IGF-1激活20S蛋白酶体β5亚单位活性对N2a细胞活力的影响

目的:探索胰岛素样生长因子(IGF-1)对蛋白酶体的作用,并观察其对小鼠神经母细胞瘤来源的N2a细胞活力的影响,寻找维持细胞活力的有效手段。方法:体外培养N2a细胞加入不同浓度的IGF-1后,分析N2a细胞肽基谷氨酰肽水解酶样(PGPH-L)、胰蛋白酶样(T-L)和糜蛋白酶样(CT-L)三种蛋白酶体活性的变化,real time RT-PCR比较分别具有PGPH-L活性、T-L活性和CT-L活性的20S蛋白酶体β1亚单位(PSMBI)、20S蛋白酶体β2亚单位(PSMB2)、205蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)mRNA水平的变化。双荧光素酶实验检测IGF-1对PSMB5转录活性的影响。CCK8实验和Hoechst 3342/PI染色实验检测IGF-1和PSMB5对N2a细胞活性和凋亡的影响。结果:应用不同浓度的ICF-I干预N2a细胞后,PGPH-L活性和CT-L活性均显著增高,其中CT-L活性升高最显著,50 ng/ml和100 ng/ml ICF-1干预后,CT-L活性分别是对照组的1.32倍(P<0.05)和1.49倍(P<0.01),但是IGF-1干预后T-L活性无显著变化;real time RT-PCR结果显示应用100 ng/ml ICF-1作用后,PSMB5和PSMBI的mRNA表达水平显著上升(P<0.05);双荧光素酶结果显示IGF-1能够上调N2a细胞PSMB5转录活性;CCK8实验和Hoechst 3342/PI染色结果表明IGF-1干预使N2a细胞活力增强(P<0.01),调亡细胞减少;相反,敲低PSMBS后,N2a细胞活力减弱(P<0.05),调亡细胞增多;使用IGF-I干预PSMB5-siRNA组,发现PSMB5-iRNA组细胞活力较NC-siRNA组降低(P<0.05)、凋亡细胞增加。结论:ICF-1通过激活CT-L蛋白酶体活性,提高N2a细胞的活力。