核转录因子-κB激活在代谢综合征和2型糖尿病中的作用

代谢综合征是内脏肥胖、高血脂、高血压和胰岛素抵抗等因素综合作用的结果。越来越多的研究结果表明，核转录因子（NF）-κB是参与代谢综合征和相关联的2型糖尿病病理生理学机制的关键分子，可能成为干预治疗代谢综合征的新靶点。

心力衰竭时大鼠下丘脑室旁核内血管紧张素1型受体的变化对交感神经活动的影响

目的观察心力衰竭时大鼠下丘脑室旁核内血管紧张素1型受体(AT1-R)可能发生的改变及其对交感神经活动的影响。方法选取雄性SD大鼠,首先进行室旁核插管术,1周后采用左侧冠状动脉结扎术建立大鼠心力衰竭模型或假手术模型,同时各组大鼠分别经微型渗透泵通过室旁核插管持续给予AT1-R阻滞剂缬沙坦(VAL)0.05μg/h或人工脑脊液(aCSF)0.11μl/h干预。4周后检测心功能;电生理记录肾交感神经放电;计算肺/体质量比(L/BW)和右心室/体质量比(RVW/BW);测定血浆去甲肾上腺素(NE)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量;Western blot技术检测下丘脑室旁核内Fra-like和AT1-R蛋白表达情况。结果与假手术组比较,冠状动脉结扎术后4周大鼠的心功能明显降低;血浆NE和AngⅡ浓度增高(P<0.05);肾交感神经放电明显增强;室旁核内Fra-like和AT1-R蛋白表达增加(P<0.05)。与人工脑脊液治疗组比较,接受缬沙坦治疗的心力衰竭大鼠心功能有所改善,外周血NE和AngⅡ含量下降(P<0.05),肾交感神经放电减少(P<0.05),室旁核区域的Fra-like和AT1-R表达明显减少(P<0.05)。结论心力衰竭时室旁核区域的AT1-R被明显激活伴有交感神经放电增加,促进心力衰竭的发展。

早晚期轻度认知功能障碍和阿尔茨海默病的MRI分析及MRI与MMSE评分的相关性研究

目的：探讨轻度认知功能障碍（MCI）早晚期和阿尔茨海默病（AD）患者脑结构不同区域磁共振成像（MRI）的差异，及有差异脑区MRI与简易智力状态检查（MMSE）量表评分结果的相关性，为MCI和AD临床早期诊断提供帮助。方法选择2014年8月～2015年7月美国ADNI数据库中543例病例作为研究对象，按ADNI中的诊断标准将研究对象分为4组：认知功能正常的对照组（CN组）139例，轻度认知功能障碍早期（EMCI组）220例，轻度认知功能障碍晚期（LMCI组）108例，AD组76例，选取各组研究对象的MRI数据，获得272项人脑形态学特征，比较各组研究对象的MRI差异，同时采用MMSE量表进行认知评分，分析两者的相关性。结果右侧杏仁核皮层下体积，左下颞叶皮层体积，右侧内嗅区皮层体积，右下颞叶皮层体积，右上颞叶皮层厚度，左上颞叶皮层厚度及9个海马亚区体积等15项特征各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）；CN组、EMCI组、LMCI组和AD组呈逐渐下降趋势，且其脑区的变化与MMSE量表评分结果呈正相关（r=0.219～0.435，P〈0.01）。结论右侧杏仁核皮层下体积，左下颞叶皮层体积，右侧内嗅区皮层体积，右下颞叶皮层体积，右上颞叶皮层厚度，左上颞叶皮层厚度及9个海马亚区体积等15项特征与AD疾病进程密切相关，可结合MMSE评分作为临床观察主要指标，综合评价病情进展。

