量测定提供参考。

风湿宁胶囊对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡线粒体途径的影响

目的:观察风湿宁胶囊(FSN)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞的促凋亡作用并探讨其作用机制。方法:制备CIA大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、CIA模型组、雷公藤多苷组、FSN低、中、高剂量组。采用ELISA法检测滑膜细胞色素C(Cytochrome C)含量,免疫组化法检测滑膜中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达,Western Blot法分析FSN对滑膜含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:FSN能够明显升高Cytochrome C水平(P<0.05),下调Bcl-2蛋白的阳性表达,促进Caspase-3蛋白的表达(P<0.05)。结论:风湿宁胶囊能诱导CIA大鼠滑膜细胞凋亡,其促凋亡机制可能与抑制Bcl-2表达,促进Cytochrome C释放入胞浆,激活Caspase-3介导的细胞凋亡线粒体途径有关。

风湿宁胶囊中挥发油的提取及包合工艺优选

目的:优选风湿宁胶囊中挥发油的提取与包合工艺。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以提取量为指标,通过单因素试验考察加水量、提取时间对提取工艺的影响;采用饱和水溶液法包合挥发油,以包合率为指标,通过正交试验考察挥发油与β-CD的比例、包合时间及包合温度对包合工艺的影响。结果:最佳提取工艺为加14倍量水提取4 h;最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精的比例1∶8,包合温度40℃,包合时间3 h。结论:优选的挥发油提取与包合工艺条件稳定可行。

决明子提取物的FTIR光谱特性及与药效间的关联性

目的:为了寻求简便快速鉴别决明子不同提取物的方法,并结合药效学实验结果,识别决明子降脂有效部位的光谱特征。方法:采用分辨率高、重现性好、简便快捷的FTIR光谱法,研究了决明子6种不同极性提取溶剂所得提取物的FTIR光谱特征,并结合药效学实验结果做了分析。结果:决明子6种溶剂提取物的红外光谱图有明显的区别。吸收峰高低有显著变化的是3 008.0cm-1,1 745.9cm-1和1 653.7cm-1的吸收峰。结论:决明子的乙酸乙酯提取物是降脂的有效部位之一。

六经头痛片质量标准

目的:研究六经头痛片以提高其质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中白芷、葛根进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中葛根素含量,岛津C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1 mL.min-1,流动相甲醇-0.025 mol.L-1磷酸溶液(20∶80),柱温30℃,检测波长250 nm。结果:在薄层色谱中均可检出白芷、葛根的特征斑点;葛根素在0.042～0.378μg线性关系良好(r=0.999 9),回收率98.368%(RSD 1.87%)。结论:方法简便可行、重复性好,能有效控制该制剂的质量。