线粒体自噬在糖尿病因素影响七氟醚后处理心肌保护作用中的机制

目的探讨线粒体自噬在糖尿病因素影响七氟醚后处理心肌保护作用中的机制,为心肌保护提供新的策略.方法清洁级健康雄性SD大鼠32只,7~8周龄,体质量250~300g,采用数字表法随机分为4组(n=8),即非糖尿病缺血再灌注组(NI/R组)、非糖尿病七氟醚后处理组(NSP组)、糖尿病缺血再灌注组(DMI/R组)和糖尿病七氟醚后处理组(DMSP组).以高脂高糖饲养和腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病模型.采用结扎左冠状动脉前降支30min再灌注120min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,其中NSP组和DMSP组于再灌注前1min吸入七氟醚,维持呼气末浓度2.5%,持续5min.于再灌注120min后颈动脉采血取样,ELISA法测定血清肌钙蛋白(cTnI)浓度;采用1%2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;透射电镜下观察心肌细胞超微结构;运用Western blot法检测心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62和Parkin的表达.比较糖尿病因素与七氟醚后处理两者对心肌缺血再灌注损伤的影响.结果糖尿病大鼠组的心肌缺血再灌注损伤较非糖尿病大鼠组严重,七氟醚后处理组的心肌缺血再灌注损伤较非七氟醚后处理组轻微,糖尿病因素与七氟醚后处理组在心肌缺血再灌注损伤方面存在交互作用(P<0.05).与NI/R组比较,NSP组血清cTnI浓度降低,心肌梗死面积减少,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05);与NI/R组比较,DMI/R组血清cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05);与NSP组比较,DMSP组血清cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05).结论糖尿病因素可以减弱七氟醚后处理的心肌保护作用,其机制可能与糖尿病大鼠的心肌线粒体自噬水平降低有关.

盐酸曲马多预处理对去甲肾上腺素诱导大鼠离体心肌细胞核转录因子-κB活化的影响

目的 观察盐酸曲马多预处理对去甲肾上腺素（NE）诱导大鼠离体心肌细胞核转录因子-κB（NF-κB）活化的影响.方法 采用1～3日龄新生SD大鼠建立体外培养心肌细胞实验模型,培养4～5d呈亚融合状态后用于实验.取16孔心肌细胞,按随机数字表法分为空白对照组及1×10-6、1×10-7、1×10-8 mmol/LNE组（NE1、NE2、NE3组）4组,每组4孔；另取12孔心肌细胞,按随机数字表法分为空白对照组、NE3组（1×10-8 mmol/L NE）、T＋NE组（1×10-8 mmol/L NE诱导前30 min加入1×10-5 mmol/L盐酸曲马多）3组,每组4孔.加入NE后24 h,采用免疫组化染色技术测定NF-κB的表达,采用流式细胞仪测定心肌细胞胞质NF-κB的活化程度.结果 免疫组化结果显示,NE3组细胞核周围和核内NF-κB阳性表达较空白对照组增多,NF-κB的平均吸光度（A）值和表达量[阳性单位（PU）]均明显高于空白对照组（A值：0.30±0.03比0.12±0.04,t=7.200,P=0.008；PU：39±14比22±6,t=4.610,P=0.020）.流式细胞仪检测显示,NE1组、NE2组、NE3组细胞质中NF-κB水平均明显低于空白对照组[（45.8±1.9）％、（38.3±1.8）％、（20.9±1.6）％比（54.6±0.6）％,均P＜ 0.05],且NE3组明显低于NE1组、NE2组（均P＜0.05）.T＋NE组细胞质中NF-κB水平明显高于NE3组[（57.8±0.4）％比（20.9±1.6）％,t=57.524,P=0.001].结论 盐酸曲马多预处理可抑制NE诱导大鼠心肌细胞NF-κB的活化,在细胞水平对缺血心肌起保护作用.