下丘脑室旁核内血管紧张素转换酶对心力衰竭大鼠交感神经活动的影响

目的观察心力衰竭时大鼠下丘脑室旁核内血管紧张素转换酶(ACE)的变化及其对心力衰竭发生发展和交感神经活动的影响。方法选取雄性SD大鼠36只,室旁核插管术后1周采用冠状动脉结扎术建立大鼠心力衰竭模型或假手术模型,同时室旁核插管连接微型渗透泵分别持续给予血管紧张素转换酶抑制剂赖诺普利(Lisinopril,0.46g/h.PVN)或空白对照药(Vehicle,0.11l/h.PVN)干预。4周后血流动力学检测心功能;记录肾交感神经放电活动;计算肺/体质量比(Lung/BW)和右心室/体质量比(RVW/BW);酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血浆NE和AngII含量;免疫组织化学染色观察室旁核ACE表达的变化;Western blot测定室旁核Fra-like蛋白含量。结果与假手术组比较心力衰竭大鼠左心室舒张末压(LVEDP)明显升高,左心室内压力最大上升或下降速率(±dp/dt max)和射血分数(LVEF)明显下降,左室前负荷增加(RVW/BW和Lung/BW明显升高,P<0.05);肾交感神经放电明显增强;血浆NE和AngII浓度增高(P<0.05);室旁核内Fra-like和ACE表达增加(P<0.05)。与Vehicle治疗的心力衰竭大鼠比较,接受赖诺普利治疗后心力衰竭大鼠LVEDP、RVW/BW和lung/BW有所降低(P<0.05),±dp/dtmax升高(P<0.05),LVEF无明显改变,外周血NE和ANGII含量下降(P<0.05),室旁核Fra-like和ACE表达明显减少(P<0.05),肾交感神经放电减少(P<0.05)。结论心力衰竭时室旁核ACE被明显激活引起交感神经放电增加,心功能减退。

日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂干预脂多糖诱导的小鼠脓毒症

目的探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒症的干预效果。方法 54只BALB/c小鼠适应性饲养1周后,随机分为正常对照组(PBS组,A组)、脓毒症造模组(PBS+LPS组,B组)、蛋白干预组(PBS+LPS+Sj Cystatin组,C组)。A组腹腔注射PBS(100μL),B组、C组腹腔注射含LPS(10 mg/kg)的PBS(100μL),其中C组小鼠于注射LPS后30 min腹腔注射含25μg Sj Cystatin蛋白的PBS(100μL)。每组随机抽取10只,造模后24 h取小鼠血清及肝、肺、肾组织,酶联免疫吸附试验(ELISA)验检血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,全自动生化分析仪检测ALT、AST、BUN和Cr水平;肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤;每组余8只小鼠,造模后记录小鼠72 h生存率的差别且观察小鼠状态的改变。结果 3组小鼠的72 h生存率具有统计学差异(P<0.05),与A组(100%)相比,B组(0%)72 h生存率降低(P<0.05),经过Sj Cystatin蛋白治疗后,C组生存率较B组增高(36%)。与A组相比,B组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清中ALT、AST、BUN、Cr、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与B组相比,C组调节因子IL-10水平明显升高,肝、肾、肺组织损伤明显减轻,且血清中上述肝肾功能检测指标及促炎因子水平明显降低(P<0.05)。结论 Sj Cystatin对LPS诱导的脓毒症有显著的治疗作用。

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制

目的:观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用并探讨其可能的分子机制。方法:24只SD大鼠随机分为正常对照(NC,n=8)组和糖尿病造模组(n=16)。糖尿病造模组大鼠采用55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,糖尿病模型大鼠随机分为糖尿病(DM)组和糖尿病+辛伐他汀(DM+Sim)组。DM+Sim组大鼠每天给予辛伐他汀40 mg/kg灌胃,1次/日,连续4周。采用组织病理学方法观察肾脏的形态学改变和间质纤维化;采用分子生物学方法检测肾脏组织中内质网应激、炎性因子的表达以及细胞凋亡。结果:(1)与NC组相比,DM组可见肾小球和肾小管间质有明显的病理学改变,胶原纤维明显红染,呈不均匀分布; DM+Sim组形态学以及纤维化有明显改善。(2) DM组大鼠肾组织GRP78、p-IRE1α、NF-κB p65、MCP-1表达均高于NC组(P<0.05),DM+Sim组GRP78、p-IRE1α、NF-κB p65、MCP-1表达较DM组均下降(P<0.05)。(3)TUNEL法检测,NC组肾小球及肾小管存在少量凋亡的细胞,DM组肾小球及肾小管存在大量凋亡的细胞(P <0.01);与DM组比较,DM+Sim组凋亡的细胞明显减少(P<0.01)。结论:给予糖尿病大鼠辛伐他汀后,肾脏形态学以及纤维化明显改善,细胞凋亡明显减少。其对糖尿病肾脏的保护作用与抑制内质网应激和NF-κB炎症信号通路及减少肾脏细胞的凋亡有关。

