miR-203靶向调控CUL2对HPV16阳性宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的探讨微小RNA 203-3p(miR-203)靶向调控枯灵素2(CUL2)对人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法收集2018年9月-2019年9月于山西医科大学第二医院妇产科行宫颈癌筛查,HPV检测为单一HPV16阳性,病理检查为宫颈鳞癌(SCC)的样本及相应癌旁组织(对照组)各10份。采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SCC与相应癌旁组织,以及人SCC细胞(SiHa)与人永生化表皮细胞(HaCaT)中miR-203的表达。采用GO和KEGG富集法分析miR-203参与的功能和通路,TargetScan网站及双荧光素酶报告基因实验验证miR-203与CUL2的靶向调控作用。将miR-203模拟物或抑制剂转染至SiHa细胞,建立过表达或低表达miR-203的细胞模型,采用qRT-PCR和Western blotting检测CUL2 mRNA及蛋白的表达;采用CCK-8法、划痕实验、AnnexinⅤ-APC/PI双染色法评估SiHa细胞的增殖、迁移和凋亡能力。结果qRTPCR检测分析结果显示,与相应癌旁组织和HaCaT细胞相比,miR-203在SCC组织和SiHa细胞中的表达水平均明显降低(P<0.01)。GO和KEGG富集结果显示,miR-203广泛参与泛素化过程并与恶性肿瘤参与的信号通路有关。TargetScan与双荧光素酶报告基因实验表明,miR-203与CUL2存在靶向调控关系(P<0.01)。qRT-PCR及Western blotting结果表明,过表达miR-203时,CUL2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),而低表达miR-203则可上调CUL2 mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。CCK-8、划痕实验和AnnexinⅤ-APC/PI双染结果显示,过表达miR-203可降低SiHa细胞的增殖率和迁移率(P<0.01),升高细胞凋亡率(P<0.05);相反,低表达miR-203可升高SiHa细胞的增殖率和迁移率(P<0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论miR-203可能通过靶向CUL2抑制HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa的生物学特性,有望成为宫颈癌诊断和治疗的一个新的候选基因。

CXC亚家族趋化因子13在乳腺癌组织中表达及其调控网络的生物信息学分析

目的通过生物信息学方法分析CXC亚家族趋化因子13(CXC subfamily chemokine 13,CXCL13)在乳腺癌组织中的表达及其调控网络。方法利用多种在线数据库分析CXCL13在乳腺癌组织中的表达、基因变化及相关的功能网络,筛选CXCL13相关的差异表达基因,进行基因本体论及京都基因与基因组百科全书信号通路分析,同时分析CXCL13正相关基因集在乳腺癌中的激酶、转录因子及miRNA类型的靶点网络。结果 CXCL13在乳腺癌组织中过表达(P<0.01);扩增是CXCL13在乳腺癌中最常见的突变类型;CXCL13基因的变化对G蛋白偶联受体的激活、信号传递及T细胞激活等多个过程具有深远的影响;CXCL13与几种肿瘤相关激酶(如FYN)、转录因子(如NF-κB)及miRNA(如miRNA-146a)特异相关。结论 CXCL13可能是乳腺癌治疗中一个潜在的靶点,为进一步研究CXCL13在肿瘤发生中的作用奠定了基础。