阻断肿瘤坏死因子-α的作用对慢性充血性心力衰竭时神经递质失衡的影响

目的 通过中枢阻断肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的作用,观察对慢性充血性心力衰竭（心衰）时神经递质失衡的影响,探讨中枢炎性因子对心衰时交感兴奋的作用.方法 采用结扎冠状动脉左前降支致心肌梗死的方法制备心衰大鼠模型,假手术对照只穿线不结扎.对心衰大鼠和假手术大鼠持续4周经侧脑室灌流TNF-α阻断剂依那西普（etanercept,ETN） 10μg/h或人工脑脊液（aCSF）;另一种处理则是以腹腔注射方式给予相似剂量的ETN.4周后测定心脏功能学指标和形态学指标（LVEDP、±dp/dt max、RV/BW、Lung/BW）和肾交感神经放电（RSNA）; ELISA技术测定促炎因子（PIC）在血浆和下丘脑室旁核（PVN）中的含量以及血中血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）水平；PVN中谷氨酸（Glu）、去甲肾上腺素（NE）及血中儿茶酚胺的含量利用高效液相色谱法获得；免疫组织化学染色确定PVN内酪氨酸羟化酶（TH）和谷氨酸脱羧酶（GAD67）,后二者分别为NE和γ-氨基丁酸（GABA）的限速酶,以及神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达.结果 与假手术组相比,心衰大鼠PVN区NE和TH表达增强,GAD67和nNOS表达减弱；血浆炎性因子、儿茶酚胺、血管紧张素Ⅱ增多；肾交感神经活动增强.对心衰大鼠经侧脑室持续灌流ETN可减轻上述神经递质失衡现象和心衰时肾交感神经的过度兴奋表现；而经腹腔灌注相似剂量的ETN对心衰大鼠PVN处的NE、TH、GAD67和nNOS的含量没有影响,对肾交感神经兴奋也无作用,说明上述影响是通过位于中枢的PIC起作用.结论 心衰时PVN区炎性因子增高,引起中枢兴奋性神经递质增多,抑制性神经递质减少,神经递质平衡失调,从而增强交感兴奋促进心衰发展.

轻度认知障碍及阿尔茨海默病的sMRI分析

目的探讨轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)各脑区结构性磁共振(sMRI)的特征,发现特征性指标,从而为早期诊断提供帮助。方法随机选取2014年8月~2015年7月ADNI数据库中编号为4018~5210的研究对象543例,根据阿尔茨海默病神经影像学计划(ADNI)数据库诊断标准分为四组:认知功能正常组(CN)139例,早期轻度认知障碍组(EMCI)220例,晚期轻度认知障碍组(LMCI)108例,AD组76例,获得研究对象简易精神状态评价量表(mini-mental state examination,MMSE)及272项结构性MRI(structural MRI,sMRI)数据。将sMRI数据进行单因素方差分析、多重比较、非参数检验、配对比较分析、多元线性回归分析等统计学方法,发现具有疾病预测意义的特征指标。结果 272项sMRI数据分析,获得CN、EMCI、LMCI、AD四组间差异均有统计学意义的指标28项,其中22项为左右脑区配对部位。左右脑区进行配对比较分析,左半球萎缩程度更严重。28项sMRI数据与MMSE经多元线性回归分析得出,左海马下托体积对MMSE量表评分影响最大。结论随着MCI发病向AD进展,脑萎缩程度逐渐递增,且左半球在疾病进展中萎缩程度更严重,主要集中在边缘系统。其中,左海马下托体积对MMSE量表评分影响最大。

新生小鼠Lin^- Sca-1^＋心脏干细胞分离培养方案的优化

心脏原位干细胞(cardiac stem cells,CSCs)治疗心肌梗死具有公认的疗效,但是其分离及培养技术尚不完善,这是制约其临床应用的关键技术问题。为解决这一问题,本研究旨在优化Lin^-(lineage-negative)Sca-1^+(stem cell antigen-1-positive)CSCs分离方案。用组织块酶解法(混合酶液)分离C57BL/6J新生(出生0～3天)小鼠Lin^- Sca-1^+ CSCs。在已有的研究基础上,严格控制消化时间、次数、温度、搅拌速度、离心时间和转速等多重因素,结合免疫磁珠分选获得纯度较高的Lin^- Sca-1^+ CSCs。此后,对分离纯化的原代细胞进行培养,优化培养基成分、换液时间和方式。采用流式细胞术及免疫荧光染色技术,检测分选细胞的纯度及传代培养细胞中Sca-1^+细胞的百分比。结果显示:(1)本法分离获得的Lin^- Sca-1^+ CSCs纯度高达(85.03±5.60)%;(2)离体培养过程中,细胞生长状态良好,原代培养5天开始有干细胞克隆球生成,培养7天即可铺满皿底,生长曲线显示,离体培养第3天细胞进入对数增长期;(3)免疫组化染色结果显示:干细胞特异性标志Sca-1的表达随着传代的进行有一定的衰减。流式细胞术检测结果显示,第一代、第三代和第五代培养细胞的Sca-1阳性率分别为(71.82±2.63)%、(58.38±3.70)%、(46.19±4.72)%。以上结果表明,本研究所建立的组织块酶解法结合免疫磁珠分选法可获得纯度较高的Lin^- Sca-1^+ CSCs,同时干细胞离体培养体系相对稳定。本研究所建立的分离及培养方法简单稳定、可靠有效,为进一步研究Sca-1^+ CSCs治疗心肌梗死奠定了良好的方法学基础。

辛伐他汀对糖尿病大鼠心脏炎症反应的干预作用及可能机制研究

目的探讨辛伐他汀对糖尿病大鼠心脏组织炎症反应的干预作用及可能机制。方法将24只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和糖尿病+辛伐他汀组(DM+S),每组各8只。DM组和DM+S组予STZ腹腔注射建立糖尿病模型,造模72h后连续3d从大鼠尾静脉采血检测血糖。DM+S组予辛伐他汀灌胃4周,其他两组予等量生理盐水直至实验结束。实验结束后,抽取各组腹主动脉血检测TC和TG含量;随后取心脏,苦味酸天狼星红(Sirius Red)染色观察心脏组织炎症纤维化,免疫组织化学法测定大鼠核转录因子κB(NF-κB)p65和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达;Western blot检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和NF-κB p65蛋白的表达。结果血糖结果显示,造模前各组血糖比较,差异无统计学意义,STZ造模后,DM组和DM+S组血糖升高,且基本保持稳定。与NC组比较,DM组血浆TC和TG含量升高(P<0.01);予辛伐他汀后,DM+S组TC和TG较DM组降低(P<0.05或P<0.01)。苦味酸天狼星红染色结果显示,与NC组比较,DM组心肌组织胶原成分增多,且排列紊乱,心肌间质纤维化明显(P<0.01);DM+S组心肌纤维化程度较DM组减轻,心肌胶原沉着明显减少(P<0.01)。免疫组织化学检测结果显示,各组NF-κB p65,MCP-1均有表达,DM组NF-κB p65在细胞核表达量增加(P<0.01),MCP-1在细胞质表达量增加(P<0.01);DM+S组NF-κB p65和MCP-1表达量下降(P<0.01)。Western blot检测结果表明,DM组心脏组织GRP78和NF-κB p65蛋白表达均高于NC组(P<0.01),DM+S组GRP78和NF-κB p65蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01)。结论糖尿病大鼠予辛伐他汀后,心肌纤维排列紊乱及炎症浸润明显改善,纤维化减少。辛伐他汀对糖尿病心脏损伤的保护作用通过抑制内质网应激和炎症反应来实现,与抑制NF-κB炎症信号通路有关。